在脊椎動(dòng)物中,性腺的生殖功能維持需要多種基因的表達(dá),同時(shí)這些基因也受到多種轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)。GATA家族轉(zhuǎn)錄因子就是其中之一,它們因結(jié)構(gòu)上包含兩個(gè)保守的鋅指結(jié)構(gòu)能識(shí)別靶基因啟動(dòng)子序列上的WGATAR基序而得名。同時(shí)該家族參與多種組織的發(fā)育、分化和基因表達(dá)過(guò)程。在GATA家族6個(gè)成員中Gata4/6在卵巢和精巢中均有表達(dá)。已有研究表明,在脊椎動(dòng)物中Gata4/6在卵巢的濾泡細(xì)胞（Follicle cells）和精巢的支持細(xì)胞（Sertoli cells）、萊氏細(xì)胞（Leydig cells）中表達(dá)。并且Gata6也在人和小鼠的生殖細(xì)胞中表達(dá)。在小鼠卵/精巢中缺失Gata4/6導(dǎo)致性腺發(fā)育途徑中的相關(guān)基因表達(dá)大量下調(diào),生殖細(xì)胞數(shù)量減少,并且阻礙配子生成。同時(shí),Gata4和Gata6在類固醇基因調(diào)控上功能相似。在硬骨魚(yú)中,斑馬魚(yú)研究了心臟導(dǎo)管中Gata4的功能,同時(shí)本實(shí)驗(yàn)前期利用real-time PCR和原位雜交等手段對(duì)羅非魚(yú)的Gata4/6的表達(dá)模式和功能研究進(jìn)行了初步的探討。在羅非魚(yú)中,Gata4在成體卵巢的顆粒細(xì)胞和鞘膜細(xì)胞（Theca cells）以及成體精巢的支持細(xì)胞和輸精管上皮細(xì)胞... 

【文章來(lái)源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略語(yǔ)對(duì)照表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 生殖系統(tǒng)以及類固醇生成
        1.1 下丘腦-垂體-性腺（HPG）軸
        1.2 卵巢和卵子發(fā)生
            1.2.1 卵巢
            1.2.2 卵子發(fā)生
        1.3 精巢和精子發(fā)生
            1.3.1 精巢
            1.2.2 精子發(fā)生
        1.4 配子發(fā)生過(guò)程中的類固醇激素生成
    2 GATA家族
        2.1 GATA家族成員的結(jié)構(gòu)以及功能
        2.2 Gata4/6的研究現(xiàn)狀
            2.2.1 Gata4/6在性腺的表達(dá)
            2.2.2 Gata4/6在性腺的功能研究
            2.2.3 Gata4/6與類固醇生成
    3 科學(xué)問(wèn)題的提出和本研究的目的意義
第二章 GATA6性腺表達(dá)初步研究
    1 引言
    2 實(shí)驗(yàn)材料和儀器
        2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
        2.3 有關(guān)試劑的配制
        2.4 實(shí)驗(yàn)方法
            2.4.1 羅非魚(yú)性腺總RNA提取
            2.4.2 cDNA的合成
            2.4.3 性腺Gata6表達(dá)分析
                2.4.3.1 Gata6 mRNA在性腺不同發(fā)育階段的表達(dá)
                2.4.3.2 性腺轉(zhuǎn)錄組Gata6表達(dá)分析
            2.4.4 Gata6多克隆抗體制備檢測(cè)
                2.4.4.1 Gata6重組蛋白表達(dá)、檢測(cè)和純化
                2.4.4.2 Gata6多克隆抗體制備
                2.4.4.3 Gata6 Western blot檢測(cè)
                2.4.4.4 Gata6在性腺組織中的免疫組化檢測(cè)
    3 結(jié)果
        3.1 Gata6在不同時(shí)期性腺中的表達(dá)
        3.2 Gata6抗體檢測(cè)以及細(xì)胞定位
    4 討論
        4.1 Gata6在性腺中的表達(dá)
        4.2 Gata6在雌雄性腺的細(xì)胞定位
第三章 GATA4/6功能的初步研究
    1 引言
    2 實(shí)驗(yàn)材料和儀器
        2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
        2.3 有關(guān)試劑的配制
        2.4 實(shí)驗(yàn)方法
            2.4.1 羅非魚(yú) gtzto4/6(JCRISPR/Cas9 敲除
                2.4.1.1 敲除靶向序列的選擇
                2.4.1.2 gRNA和Cas9 mRNA的合成
                2.4.1.3 顯微注射
                2.4.1.4 基因組DNA的提取、目的片段的擴(kuò)增及酶切檢測(cè)
                2.4.1.5 敲除陽(yáng)性魚(yú)的篩選
                2.4.1.6 組織學(xué)檢測(cè)
                2.4.1.7 免疫組化
                2.4.1.8 real-time PCR和RT-PCR
                2.4.1.9 激素測(cè)定
                2.4.1.10 統(tǒng)計(jì)卵母細(xì)胞時(shí)相
                2.4.1.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
            2.4.2 gata6突變F1代建立
    3 結(jié)果
        3.1 敲除序列的選擇以及突變檢測(cè)
        3.2 陽(yáng)性敲除魚(yú)的篩選和敲除效率統(tǒng)計(jì)
        3.3 Gata4/6缺失對(duì)雌魚(yú)性腺基因表達(dá)和血清激素水平的影響
        3.4 Gata4/6缺失對(duì)雄魚(yú)性腺基因表達(dá)和血清激素水平的影響
        3.5 Gata6突變F1代魚(yú)檢測(cè)
    4 討論
        4.1 CRISPR/Cas9高效敲除Gata4/6
        4.2 Gata4/6參與類固醇生成和雌雄配子生成
        4.3 Gata4/6功能上的相關(guān)性和互補(bǔ)性
        4.4 脊椎動(dòng)物Gata4/6在進(jìn)化上功能的一致性
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
在讀期間所發(fā)表的文章
在讀期間參加科研情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]轉(zhuǎn)錄因子GATA-2在脊椎動(dòng)物發(fā)育過(guò)程中的作用[J]. 張未麗,劉智皓,吳風(fēng)瑞,黃寶鋒,韓飛,孫運(yùn)侶,王德壽.  四川動(dòng)物. 2009(06)
[2]半滑舌鰨性腺分化的組織學(xué)觀察[J]. 馬學(xué)坤,柳學(xué)周,溫海深,徐永江,張立敬.  海洋水產(chǎn)研究. 2006(02)

碩士論文
[1]尼羅羅非魚(yú)Dmrt1、Amh和Cyp11b2抗體制備及其在正常發(fā)育和性逆轉(zhuǎn)性腺中的表達(dá)研究[D]. 王婷茹.西南大學(xué) 2013
[2]尼羅羅非魚(yú)性腺發(fā)育過(guò)程的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究及Fox家族生物信息學(xué)分析[D]. 袁靜.西南大學(xué) 2013
[3]尼羅羅非魚(yú)GATA因子表達(dá)及其功能的初步研究[D]. 葉凱.西南大學(xué) 2012
[4]牙鲆Paralichthys olivaceus性腺分化與發(fā)育的組織學(xué)研究[D]. 孫朝徽.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3081845