甘露糖受體（mannose receptor,MR）是一種模式識(shí)別受體（pattern-recognition receptors,PRRs）,在病原微生物引起的機(jī)體免疫應(yīng)答中至關(guān)重要。關(guān)于哺乳動(dòng)物和鳥類的甘露糖受體研究很多,但是魚類甘露糖受體的研究甚少。本論文分離并鑒定了溫和氣單胞菌是斑馬魚的致病菌,在此基礎(chǔ)上,研究了斑馬魚甘露糖受體和溫和氣單胞菌感染的關(guān)系,主要結(jié)果如下:1.克隆得到了斑馬魚的甘露糖受體基因全長(zhǎng),命名為zfMR,基因的cDNA全長(zhǎng)為6248 bp,其中5’UTR為119 bp,3’UTR為1842 bp,ORF為4287 bp,編碼1428 aa。預(yù)測(cè)的氨基酸序列表明,zfMR包含一個(gè)富含半胱氨酸區(qū)域,一個(gè)Ⅱ型纖連蛋白區(qū)域,八個(gè)串聯(lián)的C型凝集素樣區(qū)域,一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域和一個(gè)胞質(zhì)尾區(qū)。構(gòu)建的進(jìn)化樹表明,斑馬魚zfMR與草魚和團(tuán)頭魴的MR聚為一支組成硬骨魚類分支。2.甘露糖受體的mRNA在健康斑馬魚的肝臟、脾臟、腎臟、腸道、鰓、腦、心臟、肌肉和皮膚中均有表達(dá),并且在腎臟中的的表達(dá)水平最高。3.溫和氣單胞菌感染斑馬魚后,用qRT-PCR方法檢測(cè)到其免疫相關(guān)組織（肝臟、脾臟、... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表（Abbreviation）
1 前言
    1.1 課題的由來(lái)與意義
    1.2 國(guó)內(nèi)外甘露糖受體的研究概況
        1.2.1 甘露糖受體的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 甘露糖受體的功能
        1.2.4 甘露糖受體與疾病的關(guān)系
        1.2.5 調(diào)控甘露糖受體表達(dá)的因素
        1.2.6 本研究的目的和意義
2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 病原
    2.2 主要儀器及廠家
    2.3 主要試劑
    2.4 主要溶液配制
        2.4.1 常用培養(yǎng)基
        2.4.2 感受態(tài)相關(guān)試劑配制
        2.4.3 瓊脂糖電泳相關(guān)溶液配制
    2.5 實(shí)驗(yàn)方法
        2.5.1 病原菌的分離與純化
        2.5.2 菌種的保藏
        2.5.3 純化菌株的人工感染實(shí)驗(yàn)
        2.5.4 菌株的鑒定
        2.5.5 總RNA的提取
        2.5.6 cDNA第一鏈的合成
        2.5.7 zfMR基因cDNA片段的克隆
        2.5.8 zfMR基因cDNA 3’末端擴(kuò)增
        2.5.9 zfMR基因cDNA 5’末端擴(kuò)增
        2.5.10 生物信息學(xué)分析
        2.5.11 zfMR基因表達(dá)的定量分析
        2.5.12 Western blotting檢測(cè)zf MR蛋白水平的變化
        2.5.13 免疫組化檢測(cè)zf MR蛋白水平的變化
3 結(jié)果和分析
    3.1 病原菌的分離純化和人工感染結(jié)果
    3.2 ZA菌株 16SrDNA的PCR結(jié)果
    3.3 ZA菌株的生理生化鑒定結(jié)果
    3.4 RNA樣品的制備與鑒定
    3.5 zfMR基因的生物信息學(xué)分析
        3.5.1 zfMR基因cDNA全長(zhǎng)及序列特征
        3.5.2 zfMR的系統(tǒng)進(jìn)化樹分析
    3.6 zfMR基因的表達(dá)分析
        3.6.1 健康魚不同組織內(nèi)zfMR基因的表達(dá)
        3.6.2 A. sobria刺激后免疫相關(guān)組織zfMR、IL-1β 和TNF-α 基因的表達(dá)
        3.6.3 Western blot檢測(cè)zf MR蛋白水平的變化
        3.6.4 免疫組化法檢測(cè)zf MR蛋白水平的變化
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
碩士期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]甘露糖受體在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義[J]. 郭林娜,高恒宇,何苗,劉丹.  世界華人消化雜志. 2016(01)
[2]甘露糖受體結(jié)構(gòu)、功能、表達(dá)和應(yīng)用研究的新進(jìn)展[J]. 劉小玲,曾令兵.  水產(chǎn)學(xué)雜志. 2013(01)
[3]中國(guó)斑馬魚研究發(fā)展歷程及現(xiàn)狀[J]. 賈順姬,孟安明.  遺傳. 2012(09)
[4]甘露糖受體在宿主免疫應(yīng)答中的作用[J]. 張典,梅其炳.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2011(02)
[5]魚類髓樣分化因子88（MyD88）的研究進(jìn)展[J]. 鄭琳琳,張圣強(qiáng),安利國(guó).  科技信息. 2009(34)
[6]天然免疫識(shí)別機(jī)制及天然免疫受體的相互調(diào)節(jié)[J]. 張彩,田志剛.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2008(02)
[7]由不同接頭分子介導(dǎo)的Toll樣受體信號(hào)通路[J]. 張煒,袁金鐸,安利國(guó).  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2006(04)

碩士論文
[1]團(tuán)頭魴甘露糖受體CTLD4-8結(jié)構(gòu)域抗體制備及功能分析[D]. 趙曉恒.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]草魚甘露糖受體基因的克隆與表達(dá)分析[D]. 王莉.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]實(shí)驗(yàn)用斑馬魚常見病菌的分離檢測(cè)及其致病性研究[D]. 楊遲.東華大學(xué) 2014
[4]團(tuán)頭魴甘露糖受體基因的克隆與表達(dá)研究[D]. 湯孝成.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[5]甘露糖受體在脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷中的表達(dá)[D]. 林志輝.浙江大學(xué) 2009



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