馬氏珠母貝是用來培育和生產(chǎn)海水珍珠的主要貝類,是我國(guó)海洋經(jīng)濟(jì)的重要組成部分。本研究利用馬氏珠母貝參考基因組中與生物礦化相關(guān)的基因,開發(fā)SNP標(biāo)記,分析馬氏珠母貝生長(zhǎng)性狀以及珍珠質(zhì)層厚度與礦化基因位點(diǎn)的基因型的相關(guān)性,意在探索基因型對(duì)表型性狀的影響,為馬氏珠母貝的分子標(biāo)記輔助育種以及重要生長(zhǎng)性狀的QTL定位提供一定的依據(jù)。本研究得到以下結(jié)果：1.利用馬氏珠母貝參考基因組,找出了5可能的SNP位點(diǎn),在SNP位點(diǎn)上下游設(shè)計(jì)引物,用10個(gè)個(gè)體測(cè)序檢測(cè)SNP位點(diǎn)的真實(shí)性和多態(tài)性。經(jīng)后續(xù)實(shí)驗(yàn)從中篩選出3個(gè)SNP位點(diǎn)。Prismalin-1、N19和MSI60三個(gè)引物適合采用Tm-shift法,每個(gè)位點(diǎn)的兩個(gè)特異性引物一個(gè)為添加長(zhǎng)尾的正向引物,一個(gè)為添加短尾的正向引物。2.8個(gè)家系的基因分型結(jié)果表明MSI60基因的SNP位點(diǎn)多態(tài)性較低,在CB、CH和CJ三個(gè)家系中無多態(tài)性；3.采用Pearson對(duì)樣品進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析,N19基因的SNP位點(diǎn)與樣品的殼高之間存在顯著相關(guān)性（P=0.046）；Prismalin-14基因的SNP位點(diǎn)與家系CN中5個(gè)性狀均具顯著相關(guān)性（P<0.05）；N19基因的SNP... 

