心臟形成是一個(gè)錯(cuò)綜復(fù)雜的過(guò)程,信號(hào)途徑與轉(zhuǎn)錄因子和粘附分子對(duì)心臟細(xì)胞增殖、分化,心臟細(xì)胞的多樣性以及不同心臟細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生起調(diào)控作用。通過(guò)構(gòu)建心臟組織高表達(dá)基因啟動(dòng)子和增強(qiáng)子的轉(zhuǎn)基因品系來(lái)確定基因的生物學(xué)功能,對(duì)理解心臟發(fā)育的機(jī)制和發(fā)展有效地治療手段奠定了理論基礎(chǔ)。GFP和RFP可在不同物種中作為活體報(bào)告基因,真實(shí)地追蹤基因的表達(dá)和蛋白質(zhì)的定位,,因此可用于研究基因?qū)π呐K發(fā)育的調(diào)控功能。To12是發(fā)現(xiàn)于青鳉中的一個(gè)魚(yú)源轉(zhuǎn)座系統(tǒng),利用To12轉(zhuǎn)座酶系統(tǒng)構(gòu)建轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)品系能顯著提高轉(zhuǎn)基因成功的效率,該To12轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)為斑馬魚(yú)心臟發(fā)育候選基因的功能研究提供了很大方便。HDGC3基因是本研究室篩選鑒定的一個(gè)在心臟和肌肉中高表達(dá)的心臟發(fā)育候選基因。本室前期研究結(jié)果表明HDGC3在斑馬魚(yú)的心臟和肌肉組織中有高水平的表達(dá),為了進(jìn)一步研究HDGC3在心臟發(fā)育過(guò)程中的功能,本文基于To12轉(zhuǎn)基因技術(shù),建立了若干心臟轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)模型。我們分別利用斑馬魚(yú)cmlc2和Titin啟動(dòng)子構(gòu)建了轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體pTo12（cmlc2:HDGC3-EGFP）和pTo12（Titin: HDGC3-EGFP）,將這兩... 

【文章來(lái)源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 斑馬魚(yú)
    1.2 斑馬魚(yú)轉(zhuǎn)基因概述
        1.2.1 轉(zhuǎn)基因技術(shù)
        1.2.2 Tol2轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)
        1.2.3 Gateway克隆技術(shù)
    1.3 斑馬魚(yú)心血管發(fā)育及調(diào)控機(jī)理
        1.3.1 斑馬魚(yú)心血管發(fā)育過(guò)程
        1.3.2 斑馬魚(yú)心血管發(fā)育的分子調(diào)控機(jī)制
        1.3.3 HDGC3與心臟發(fā)育
    1.4 本課題的研究意義、內(nèi)容和目的
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 質(zhì)粒
        2.1.3 斑馬魚(yú)品系
        2.1.4 主要試劑、酶和試劑盒
        2.1.5 主要耗材及儀器
        2.1.6 主要是試劑的配制
    2.2 方法
        2.2.1 分子克隆
        2.2.2 轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)的構(gòu)建
3 結(jié)果與分析
    3.1 pTol2（cmlc2：HDGC3-EGFP）表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)分析..
        3.1.1 pTol2（cmlc2：HDGC3-EGFP）表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.1.2 pTol2（cmlc2：HDGC3-EGFP）表達(dá)載體的表達(dá)分析
    3.2 pTol2（HDGC3：EGFP）表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)分析
        3.2.1 pTol2（HDGC3：EGFP）表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.2 pTol2（HDGC3：EGFP）表達(dá)載體的表達(dá)分析
    3.3 pTol2（Titin：HDGC3-EGFP）表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)分析
        3.3.1 pTol2（Titin：HDGC3-EGFP）表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.3.2 pTol2（Titin：HDGC3-EGFP）表達(dá)載體的表達(dá)分析
    3.4 HSP-FLP重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其表達(dá)分析
        3.4.1 pMD18-T-FLP克隆載體鑒定
        3.4.2 HSP-FLP-EGFP表達(dá)載體的鑒定
        3.4.3 pTol2-HSP-FLP-ires-EGFP表達(dá)載體的鑒定
        3.4.4 pTol2-HSP-FLP-EGFP重組表達(dá)載體顯微注射驗(yàn)證
        3.4.5 HSP-FLP重組蛋白表達(dá)載體的表達(dá)分析
        3.4.6 HSP-FLP重組蛋白表達(dá)載體轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)的鑒定
4 討論
    4.1 綠色熒光蛋白
    4.2 利用Tol2構(gòu)建的轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)
    4.3 啟動(dòng)子誘捕方法在模式生物中的潛在應(yīng)用
    4.4 關(guān)于Gateway重組系統(tǒng)
    4.5 構(gòu)建轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)的意義
5 結(jié)語(yǔ)
6 其他工作
    6.1 重組質(zhì)粒pET-28a-Dnajb6b的構(gòu)建與鑒定
    6.2 Dnajb6b融合蛋白誘導(dǎo)表達(dá)及純化
    6.3 Dnajb6b基因蛋白的多克隆抗體的制備與特異性檢測(cè)
    6.4 Dnajb6b基因蛋白在斑馬魚(yú)不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)
參考文獻(xiàn)
附錄一
附錄二
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]利用GATA-2調(diào)控成分制備組織特異性表達(dá)GFP的轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)[J]. 孟安明,林碩.  科學(xué)通報(bào). 1999(21)
[2]轉(zhuǎn)基因魚(yú)模型的建立[J]. 朱作言,許克圣,謝岳峰,李國(guó)華,何玲.  中國(guó)科學(xué)（B輯 化學(xué) 生命科學(xué) 地學(xué)）. 1989(02)



本文編號(hào)：3144606