殺鮭氣單胞菌（Aeromonas salmonicida,As）是一類重要的咸淡水養(yǎng)殖動(dòng)物病原菌,主要引起鮭鱒魚(yú)類如虹鱒（Oncorhynchus mykiss）、金鱒（Oncorhynchus mykiss）和大西洋鮭（Salmo salar）等癤瘡病及潰瘍病,被感染魚(yú)體死亡率高影響范圍廣,并且其宿主范圍在逐年擴(kuò)大,嚴(yán)重制約了中國(guó)鮭鱒魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展。目前,中國(guó)一般采用化學(xué)藥物及各類抗生素防治殺鮭氣單胞菌,抗生素藥物的使用容易導(dǎo)致病原菌出現(xiàn)交叉耐藥反應(yīng),同時(shí)也使人類面臨環(huán)境污染及食品安全問(wèn)題。疫苗是防治殺鮭氣單胞菌的最有效方法,在國(guó)外,采用接種商業(yè)化疫苗方法預(yù)防此菌感染已取得較好的保護(hù)效果。因而針對(duì)虹鱒殺鮭氣單胞菌開(kāi)展免疫防控研究具有重要意義。本文選取蜂膠佐劑和弗氏完全佐劑分別添加到殺鮭氣單胞菌滅活疫苗中,然后免疫虹鱒,評(píng)價(jià)對(duì)的虹鱒相對(duì)免疫保護(hù)率,并采集虹鱒肝、脾臟、頭腎和鰓組織用于RNA的提取,分析疫苗對(duì)免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響,以期獲得具有良好免疫效果的佐劑聯(lián)合疫苗。本文主要內(nèi)容如下:第一部分:從本實(shí)驗(yàn)室保藏的2014-2015年分離自大西洋鮭和虹鱒等體內(nèi)的氣單胞菌50株,結(jié)合革蘭... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
    1.1 國(guó)內(nèi)外虹鱒（Oncorhynchus mykiss）養(yǎng)殖現(xiàn)狀
    1.2 殺鮭氣單胞菌（Aeromonas salmonicida）主要特征
    1.3 魚(yú)用佐劑研究進(jìn)展
        1.3.1 佐劑分類
        1.3.2 佐劑的作用機(jī)制
        1.3.3 蜂膠佐劑
    1.4 細(xì)胞因子
        1.4.1 白細(xì)胞介素（Interlenkkin，IL）
        1.4.2 干擾素（Interferon，IFN）
    1.5 主要組織相容性復(fù)合物（MHC）
    1.6 T細(xì)胞表面受體
    1.7 免疫球蛋白（Immunoglobulin）
    1.8 本研究的目的和意義
第二章 我國(guó)現(xiàn)行殺鮭氣單胞菌的分離鑒定及特性研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 菌株的分離培養(yǎng)與形態(tài)觀察
        2.2.2 生理生化鑒定
        2.2.3 16SrRNA序列測(cè)定
        2.2.4 fstA序列測(cè)定
    2.3 殺鮭氣單胞菌血清型分析
        2.3.1 抗原制備
        2.3.2 免疫
    2.4 殺鮭氣單胞菌血清學(xué)分析
    2.5 殺鮭氣單胞疫苗候選株的篩選
    2.6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.6.1 菌株的形態(tài)特征
        2.6.2 生理生化特性
        2.6.3 16SrRNA序列的PCR擴(kuò)增及比對(duì)結(jié)果
        2.6.4 fstA序列的PCR擴(kuò)增及比對(duì)結(jié)果
        2.6.5 殺鮭氣單胞菌血清型結(jié)果
        2.6.6 疫苗候選株篩選結(jié)果
    2.7 討論
第三章 殺鮭氣單胞菌SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 主要試劑與材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 引物設(shè)計(jì)與合成
        3.2.2 引物特異性檢測(cè)
        3.2.3 制備質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品
        3.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立、靈敏度及重復(fù)性分析
        3.2.5 SYBR-GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的應(yīng)用
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 引物特異性檢測(cè)
        3.3.2 SYBR GreenⅠReal-time PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.3.3 靈敏度檢測(cè)
        3.3.4 SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR的重復(fù)性分析
        3.3.5 SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法應(yīng)用
    3.4 討論
第四章 不同佐劑殺鮭氣單胞菌滅活疫苗對(duì)虹鱒免疫效果的研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)虹鱒
        4.1.3 蜂膠與弗氏完全佐劑
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)虹鱒暫養(yǎng)
        4.2.2 殺鮭氣單胞菌疫苗的制備
        4.2.3 疫苗無(wú)菌檢驗(yàn)和安全性檢驗(yàn)
        4.2.4 虹鱒半致死劑量（LD50）測(cè)定
        4.2.5 分組、免疫與采樣
        4.2.6 攻毒感染與免疫相對(duì)保護(hù)率
        4.2.7 RNA提取及cDNA合成
        4.2.8 熒光定量PCR所用引物的設(shè)計(jì)與合成
        4.2.9 熒光定量PCR檢測(cè)
        4.2.10 數(shù)據(jù)分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 疫苗無(wú)菌檢驗(yàn)和安全性檢驗(yàn)
        4.3.2 虹鱒LD50計(jì)算
        4.3.3 免疫相對(duì)保護(hù)率RPS
        4.3.4 熒光定量PCR所用引物的獲得
        4.3.5 IL-8 在肝、脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
        4.3.6 IL-1β在肝、脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
        4.3.7 MHCⅠ在肝、脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
        4.3.8 IFN-γ在肝、脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
        4.3.9 CD8在肝、脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
        4.3.10 IgM在肝、脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
        4.3.11 IgT在肝、脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
    4.4 討論
        4.4.1 蜂膠佐劑與弗氏完全佐劑對(duì)虹鱒免疫效果的分析
        4.4.2 細(xì)胞因子類相關(guān)基因的表達(dá)分析
        4.4.3 細(xì)胞表面分子相關(guān)基因的表達(dá)分析
        4.4.4 免疫球蛋白IgM和IgT基因的表達(dá)分析
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位論文期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]甘肅金鱒部分形態(tài)性狀對(duì)體質(zhì)量的影響以及IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ基因的SNPs與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)分析[D]. 楊建寶.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3040536