【文章來源】：海南大學(xué)海南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
第一章 研究綜述
    1. 馬氏珠母貝遺傳育種的現(xiàn)狀
    2. DNA分子標(biāo)記技術(shù)的種類和特征
        2.1 以分子雜交技術(shù)為基礎(chǔ)的分子標(biāo)記技術(shù)
            2.1.1 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP）
            2.1.2 可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)多態(tài)性（VNTR）
        2.2 基于PCR技術(shù)的分子標(biāo)記技術(shù)
            2.2.1 隨機(jī)引物的PCR標(biāo)記技術(shù)
                2.2.1.1 隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（RAPD）
                2.2.1.2 靶位區(qū)域擴(kuò)增多態(tài)性（TRAP）
            2.2.2 特異引物的PCR標(biāo)記
                2.2.2.1 簡(jiǎn)單重復(fù)序列（SSR）
                2.2.2.2 單引物擴(kuò)增反應(yīng)（SPAR）
        2.3 基于DNA測(cè)序分析的分子標(biāo)記技術(shù)
            2.3.1 表達(dá)序列標(biāo)簽（EST）標(biāo)記技術(shù)
    3. SNP標(biāo)記的開發(fā)及研究進(jìn)展
        3.1 SNP的發(fā)現(xiàn)
        3.2 SNP基因分型的傳統(tǒng)研究方法
            3.2.1 單堿基測(cè)序（引物延伸分型技術(shù),PET）
            3.2.2 異源雙鏈分析
            3.2.3 連接介導(dǎo)PCR
            3.2.4. 高分辨率溶解曲線（HRM）
    4. 本實(shí)驗(yàn)研究的目的及意義
第二章 馬氏珠母貝礦化基因SNP標(biāo)記的開發(fā)
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 樣品來源
        1.2 試劑和配置方法
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 DNA的提取和檢測(cè)
        2.2 SNP的查找和引物設(shè)計(jì)
        2.3 引物的篩選
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 DNA檢測(cè)
        3.2 引物的篩選
    4 討論
        4.1 DNA提取
        4.2 熒光染料以及Tm-shift熒光染料法
        4.3 SNP引物的設(shè)計(jì)
第三章 馬氏珠母貝礦化基因SNP與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)分析
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 樣品來源
        1.2 試劑和配制方法
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 DNA提取和檢測(cè)
        2.2 生長(zhǎng)性狀的測(cè)量
        2.3 貝殼珍珠質(zhì)層的厚度測(cè)量
        2.4 PCR擴(kuò)增
        2.5 基因分型與生長(zhǎng)相關(guān)性狀關(guān)聯(lián)分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 基因組DNA的電泳圖
        3.2 殼長(zhǎng)、殼高、絞合線長(zhǎng)、殼寬和總重的測(cè)量結(jié)果
        3.3 珍珠質(zhì)層厚度測(cè)量結(jié)果
        3.4 礦化基因SNP位點(diǎn)分型信息
        3.5 SNP位點(diǎn)分型與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)分析
    4. 討論
第四章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
在校期間科研成果
項(xiàng)目資助
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Tm-shift基因分型方法在遺傳學(xué)中的應(yīng)用[J]. 袁芳,徐進(jìn),季林丹,費(fèi)麗娟,劉盼盼,張莉娜.  遺傳. 2012(11)
[2]DNA分子標(biāo)記及其在水產(chǎn)動(dòng)物研究中的應(yīng)用[J]. 姚一彬,劉巧林,周偉,劉敏,黎玉元.  湖南飼料. 2011(06)
[3]A Cost-effective High-resolution Melting Approach using the EvaGreen Dye for DNA Polymorphism Detection and Genotyping in Plants[J]. Yi-Dan Li1, Zhi-Zhan Chu3, Xiang-Guo Liu1, Hai-Chun Jing2, Yao-Guang Liu3 and Dong-Yun Hao1 1Biotechnology Research Centre, Jilin Academy of Agricultural Sciences, Changchun 130033, China 2Institute of Botany, the Chinese Academy of Sciences, Beijing 100093, China 3College of Life Sciences, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China.  Journal of Integrative Plant Biology. 2010(12)
[4]馬氏珠母貝（Pinctada martensii）2個(gè)地理群體雜交子代的雜種優(yōu)勢(shì)和遺傳變異[J]. 王愛民,王嫣,顧志峰,黎明,石耀華,李思發(fā).  海洋與湖沼. 2010(01)
[5]鏡鯉體重相關(guān)分子標(biāo)記與優(yōu)良子代的篩選和培育[J]. 孫效文,魯翠云,曹頂臣,梁利群.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2009(02)
[6]馬氏珠母貝兩個(gè)不同地理種群的形態(tài)性狀和貝殼珍珠質(zhì)顏色比較分析[J]. 顧志峰,王嫣,石耀華,方建光,王清印,毛玉澤,王愛民.  漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展. 2009(01)
[7]微衛(wèi)星分子標(biāo)記輔助鏡鯉家系構(gòu)建[J]. 魯翠云,曹頂臣,孫效文,梁利群.  中國(guó)水產(chǎn)科學(xué). 2008(06)
[8]用鯉魚EST-SSRs分子標(biāo)記分析長(zhǎng)江黑龍江鯉種群結(jié)構(gòu)[J]. 魯翠云,全迎春,李大宇,孫效文,梁利群.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2007(06)
[9]微衛(wèi)星DNA標(biāo)記分析德國(guó)鏡鯉的遺傳潛力[J]. 侯寧,張研,魯翠云,李勇,李大宇,季旭,丁雷,孫效文.  遺傳. 2007(12)
[10]微衛(wèi)星DNA標(biāo)記分析野生鯉魚群體的遺傳多樣性（英文）[J]. 李大宇,康大海,殷倩茜,孫效文,梁利群.  遺傳學(xué)報(bào). 2007(11)

博士論文
[1]馬氏珠母貝生長(zhǎng)相關(guān)雜種優(yōu)勢(shì)和EST序列分析[D]. 王愛民.上海海洋大學(xué) 2011
[2]海灣扇貝微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)及遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建[D]. 李宏俊.中國(guó)科學(xué)院研究生院（海洋研究所） 2009
[3]合浦珠母貝貝殼形成相關(guān)蛋白及基因的研究[D]. 張岑.清華大學(xué) 2006

碩士論文
[1]馬氏珠母貝EST-SSR和SNP標(biāo)記開發(fā)及其與生長(zhǎng)及珍珠層性狀的關(guān)聯(lián)分析[D]. 邱櫻.海南大學(xué) 2013
[2]馬氏珠母貝生長(zhǎng)與生物礦化相關(guān)基因的SNP標(biāo)記開發(fā)[D]. 張楠.海南大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3050740