遲鈍愛德華氏菌是一種重要的魚類致病菌,嚴重危害到世界各地水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。本課題基于反向疫苗學的基本原理,利用多種生物信息學的方法分析了遲鈍愛德華氏菌的全基因組序列,預測得到275個候選抗原蛋白,并對所得候選蛋白進行了規(guī)模化、高通量的重組表達及純化,進而以模式生物斑馬魚為實驗動物,評價各候選抗原蛋白針對遲鈍愛德華氏菌的免疫保護作用。研究中共完成193個基因的克隆,實現(xiàn)123個基因的異源表達,并成功純化候選抗原蛋白85個；斑馬魚免疫保護效果顯示,16個抗原蛋白的相對免疫保護率大于50%,為未來進一步的疫苗開發(fā)奠定了良好基礎(chǔ)。同時,針對免疫保護效果較好、抗原遞呈途徑有顯著差異的抗原蛋白GAPDH和FlgD分別在一級動物模型斑馬魚（實驗室條件）和二級動物模型大菱鲆（臨床魚種）上進行了聯(lián)合免疫效果評價,結(jié)果表明,兩個蛋白混合后接種免疫具有更好的免疫保護效果；采用RT-qPCR分析其免疫應答機理,結(jié)果表明兩個抗原蛋白混合免疫后同時激發(fā)宿主體液免疫和細胞免疫,這為后續(xù)多個抗原蛋白的聯(lián)合免疫研究提供了新思路。 

【文章來源】：華東理工大學上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１?１９５０?Ｗ來漁場養(yǎng)殖和海水養(yǎng)殖產(chǎn)量的増長情況（ＦＡＯ化ｔａｂａｓｅ化ｈＳｔａｔ）??Ｆｉｇ．?１．１?Ｗｏｒｌｄ?ｆｉｓｈ?ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｓｕｐｐｌｙ?

?Ｙｅａｒ?（ｈ）??圖１．２從１９８０到２０１２在化ｂＭｅｄ用斑馬魚檢索的文獻増加畳??Ｆｉｇ．?１．２?Ｔｈｅ?ｉｎｃｒｅａｓｅ?ａｍｏｕｎｔ?ｏｆ?ｚｅｂｒａｆｉｓｈ－ｓｅａｒｃｈｉｎｇ?ｉｎ?ＰｕｂＭｅｄ?ｆｒｏｍ?１９８０?ｔｏ?２０１２．??１．３遲純愛德華氏菌——重要的海洋魚類細菌性病原??１．３．１魚類病害概況??細菌、寄生蟲、病毒是魚類的Ｈ種主要病害。其中，細菌性病害分布廣、傳播快、??危害嚴重，且種類繁多，難Ｗ防治。我國海水養(yǎng)殖魚類主要細菌病包括弧菌�。住⒍緷�??

遲純愛德華氏菌ＥＩＢ２０２由本實驗室自山東煙臺大菱解病灶組織分離獲得，己完成其??全基因組測序。該菌基因組序列全長３乃Ｍｂｐ，約含３５００個開放閱讀框，其中包括由５３??個開放閱讀框構(gòu)成的質(zhì)粒。基于全基因組序列的候選抗原蛋白分析預測流程（圖２．１）。??ｙ?？遲鐘愛德華氏菌全基因姐分析???＊??—??？去除磅膜次數(shù)大于２的蛋白質(zhì)?????１１１１１，１１１????????????ｍｎ??Ｕ?？獅斑馬魚和大猶的非同源蛋白質(zhì)??…—?Ｉ．?Ｉ?，?？＜??圖２．１基于反向巧苗學的遲鐘愛巧華氏菌候選抗原蛋白巧選過程??Ｆｉｇ．２．１?Ｒｅｖｅｒｓｅ?ｖａｃｃｉｎｏｌｏｇｙ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｐｒｏｃｅｓｓ．??（２）候選抗原蛋白亞細胞定位和跨膜螺旋的預測??對遲純愛德華氏菌強毒株Ｅ舊２０２全基因組序列分析后獲得３４８６個開放閱讀框，利??用ＴＭＭＨＭ軟件分析其編碼產(chǎn)物的跨膜螺旋和跨膜次數(shù)，去除跨膜螺旋結(jié)構(gòu)大于２的蛋??白，進一步利用ＰＳ０民Ｔ程序進行蛋白亞細胞定位分化最終獲得蛋白５３０個，包括細胞??膜外蛋白質(zhì)、細胞質(zhì)膜蛋白和分泌蛋白等。??（３）鑒定斑馬魚和大菱評的非同源蛋白質(zhì)??利用最新反向疫苗學預測集合軟件（Ｎｅｗ?Ｅｎｈａｎｃｅｄ?Ｒｅｖｅｒｓｅ?Ｖａｃｃｉｎｏｌｏｇｙ??Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ［６Ｇ］）對所得候選蛋白進行篩選，同時分析上述蛋白的粘附情化利用ＢＩＭＡＳ??軟件模塊分析各蛋白與斑馬魚及大萎砰ＭＨＣＩ分子的結(jié)合能力，避免產(chǎn)生自身免疫：利??用Ｓｔａｎｄ－Ａｌｏｎｅ?ＢＬＡＳＴ搜索免疫效率高的同源蛋白

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3061046