研究表明性類固醇激素廣泛地存在于軟體動(dòng)物中，并在軟體動(dòng)物生殖過(guò)程中發(fā)揮著潛在的重要作用，但是目前對(duì)軟體動(dòng)物內(nèi)分泌系統(tǒng)的了解還十分有限，而且在軟體動(dòng)物性類固醇激素的來(lái)源和功能機(jī)制等問(wèn)題上還存有爭(zhēng)議。櫛孔扇貝（Chlamys farreri）是一種雌雄異體、性別穩(wěn)定的雙殼貝類，是我國(guó)北方重要的經(jīng)濟(jì)物種。本研究以櫛孔扇貝為研究對(duì)象，首先檢測(cè)了櫛孔扇貝年生殖周期性腺中雌二醇和睪酮的含量逐月變化，探討了性類固醇激素在櫛孔扇貝生殖過(guò)程中的潛在作用；克隆并鑒定出了17β-羥類固醇脫氫酶8（17β-HSD8）基因，并對(duì)其序列特征和體外催化活性進(jìn)行了分析；進(jìn)一步，研究分析了17β-HSD8在櫛孔扇貝性腺和胚胎、幼蟲(chóng)中的時(shí)空表達(dá)模式，并探討了其在性類固醇激素合成代謝途徑、配子發(fā)生和個(gè)體早期發(fā)育過(guò)程中的潛在作用。為了探討性類固醇激素在櫛孔扇貝生殖過(guò)程中的潛在作用，本文通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（ELISA）檢測(cè)并分析了2012年1月到12月期間櫛孔扇貝性腺中雌二醇和睪酮含量的變化。根據(jù)配子發(fā)生和排放過(guò)程的組織學(xué)特征，我們將櫛孔扇貝性腺年生殖周期劃分為休止期、增殖期、生長(zhǎng)期、成熟期、第一次排放期、恢復(fù)期和第二次排放... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)海洋大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1. 脊椎動(dòng)物類固醇激素簡(jiǎn)介
    2. 軟體動(dòng)物性類固醇激素研究進(jìn)展
        2.1 性類固醇激素在軟體動(dòng)物生殖過(guò)程中的潛在作用
            2.1.1 性別決定和性別分化
            2.1.2 配子發(fā)生
            2.1.3 配子排放
        2.2 性類固醇激素的作用機(jī)制
        2.3 軟體動(dòng)物性類固醇激素合成與代謝途徑
    3. 17β-羥類固醇脫氫酶
        3.1 哺乳動(dòng)物 17β-羥類固醇脫氫酶結(jié)構(gòu)與功能
        3.2 低等動(dòng)物 17β-羥類固醇脫氫酶研究進(jìn)展
        3.3 17β-羥類固醇脫氫酶 8 研究進(jìn)展
    4. 研究目的及意義
第二章 性類固醇激素在櫛孔扇貝生殖過(guò)程中的作用
    1. 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
            1.1.3 試劑及耗材
        1.2 方法
            1.2.1 性腺組織學(xué)觀察
            1.2.2 性腺性類固醇激素水平檢測(cè)
            1.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2. 結(jié)果
        2.1 水溫變化
        2.2 性腺指數(shù)變化
        2.3 性腺發(fā)育和配子發(fā)生組織學(xué)特征
        2.4 性腺發(fā)育階段頻率分布
        2.5 性腺激素水平變化
        2.6 睪酮/雌二醇（T/E2）比值變化
        2.7 性腺激素水平與配子發(fā)生過(guò)程的相關(guān)性
    3. 討論
        3.1 配子發(fā)生特征及性腺分期
        3.2 性激素在生殖過(guò)程中的潛在作用
            3.2.1 激素水平的性別二態(tài)性
            3.2.2 在性別決定和性別分化過(guò)程中的作用
            3.2.3 在配子發(fā)生過(guò)程中的潛在作用
            3.2.4 在配子排放過(guò)程中的潛在作用
            3.2.5 潛在的芳香化酶活性
    4. 小結(jié)
第三章 櫛孔扇貝 17β-羥類固醇脫氫酶 8 克隆及序列特征
    1. 材料方法
        1.1 材料
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
            1.1.3 試劑及耗材
        1.2 方法
            1.2.1 總 RNA 提取
            1.2.2 RACE-ready cDNA 第一鏈合成
            1.2.3 全長(zhǎng) cDNA 克隆
            1.2.4 生物信息學(xué)分析
            1.2.5 重組蛋白的原核表達(dá)、純化及復(fù)性
            1.2.6 重組蛋白體外酶活性測(cè)定
    2. 結(jié)果
        2.1 17β-HSD8 全長(zhǎng) cDNA 及其序列特征
        2.2 17β-HSD8 多序列比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化分析
        2.3 17β-HSD8 蛋白生物信息學(xué)分析
        2.4 17β-HSD8 重組蛋白的原核表達(dá)、純化及復(fù)性
        2.5 17β-HSD8 重組蛋白體外催化活性
    3. 討論
        3.1 櫛孔扇貝 17β-HSD8 序列特征
        3.2 櫛孔扇貝 17β-HSD8 的催化活性
    4. 小結(jié)
第四章 櫛孔扇貝 17β-羥類固醇脫氫酶 8 的表達(dá)及功能分析
    1. 材料方法
        1.1 材料
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
            1.1.3 試劑及耗材
        1.2 方法
            1.2.1 總 RNA 提取
            1.2.2 cDNA 第一鏈合成
            1.2.3 半定量 RT-PCR
            1.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（qRT-PCR）
            1.2.5 原位雜交
            1.2.6 Western blot
            1.2.7 免疫組化
            1.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2. 結(jié)果
        2.1 17β-HSD8 基因 mRNA 組織表達(dá)特征
        2.2 櫛孔扇貝 17β-HSD8 性腺發(fā)育過(guò)程中的時(shí)間表達(dá)特征
            2.2.1 17β-HSD8 mRNA 相對(duì)表達(dá)量
            2.2.2 17β-HSD8 蛋白表達(dá)量
        2.3 櫛孔扇貝 17β-HSD8 在性腺中的空間表達(dá)特征
            2.3.1 17β-HSD8 mRNA 細(xì)胞學(xué)定位
            2.3.2 17β-HSD8 蛋白的細(xì)胞學(xué)定位
        2.4 櫛孔扇貝早期發(fā)育過(guò)程中 17β-HSD8 mRNA 的表達(dá)圖式
            2.4.1 17β-HSD8 mRNA 相對(duì)表達(dá)量
            2.4.2 17β-HSD8 mRNA 空間表達(dá)
    3. 討論
        3.1 17β-HSD8 參與調(diào)控雌二醇介導(dǎo)的配子發(fā)生過(guò)程
        3.2 17β-HSD8 在配子發(fā)生過(guò)程中的生理功能
        3.3 17β-HSD8 在早期發(fā)育過(guò)程中的潛在作用
        3.4 潛在的 17β-HSD8 轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制
        3.5 17β-HSD8 在脂質(zhì)代謝途徑中的潛在作用
    4. 小結(jié)
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷
學(xué)術(shù)成果



本文編號(hào)：3172922