性腺分化的組織學(xué)觀察對脊椎動物性腺分化機(jī)制的理解具有重要的意義。Foxl2（Forkhead box L2）是翼狀螺旋/叉頭框轉(zhuǎn)錄因子超家族成員之一,參與卵巢的發(fā)育、顆粒細(xì)胞的分化和卵巢功能的維持,Foxl2基因缺失會導(dǎo)致眼瞼畸形和卵巢功能早衰。芳香化酶P450arom為類固醇代謝中的重要酶類,它能夠催化雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素,并對脊椎動物的性別分化和發(fā)育至關(guān)重要。多數(shù)魚類中存在兩種類型芳香化酶基因,即性腺型（Cypl9ala）和腦型（Cypl9alb）。Cypl9ala對雌激素合成和卵巢分化具有重要作用,Cypl9alb與腦中雌二醇生物合成緊密相關(guān),可能參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和性行為的調(diào)節(jié)。烏鱧是我國重要的淡水經(jīng)濟(jì)魚類,同齡雄性烏鱧生長速度快于雌性。為了解烏鱧性別分化相關(guān)機(jī)制,為人工控制烏鱧性別奠定基礎(chǔ),本文通過組織學(xué)方法研究烏鱧早期性腺發(fā)育過程，同時通過克隆性別相關(guān)基因Cypl9alb和Foxl2基因,探討Foxl2基因在性腺分化過程中基因表達(dá)的變化,并通過免疫組織化學(xué)方法研究Foxl2在成熟烏鱧性腺中的分布情況。結(jié)果如下：1.烏鱧早期性腺發(fā)育的組織學(xué)觀察出膜后6 d的仔魚,在中腎管腹... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２烏給總ＲＮＡ??Ｆｉｇ．?２?Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｏｆ?Ｃ．?ａｒｇｕｓ??

２．２烏巧砂／＞／如＊／＆基因ｃＤＮＡ中間片段和３？巧的克ｇ??從烏錯脅組織總ＲＮＡ反轉(zhuǎn)錄的ｃＤＮＡ為模板，利用Ｃ＿ｖ／？／９ａ／６－Ｆ和Ｃ炒??進(jìn)行中間片段擴(kuò)增，獲得１０００?ｂｐ左右條帶（圖３），與預(yù)期結(jié)果相符。經(jīng)??測序得知該中間片段大小為１０８４?ｂｐ。根據(jù)所得烏錯口化中間片段設(shè)計基因特??異性引物進(jìn)行３’ＲＡＣＥ擴(kuò)増，獲得８００?ｂｐ左右的條帶（圖３），經(jīng)測序得知３’ＲＡＣＥ??片段長度為７８１?ｂｐ。將兩段ｃＤＮＡ片段比對拼接，得到１４３２?ｂｐ烏體ｃＤＮＡ??部分巧列（ＧｅｎＢａｎｋ登錄號ＫＦ７４６０７３）。該ｃＤＮＡ序列包括１２０ｂｐ３ｉ－ＵＴＲ和１３Ｈ??ｂｐ編碼區(qū)，編礦ｉ?４％個勤茲酸。??１?Ｍ?２?Ｍ??Ｈ—…，??？—?１０００?ｂｐ??４—?７５０?ｂｐ??４—?５００?ｂｐ??令一２５０?ｂｐ??４—?１００?ｂｐ??圖３烏絕〇／７／化／／６基因擴(kuò)增產(chǎn)物??Ｆｉｇ．?３?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ｐａｒｔｉａｌ?Ｃｙｐｌ９ａｌｈ?ｃＤＮＡ?ｏｆ?Ｃ?ａｒｇｎｓ??Ｍ：?２０００ｂｐＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?１：中間片段擴(kuò)増產(chǎn)伽２：?３１ＲＡＣＥ產(chǎn)物??Ｍ：?２０００?ｂｐ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ｗ＾�。埽洌埽穑桑梗幔。猓�?２：?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?３＇ＲＡＣＥ??２．３烏Ｈ?基因巧列分祈??２．３．１烏基因同源性比對??ＢＬＡＳＴ分析表明，烏錯斯ｃＤＮＡ序列與ＧｅｎｅＢａｎｋ中其他魚類（：＞／７八口化??ｃＤＮＡ序列的同源性為７２％？８８％，與ｃＤＮＡ序列同源巧則低于７１％。不??Ｎ種類氨基酸序列比對結(jié)果思示

