促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）是協(xié)調(diào)應(yīng)激系統(tǒng)及下丘腦-垂體-腎上腺軸（HPA）的關(guān)鍵因子,其不僅作用于垂體,同時也廣泛分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和下丘腦,在脊椎動物的應(yīng)激反應(yīng)調(diào)節(jié)中起著至關(guān)重要的作用。本研究以草魚為試驗材料,克隆了草魚CRH基因和CRH-R1基因的全長cDNA序列,對健康草魚的心、脾、腎、肝、腦、皮、頭腎、鰓8個組織進(jìn)行了組織表達(dá)的差異分析,對草魚CRH基因在心、脾、腎、肝、腦、頭腎、鰓等組織進(jìn)行組化分析。本文的主要研究結(jié)果如下：1、根據(jù)GenBank中斑馬魚、人類、鯉魚的CRH基因序列的保守區(qū)設(shè)計簡并引物,擴(kuò)增出草魚CRH基因的部分序列。再通過RACE擴(kuò)增技術(shù)分別獲得草魚CRH基因的3’端和5’端序列,經(jīng)序列拼接獲得CRH基因的全長cDNA序列。經(jīng)分析表明,草魚的CRH基因的cDNA全長為907 bp,開放閱讀框共489bp,共編碼163個氨基酸,其中5’端非編碼區(qū)大小126bp,3’端非編碼區(qū)大小為292bp。草魚CRH基因的相對分子量約為18KD。2、根據(jù)克隆得到的CRH基因設(shè)計熒光定量PCR引物,以管家基因β-actin為內(nèi)參,采用熒光定量對草魚CRH在心、腎、頭腎... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素家族
        1.1.1 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素
        1.1.2 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素受體
        1.1.3 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素結(jié)合蛋白
    1.2 CRH和CRH-R1調(diào)節(jié)應(yīng)激系統(tǒng)的作用
        1.2.1 CRH對于大鼠應(yīng)激的研究
        1.2.2 CRH的體外細(xì)胞實驗研究
        1.2.3 CRH-R1對于動物應(yīng)激的研究
    1.3 魚類CRH和CRH-R1的研究進(jìn)展
    1.4 CRH和CRH-R1的展望
    1.5 本研究的目的與意義
第二章 草魚CRH基因cDNA全長克隆與序列分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 藥品及試劑
        2.1.3 主要實驗儀器設(shè)備
        2.1.4 引物設(shè)計
    2.2 實驗方法
        2.2.1 總RNA的提取
        2.2.2 草魚CRH基因cDNA的克隆與測序
        2.2.3 CRH基因3’端和5’端片段擴(kuò)增
        2.2.4 CRH基因3’端和5’端克隆、測序
        2.2.5 草魚CRH基因全長cDNA序列拼接及分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 草魚腦組織總RNA提取
        2.3.2 PCR擴(kuò)增結(jié)果
        2.3.3 草魚CRH基因序列分析
    2.4 討論
第三章 草魚CRH基因的表達(dá)分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 藥品及試劑
        3.1.3 儀器設(shè)備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 熒光定量PCR檢測草魚CRH基因在不同組織中的表達(dá)
        3.2.2 草魚CRH基因在不同組織的組織化學(xué)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 草魚總RNA的提取
        3.3.2 Real Time檢測CRH基因在草魚不同組織中的表達(dá)
    3.4 討論
第四章 草魚CRH-R1基因cDNA全長克隆與序列分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 藥品及試劑
        4.1.3 主要實驗儀器設(shè)備
        4.1.4 引物設(shè)計
    4.2 實驗方法
        4.2.1 動物材料獲得
        4.2.2 總RNA的提取
        4.2.3 草魚CRH-R1基因cDNA的克隆與測序
        4.2.4 CRH-R1基因3’端和5’端片段擴(kuò)增
        4.2.5 CRH-R1基因3’端和5’端克隆、測序
        4.2.6 草魚CRH-R1基因全長cDNA序列拼接及分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 草魚腦組織總RNA提取
        4.3.2 PCR擴(kuò)增結(jié)果
        4.3.3 草魚CRH-R1基因序列分析
    4.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]神經(jīng)肽CRH對原代大鼠皮層小膠質(zhì)細(xì)胞NO、TNF-α和IL-6釋放的影響[J]. 畢燕華,宋婷婷,陳學(xué)群,杜繼曾.  中國應(yīng)用生理學(xué)雜志. 2013(04)
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[6]促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素結(jié)合蛋白基因的研究進(jìn)展[J]. 李媛媛,白春艷,吳瀟,潘玉春.  上海畜牧獸醫(yī)通訊. 2008(02)
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博士論文
[1]CRH與Urocortin經(jīng)RhoGTPases調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞吞噬作用的機(jī)制研究[D]. 王伍超.第三軍醫(yī)大學(xué) 2009
[2]應(yīng)激對黃顙魚非特異性免疫細(xì)胞的影響[D]. 劉小玲.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006
[3]大劑量GC對PVN神經(jīng)元合成CRH的調(diào)節(jié)及機(jī)制研究[D]. 張岫竹.第三軍醫(yī)大學(xué) 2005

碩士論文
[1]CRH-R1同源性脫敏在大鼠創(chuàng)傷早期下丘腦室旁核CRH分泌調(diào)節(jié)中的作用[D]. 譚浩.第三軍醫(yī)大學(xué) 2003



本文編號：2986972