細胞凋亡（Apoptisis），是生物體在生長、分化、發(fā)育和病理變化中通過基因編碼的一個細胞主動自殺的過程。Caspase（Cysteine aspartic acid specific protease）又稱為半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶，在細胞凋亡、分化、增殖、壞死和炎癥反應過程中起到了重要的作用。本文根據(jù)仿刺參（Apostichopus japonicus）凋亡相關的caspase基因部分序列，通過RACE擴增獲得了該基因的全長cDNA序列，命名為Ajcasp1（GeneBankNo.:KC972624）。生物信息學分析發(fā)現(xiàn)：Ajcasp1基因全長為2100bp，包括一個1137bp編碼378個氨基酸的開放閱讀框，序列兩端為181bp的5’UTR和782bp的3’UTR。序列分析顯示，該基因編碼的蛋白包括caspase家族的經典結構域N端前肽（CARDcaspase-recruitment domain結構域），P20大亞基和P10小亞基，五肽保守序列,并存在多個激活位點，化學結合位點，蛋白裂解位點，多肽結合位點和一個組氨酸激活位點等。結構域分析發(fā)現(xiàn)，該基因編碼一個包含90個氨基... 

【文章來源】：大連海洋大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1 棘皮動物免疫相關基因研究進展
    2 細胞凋亡機制
    3 caspase 家族概述
        3.1 caspase 家族的定義及分類
        3.2 caspase 家族成員參與的重要細胞信號通路
            3.2.1 死亡受體通路
            3.2.2 線粒體通路
            3.2.3 內質網通路
            3.2.4 各通路間的相互聯(lián)系
    4 本研究的目的與意義
第二章 仿刺參 Ajcasp1 基因的克隆及生物信息學分析
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 實驗動物
            1.1.2 菌株和質粒
            1.1.3 主要試劑與配制
            1.1.4 引物設計與合成
        1.2 方法
            1.2.1 總 RNA 的提取
            1.2.2 cDNA 的合成
            1.2.3 PCR 擴增 ORF 框
            1.2.4 PCR 產物特異性條帶的回收與純化
            1.2.5 目的基因片段與 PMD-18T 載體連接
            1.2.6 轉化
            1.2.7 PCR 鑒定陽性克隆
            1.2.8 數(shù)據(jù)分析處理
    2 結果
        2.1 仿刺參總 RNA 的提取及檢測
        2.2 仿刺參 Ajcasp1 的全長 cDNA 序列克隆
        2.3 仿刺參基因的生物信息學分析
            2.3.1 Ajcasp1 及其編碼氨基酸的序列結構分析
            2.3.2 AjCASP1 蛋白的二級及三級結構預測
            2.3.3 AjCASP1 序列的同源性比較和進化樹分析
    3 討論
第三章 仿刺參 AjCASP1 重組蛋白表達及抗體制備
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 實驗動物
            1.1.2 菌株和質粒
            1.1.3 主要試劑與配制
            1.1.4 引物設計與合成
        1.2 方法
            1.2.1 cDNA 的合成
            1.2.2 目的基因的克隆
            1.2.3 質粒提取
            1.2.4 表達載體的構建
            1.2.5 重組蛋白的表達與鑒定
            1.2.6 重組蛋白的純化
            1.2.7 多克隆抗體的制備
            1.2.8 血清效價的測定
            1.2.9 Western blot 分析
    2 結果
        2.1 原核表達載體的構建
        2.2 重組蛋白的表達純化及 Western blot 分析
        2.3 多抗的制備及檢測
    3 討論
第四章 仿刺參 AjCASP1 蛋白的功能研究
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 實驗動物
            1.1.2 主要試劑與配制
            1.1.3 引物設計與合成
        1.2 方法
            1.2.1 Western blot 檢測組織分布
            1.2.2 LPS 誘導后仿刺參 caspase 基因的表達水平
    2 結果
        2.1 Western blot 檢測各組織中蛋白濃度
        2.2 LPS 刺激后 Ajcasp1 mRNA 表達變化
    3 討論
結論
參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Caspase細胞凋亡通路及其在水生無脊椎動物的研究進展[J]. 和四梅,張麗莉,王藝磊,王國棟.  生物技術通報. 2013(09)
[2]真鯛虹彩病毒遼寧株跨膜蛋白（ORF049L）基因的克隆及表達[J]. 孫志鵬,徐祥,李強,葉仕根,李華.  大連海洋大學學報. 2013(02)
[3]仿刺參profilin基因全長cDNA的克隆及表達分析[J]. 董穎,高杉,陳仲,楊愛馥,姜北,關曉燕,王擺,周遵春.  中國農業(yè)科技導報. 2013(02)
[4]海洋動物Toll樣受體的研究進展[J]. 孫紅娟,周遵春,崔軍,王秀利.  生物技術通報. 2013(01)
[5]鱖胰島素樣生長因子-Ⅱ cDNA基因的克隆與表達特征[J]. 劉俊,趙金良,張敏,代威.  大連海洋大學學報. 2012(06)
[6]植物Metacaspase研究進展[J]. 馬聰,孔維文.  植物學報. 2012(05)
[7]仿刺參EGFR基因的克隆與表達分析[J]. 李霞,王雪,秦艷杰,劉洋,周一兵.  水產學報. 2012(01)
[8]仿刺參性別相關基因P450c17的克隆與序列分析[J]. 田燚,張丙龍,常亞青.  中國水產科學. 2012(01)
[9]中國海棘皮動物的種類組成及區(qū)系特點[J]. 廖玉麟,肖寧.  生物多樣性. 2011(06)
[10]海參免疫相關基因的研究進展[J]. 王艷玲,李東,王秀利.  生物技術通報. 2011(09)

碩士論文
[1]細胞凋亡相關的生物傳感研究[D]. 彭瑩.湖南大學 2012
[2]Caspase酶切位點的生物信息學分析[D]. 黃成.華中科技大學 2012



本文編號：3070809