Ｗ烏罐卵巢總ＲＮＡ反轉(zhuǎn)錄的ｃＤＮＡ為模板，利用Ｆｏｘ／２－Ｆ和仍ＪＣ化民進(jìn)行仍ＪＣ／２??中間片段擴(kuò)增，獲得７５０?ｂｐ左右條帶，與預(yù)期結(jié)果相符。經(jīng)測序獲得７４０?ｂｐ的中間??片段（圖６）。根據(jù)得到的中間片段設(shè)計特異性引物，進(jìn)行ＲＡＣＥ擴(kuò)增。通過３’ＲＡＣＥ??擴(kuò)増得到一條１２００?ｂｐ左右的條帶（圖６），５１ＲＡＣＥ得到一條９００?ｂｐ左右的條帶（圖??６），測序結(jié)果顯示３｜１１入〔６片段長度為９５７?６口，５｜１＾〔５片段長度為７９８?６９。將三段??ｃＤＮＡ片段比對拼接，得到烏罐仍；Ｃ／２?ｃＤＮＡ全氏序列（ＧｅｎＢａｎｋ登錄巧ＫＦ７４６０７２）。??烏錯?Ｆａｖ／２?基因?ｃＤＮＡ?全長?１９６６?ｂｐ，包括?２１３?ｂｐ?的?５Ｉ－ＵＴＲ，８３２?ｂｐ?的?３Ｉ－ＵＴＲ?和?ｊ??ｂｐ的編碼區(qū)，編碼３７６個氨基酸。?Ｉ??１?Ｍ?２?Ｍ?３?Ｍ?Ｉ??ｎ?一０００?ｂｐ?Ｉ??戶１０００?ｂｐ??＾?７５０?ｂｐ??如－５００?ｂｐ??２５０?ｂｐ??１００?ｂｐ??圖６烏巧仍；ｃ口基因擴(kuò)增產(chǎn)物??Ｆｉｇ．?６?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?Ｆｏｘｌ２?ｃＤＮＡ?ｏｆ?Ｃ．?ａｒｇｕｓ??Ｍ：?２０００ｂｐＤＮＡＭａｒｌｃｅｒ；?１；中間片段擴(kuò)增產(chǎn)物：２：?ＴＲＡＣＥ?產(chǎn)物；３：?５’ＲＡＣＥ?產(chǎn)物??Ｍ：?２０００?ｂｐ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?Ｉ：?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ｐａｒｔｉａｌ?ＣｙｐＩ９ａＩｂ＼?２：?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?３＇ＲＡＣＥ；?３：?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?５＇ＲＡＣＥ??Ｉ??２．５烏達(dá)Ｆｏｊｃ／２基因巧列分析??２．５．１烏ｇ?Ｆ＜

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]半滑舌鰨（Cynoglossus semilaevis）線粒體基因組全序列和性別相關(guān)基因的克隆與表達(dá)分析[D]. 董曉麗.中國海洋大學(xué) 2010

碩士論文
[1]烏鱧性別相關(guān)的Dmrt基因的克隆及其組織表達(dá)特征[D]. 周楠.河北大學(xué) 2014
[2]牙鲆性別相關(guān)基因的克隆與表達(dá)分析[D]. 翁申達(dá).中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所） 2013
[3]大黃魚原始生殖細(xì)胞發(fā)生、遷移及性腺性別分化的組織學(xué)研究[D]. 游秀容.集美大學(xué) 2012



本文編號：3123617