羅非魚(yú)是海南等我國(guó)南方地區(qū)重要的淡水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi),但隨著其養(yǎng)殖發(fā)展,病害的影響越來(lái)越嚴(yán)重,其中,細(xì)菌性疾病是羅非魚(yú)養(yǎng)殖中最常見(jiàn)和危害最大的疾病,目前常見(jiàn)的細(xì)菌性病原包括熒光假單胞菌（Pseudcmonas fluoroscercs）、遲緩愛(ài)德華氏菌（Edwardsiella tarda）、嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）、海豚鏈球菌（Streptococcus iniae）和無(wú)乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae）。在羅非魚(yú)疾病的防治方面,雖然抗生素類(lèi)藥物具有一定的效果,但存在耐藥性、藥物殘留以及污染環(huán)境等缺陷,迫切需要探索安全高效的防治措施以促進(jìn)羅非魚(yú)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展。為了快速準(zhǔn)確檢測(cè)養(yǎng)殖羅非魚(yú)細(xì)菌性病原,本文采用分子生物學(xué)方法建立了上述羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌的PCR快速鑒定方法,并利用16SrDNA序列對(duì)分離篩選獲得的無(wú)乳鏈球菌進(jìn)行分型。為了探索羅非魚(yú)鏈球菌病的安全高效控制措施,本文以海南當(dāng)?shù)胤蛛x的羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌強(qiáng)毒株制備了滅活疫苗,利用分光光度計(jì)建立了疫苗濃度的快速測(cè)定方法,比較研究了高滲浸泡等多種不同免疫接種方法及其免疫效果,建立了... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 羅非魚(yú)鏈球菌病及水產(chǎn)免疫防治研究進(jìn)展（綜述）
    1. 羅非魚(yú)養(yǎng)殖概況
    2. 羅非魚(yú)乳鏈球菌病
        2.1 羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌的生理生化特征
        2.2 羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌流行病學(xué)
        2.3 羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌病的臨床癥狀及致病機(jī)理
    3. 羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌的鑒定
        3.1 常規(guī)方法
        3.2 細(xì)菌自動(dòng)鑒定儀器鑒定
        3.3 分子生物學(xué)方法
    4. 魚(yú)類(lèi)疫苗研究進(jìn)展
        4.1 魚(yú)類(lèi)疫苗的種類(lèi)
        4.2 疫苗免疫途徑
            4.2.1 注射
            4.2.2 口服免疫
            4.2.3 浸泡免疫
    5. 本研究的主要目的與意義
第二章 羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌快速鑒定方法的建立
    1. 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 主要儀器設(shè)備
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 病原菌的活化與擴(kuò)大培養(yǎng)
        2.2 細(xì)菌濃度的調(diào)整
        2.3 引物設(shè)計(jì)與合成
        2.4 PCR反應(yīng)的優(yōu)化及特異性檢驗(yàn)
            2.4.1 PCR反應(yīng)程序的優(yōu)化
            2.4.2 方法的特異性檢驗(yàn)
            2.4.3 方法的敏感性檢驗(yàn)
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 PCR反應(yīng)程序的優(yōu)化及特異性驗(yàn)證
            3.1.1 PCR檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌反應(yīng)程序優(yōu)化
            3.1.2 特異性檢驗(yàn)結(jié)果
        3.2 方法靈敏度檢驗(yàn)
    4. 討論
第三章 無(wú)乳鏈球菌滅活疫苗的制備及免疫保護(hù)效果研究
    第一節(jié) 無(wú)乳鏈球菌滅活疫苗制備及其濃度快速測(cè)定方法的建立
        1. 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
            1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2 主要儀器
            1.3 主要試劑
        2. 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 無(wú)乳鏈球菌致病性確定
            2.2 無(wú)乳鏈球菌16S rRNA分子分型
            2.3 無(wú)乳鏈球菌滅活疫苗的制備及計(jì)數(shù)
            2.4 無(wú)乳鏈球菌滅活疫苗安全性及有效性檢測(cè)
            2.5 無(wú)乳鏈球菌滅活疫苗濃度檢測(cè)分光光度法的建立
                2.5.1 特異性測(cè)定波長(zhǎng)的確定
                2.5.2 疫苗濃度與吸光值的相關(guān)性測(cè)定
                2.5.3 疫苗濃度穩(wěn)定性檢測(cè)
                2.5.4 方法重復(fù)穩(wěn)定性檢測(cè)
        3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 病原菌致病性檢測(cè)結(jié)果
            3.2 無(wú)乳鏈球菌16S rRNA進(jìn)化樹(shù)的建立
