心臟形成是一個錯綜復雜的過程,信號途徑與轉錄因子和粘附分子對心臟細胞增殖、分化,心臟細胞的多樣性以及不同心臟細胞的形態(tài)發(fā)生起調控作用。通過構建心臟組織高表達基因啟動子和增強子的轉基因品系來確定基因的生物學功能,對理解心臟發(fā)育的機制和發(fā)展有效地治療手段奠定了理論基礎。GFP和RFP可在不同物種中作為活體報告基因,真實地追蹤基因的表達和蛋白質的定位,,因此可用于研究基因對心臟發(fā)育的調控功能。To12是發(fā)現(xiàn)于青鳉中的一個魚源轉座系統(tǒng),利用To12轉座酶系統(tǒng)構建轉基因斑馬魚品系能顯著提高轉基因成功的效率,該To12轉座子系統(tǒng)為斑馬魚心臟發(fā)育候選基因的功能研究提供了很大方便。HDGC3基因是本研究室篩選鑒定的一個在心臟和肌肉中高表達的心臟發(fā)育候選基因。本室前期研究結果表明HDGC3在斑馬魚的心臟和肌肉組織中有高水平的表達,為了進一步研究HDGC3在心臟發(fā)育過程中的功能,本文基于To12轉基因技術,建立了若干心臟轉基因斑馬魚模型。我們分別利用斑馬魚cmlc2和Titin啟動子構建了轉基因表達載體pTo12（cmlc2:HDGC3-EGFP）和pTo12（Titin: HDGC3-EGFP）,將這兩... 

【文章來源】：湖南師范大學湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 斑馬魚
    1.2 斑馬魚轉基因概述
        1.2.1 轉基因技術
        1.2.2 Tol2轉座子系統(tǒng)
        1.2.3 Gateway克隆技術
    1.3 斑馬魚心血管發(fā)育及調控機理
        1.3.1 斑馬魚心血管發(fā)育過程
        1.3.2 斑馬魚心血管發(fā)育的分子調控機制
        1.3.3 HDGC3與心臟發(fā)育
    1.4 本課題的研究意義、內容和目的
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 質粒
        2.1.3 斑馬魚品系
        2.1.4 主要試劑、酶和試劑盒
        2.1.5 主要耗材及儀器
        2.1.6 主要是試劑的配制
    2.2 方法
        2.2.1 分子克隆
        2.2.2 轉基因斑馬魚的構建
3 結果與分析
    3.1 pTol2（cmlc2：HDGC3-EGFP）表達載體的構建及其表達分析..
        3.1.1 pTol2（cmlc2：HDGC3-EGFP）表達載體的構建
        3.1.2 pTol2（cmlc2：HDGC3-EGFP）表達載體的表達分析
    3.2 pTol2（HDGC3：EGFP）表達載體的構建及其表達分析
        3.2.1 pTol2（HDGC3：EGFP）表達載體的構建
        3.2.2 pTol2（HDGC3：EGFP）表達載體的表達分析
    3.3 pTol2（Titin：HDGC3-EGFP）表達載體的構建及其表達分析
        3.3.1 pTol2（Titin：HDGC3-EGFP）表達載體的構建
        3.3.2 pTol2（Titin：HDGC3-EGFP）表達載體的表達分析
    3.4 HSP-FLP重組質粒的構建及其表達分析
        3.4.1 pMD18-T-FLP克隆載體鑒定
        3.4.2 HSP-FLP-EGFP表達載體的鑒定
        3.4.3 pTol2-HSP-FLP-ires-EGFP表達載體的鑒定
        3.4.4 pTol2-HSP-FLP-EGFP重組表達載體顯微注射驗證
        3.4.5 HSP-FLP重組蛋白表達載體的表達分析
        3.4.6 HSP-FLP重組蛋白表達載體轉基因斑馬魚的鑒定
4 討論
    4.1 綠色熒光蛋白
    4.2 利用Tol2構建的轉基因斑馬魚
    4.3 啟動子誘捕方法在模式生物中的潛在應用
    4.4 關于Gateway重組系統(tǒng)
    4.5 構建轉基因斑馬魚的意義
5 結語
6 其他工作
    6.1 重組質粒pET-28a-Dnajb6b的構建與鑒定
    6.2 Dnajb6b融合蛋白誘導表達及純化
    6.3 Dnajb6b基因蛋白的多克隆抗體的制備與特異性檢測
    6.4 Dnajb6b基因蛋白在斑馬魚不同發(fā)育時期的表達
參考文獻
附錄一
附錄二
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]利用GATA-2調控成分制備組織特異性表達GFP的轉基因斑馬魚[J]. 孟安明,林碩.  科學通報. 1999(21)
[2]轉基因魚模型的建立[J]. 朱作言,許克圣,謝岳峰,李國華,何玲.  中國科學（B輯 化學 生命科學 地學）. 1989(02)



本文編號：3144606