擬穴青蟹（Scylla paramamosain）是我國(guó)沿海最為常見的水產(chǎn)養(yǎng)殖品種，其養(yǎng)殖規(guī)模和產(chǎn)量都很大，是我國(guó)重要的三大經(jīng)濟(jì)蟹類之一，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值、藥用價(jià)值和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，因而具有很高的研究?jī)r(jià)值。本文通過(guò)構(gòu)建文庫(kù)和RACE克隆等方法獲得了擬穴青蟹硫氧還蛋白-1基因cDNA序列，并運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析其在不同組織和副溶血弧菌感染條件下的表達(dá)情況；此外，對(duì)硫氧還蛋白還原酶在不同組織和細(xì)菌感染條件下的活性變化進(jìn)行了分析；最后，運(yùn)用GeXP多重基因表達(dá)技術(shù)對(duì)擬穴青蟹抗氧化系統(tǒng)中的部分基因進(jìn)行了初步探究。主要研究結(jié)果如下：1.硫氧還蛋白（Thioredoxin, Trx）屬于氧化還原蛋白家族。本文運(yùn)用SMART技術(shù)獲得了擬穴青蟹Trx1基因的cDNA全長(zhǎng)，系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示它與其他物種Trx基因具有較高的同源性，綜合分析后確定命名為擬穴青蟹硫氧還蛋白-1基因（SpTrx1）。SpTrx1的cDNA全長(zhǎng)672bp，包括318bp的開放閱讀框（ORF），編碼105個(gè)氨基酸，分子量約為12.05kDa，等電點(diǎn)約為4.85。運(yùn)用熒光定量PCR（Quantitative real-time ... 

【文章來(lái)源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.1 硫氧還蛋白系統(tǒng)的研究
        1.1.1 硫氧還蛋白基因的研究
        1.1.2 硫氧還蛋白還原酶的研究
    1.2 抗氧化系統(tǒng)的研究
        1.2.1 過(guò)氧化物還原酶的研究
        1.2.2 過(guò)氧化氫酶的研究
        1.2.3 超氧化物歧化酶的研究
        1.2.4 谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的研究
        1.2.5 谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶的研究
    1.3 熒光定量 PCR 技術(shù)和 GeXP 多重 PCR 技術(shù)
        1.3.1 熒光定量 PCR 技術(shù)
        1.3.2 GeXP 技術(shù)
    1.4 本研究的目的、意義
第二章 擬穴青蟹硫氧還蛋白基因-1 cDNA 的克隆、表達(dá)分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料及前期準(zhǔn)備
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 試劑盒及購(gòu)買的試劑
        2.1.4 自配試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 RNA 提取
        2.2.2 cDNA 第一鏈的合成
        2.2.3 SpTrx1 cDNA 序列的獲得和驗(yàn)證
        2.2.4 引物序列
        2.2.5 SpTrx1 基因表達(dá)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 總 RNA 的提取與鑒定
        2.3.2 SpTrx1cDNA 序列 ORF 片段克隆及驗(yàn)證
        2.3.3 SpTrx1 生物學(xué)分析
        2.3.4 SpTrx1 基因表達(dá)分析
    2.4 討論
第三章 擬穴青蟹硫氧還蛋白還原酶活性分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料及樣品處理
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑配制
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            3.1.3.1 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線
            3.1.3.2 實(shí)驗(yàn)樣品檢測(cè)
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.3 討論
第四章 擬穴青蟹抗氧化系統(tǒng)相關(guān)基因 GeXP 多重基因表達(dá)
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            4.1.2.1 RNA 提取
            4.1.2.2 引物設(shè)計(jì)
            4.1.2.3 RT-PCR 反應(yīng)
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.2.1 擬穴青蟹所選的抗氧化相關(guān)基因引物的檢測(cè)
        4.2.2 擬穴青蟹不同組織中所選抗氧化相關(guān)基因的表達(dá)
        4.2.3 經(jīng)弧菌刺激后不同時(shí)間點(diǎn)擬穴青蟹血細(xì)胞中所選抗氧化相關(guān)基因的表達(dá)
    4.3 討論
第五章 小結(jié)
    5.1 全文小結(jié)
    5.2 本文創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[3]中華絨螯蟹表達(dá)序列標(biāo)簽（EST）分析及免疫相關(guān)基因的克隆、表達(dá)模式研究[D]. 趙大顯.華東師范大學(xué) 2009
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本文編號(hào)：3095511