泛素-蛋白酶體途徑是重要的蛋白質(zhì)翻譯后的修飾過程,在細(xì)胞周期、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA修復(fù)和形態(tài)發(fā)生等各種生命過程中扮演著關(guān)鍵角色。目前,在無脊椎動(dòng)物中關(guān)于泛素的研究相對(duì)較少,特別是軟體動(dòng)物中僅發(fā)現(xiàn)了泛素化過程的存在,但具體的泛素分子及其作用機(jī)制尚不明確。在本研究中,我們從長牡蠣（Crassostrea gigas）中鑒定了一個(gè)泛素連接酶（ubiquitin-protein ligase）E3,研究了其在長牡蠣組織中的分布特點(diǎn)及在脂多糖（LPS）刺激下的免疫應(yīng)答過程中的作用。CgE3Rv1基因的開放閱讀框（open reading frame,ORF）包含1455個(gè)堿基,編碼484個(gè)氨基酸的多肽,預(yù)測(cè)分子質(zhì)量為54.89 kDa。CgE3Rv1的蛋白序列中含有兩個(gè)跨膜區(qū)域和一個(gè)RING-variant（RINGv）功能結(jié)構(gòu)域。CgE3Rv1的RINGv結(jié)構(gòu)域具有典型的C4HC3 zinc-finger-like骨架,與脊椎動(dòng)物和無脊椎動(dòng)物中已鑒定的泛素連接酶E3極為相似;同時(shí),通過系統(tǒng)進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)CgE3Rv1是一類與膜相關(guān)的RING-CH2（MARCH2）型泛素連接酶E3。熒光定量... 

【文章來源】：大連工業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

泛素-蛋白酶體途徑各組分的模式圖

圖 1.2 泛素-蛋白酶體途徑的過程Figure 1.2 The process of ubiquitin-proteasome pathway注：泛素激活酶 E1 將活化后的泛素分子轉(zhuǎn)移到泛素結(jié)合酶 E2 上，結(jié)合了泛素分子的 E2 通過泛素連接酶 E3 將泛素分子傳遞給底物，被多泛素化的底物被 26S蛋白酶體降解，泛素分子得到循環(huán)利用（圖片來自中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所，謝旗）。1.1.3 泛素-蛋白酶體途徑的主要功能泛素-蛋白酶體途徑的作用不僅是單純的介導(dǎo)蛋白質(zhì)降解，還通過泛素化修飾蛋白參與許多調(diào)控作用，是細(xì)胞生命活動(dòng)的調(diào)控因子，包括 DNA 損傷修復(fù)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞凋亡、介導(dǎo)內(nèi)吞作用、參與疾病反應(yīng)等[33]。1.1.3.1 參與 DNA 損傷修復(fù)基因組頻繁地受到內(nèi)部的或外部的各種因素作用而引起損傷，因此 DNA 修復(fù)是保持基因組完整性所必需的[34]。1986 年發(fā)現(xiàn) DNA 修復(fù)基因 RAD6 編碼泛素結(jié)合酶 E2，第一次揭示了泛素-蛋白酶體途徑在 DNA 損傷修復(fù)中的作用[35]。自此，泛素-蛋白酶體

第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 長牡蠣 CgE3Rv1 的分子特征及進(jìn)化分析3.1.1 長牡蠣 CgE3Rv1 的分子特征克隆獲得太平洋長牡蠣泛素連接酶 CgE3Rv1 基因，其編碼的開放閱讀框（Openreading frame，ORF）長度為 1455 bp，編碼一條由 484 個(gè)氨基酸殘基組成的多肽。預(yù)測(cè)分子量大小為 54.89 kDa，包含一個(gè) RINGv功能結(jié)構(gòu)域和兩個(gè)跨膜域（圖 3.1）。因?yàn)榭缒び蛟诖竽c桿菌中不能容易進(jìn)行表達(dá)，所以克隆表達(dá)的蛋白只含有 RINGv功能結(jié)構(gòu)域。重組蛋白 CgE3Rv1 編碼基因長度為 465bp，預(yù)測(cè)分子量大小為 18.5 kDa，等電點(diǎn)為 8.96。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3005875