            3.3 疫苗制備及其安全性檢測(cè)結(jié)果
            3.4 疫苗的有效性檢測(cè)結(jié)果
            3.5 無(wú)乳鏈球菌疫苗濃度檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇
600值的相關(guān)性">            3.6 無(wú)乳鏈球菌滅活疫苗濃度與A₆₀₀值的相關(guān)性
            3.7 疫苗濃度的穩(wěn)定性檢測(cè)
            3.8 方法的重復(fù)性檢測(cè)結(jié)果
        4. 討論
    第二節(jié) 無(wú)乳鏈球菌滅活疫苗對(duì)羅非魚(yú)鏈球菌病的免疫保護(hù)效果研究
        1. 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
            1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
            1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2. 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 羅非魚(yú)養(yǎng)殖方法
            2.2 羅非魚(yú)對(duì)高滲溶液的耐受性研究
            2.3 不同免疫方法對(duì)50日齡羅非魚(yú)免疫效果的影響
                2.3.1 免疫相對(duì)保護(hù)率（RPS）的測(cè)定
                2.3.2 血清制備
                2.3.3 血清抗體效價(jià)測(cè)定
                2.3.4 血清總蛋白測(cè)定
                2.3.5 超氧化物歧化酶（SOD）活性測(cè)定
                2.3.6 溶菌酶含量測(cè)定
                2.3.7 堿性磷酸酶（AKP）活性測(cè)定
            2.4 不同日齡羅非魚(yú)免疫效果研究
                2.4.1 不同日齡羅非魚(yú)免疫實(shí)驗(yàn)
                2.4.2 保護(hù)率測(cè)定
                2.4.3 免疫對(duì)羅非魚(yú)商品性能影響的測(cè)定
        3. 結(jié)果
            3.1 羅非魚(yú)高滲溶液耐受實(shí)驗(yàn)
            3.2 不同免疫方法對(duì)羅非魚(yú)的保護(hù)率
                3.2.1 不同方法接種羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌疫苗的抗體效價(jià)測(cè)定
                3.2.2 血清總蛋白測(cè)定結(jié)果
                3.2.3 超氧化物歧化酶（SOD）活性測(cè)定結(jié)果
                3.2.4 溶菌酶含量測(cè)定結(jié)果
                3.2.5 堿性磷酸酶（AKP）活性測(cè)定結(jié)果
            3.3 不同日齡羅非魚(yú)免疫效果
                3.3.1 浸泡免疫不同日齡羅非魚(yú)保護(hù)率
                3.3.2 高滲浸泡二次免疫對(duì)不同日齡羅非魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響
        4. 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者在讀期間論文發(fā)表情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]廣東、海南、福建3省羅非魚(yú)鏈球菌病流行菌株P(guān)CR鑒定和PFGE基因型分析[J]. 李莉萍,王瑞,黃婷,甘西,李健,黃維義,黃彥,雷愛(ài)瑩,陳明,梁萬(wàn)文.  西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2013(05)
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[4]2012年中國(guó)羅非魚(yú)產(chǎn)品出口貿(mào)易分析及展望[J]. 代云云,袁永明,張紅燕,賀艷輝.  中國(guó)漁業(yè)經(jīng)濟(jì). 2013(02)
[5]人工放流4齡中華鱘鹽度適應(yīng)過(guò)程中血清生化指標(biāo)的變化[J]. 楊吉平,陳立僑,劉健,李二超,鄭躍平,崔超,陳錦輝.  大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(01)
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[10]羅非魚(yú)源無(wú)乳鏈球菌cpsE基因的克隆和分子特性分析[J]. 汪開(kāi)毓,付希,肖丹,黃錦爐,王均,王浩丞.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2011(05)

碩士論文
[1]無(wú)乳鏈球菌、海豚鏈球菌及熒光假單胞菌多重PCR檢測(cè)方法的建立和應(yīng)用[D]. 劉貝貝.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]海南羅非魚(yú)鏈球菌病病原分離鑒定及防治中草藥篩選[D]. 鄧恒為.海南大學(xué) 2013
[3]羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌C5a肽酶的原核表達(dá)及其免疫原性研究[D]. 李慶勇.上海海洋大學(xué) 2013
[4]羅非魚(yú)海豚鏈球菌疫苗的研制及免疫效果的初步研究[D]. 徐增輝.廣西大學(xué) 2008
[5]分枝桿菌種間及種內(nèi)不同株之間16S rRNA基因和16S-23S rRNA ITS序列分析[D]. 閆李俠.蘭州大學(xué) 2008
[6]嗜水氣單胞菌和遲鈍愛(ài)德華氏菌多重PCR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用[D]. 饒靜靜.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3096352