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溶藻弧菌rpoN(σ 54 )的敲除及其功能研究

發(fā)布時(shí)間:2021-01-09 11:04
  溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)既是海洋中的正常菌群之一,也是其優(yōu)勢(shì)菌群之一,還是人類和海洋動(dòng)物的重要病原菌。鞭毛、胞外多糖和生物膜與病原菌的粘附力、侵染力和致病力的強(qiáng)弱直接相關(guān)!鱰ssJ是溶藻弧菌HN08155(WT)的tssJ基因缺失株。本試驗(yàn)室之前的研究表明,溶藻弧菌tssJ對(duì)溶藻弧菌的鞭毛、水不溶性多糖和生物膜的形成具有正調(diào)控作用;對(duì)WT和△tssJ進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析表明,tssJ的缺失導(dǎo)致96個(gè)相關(guān)基因表達(dá)下調(diào),其中rpoN是眾多表達(dá)下調(diào)基因差異最大的基因之一,所以rpoN可能是這些表型改變的主要調(diào)控基因。為此,本文利用新型自殺質(zhì)粒pLP12構(gòu)建溶藻弧菌的rpoN基因缺失株(△rpoN),通過分析WT、△tssJ和△rpoN的表型差異,確定溶藻弧菌rpoN基因的主要功能及其與tssJ之間的相互作用。通過測(cè)定WT、△tssJ和△rpoN的生長曲線,發(fā)現(xiàn)三種菌株的生長趨勢(shì)一致,并且都在22h達(dá)到生長極限;三者生長速度比較結(jié)果為WT>△tsJ>△rpoN。WT、△ tssJ和△rpoN的泳動(dòng)能力為WT>△tssJ>△rpoN;鞭毛染色試... 

【文章來源】:海南大學(xué)海南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】:52 頁

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

溶藻弧菌rpoN(σ 54 )的敲除及其功能研究


圖1溶藻弧菌基因電泳檢測(cè)結(jié)果??

引物,模板


上游同源臂引物rpoiV-UF和rpoA^UR、下游同源臂引物/7J〇iV-DF和r/Jo/V-DR,??以質(zhì)粒?/poA^-TV?為模板、PrimeSTAR?Max?DNA?Polymerase?擴(kuò)增?rpoiV■核心序列外??的兩側(cè)翼序列分別為482bp,476bp?(圖3)。??1??.?.?'vid'l?e'?.is'?'?;"***???M5:?DNA?Marker?DL5000;泳道丨?J:1VU,ND??圖3?r/w/V基因的上下游同源臂電泳檢測(cè)結(jié)果??Fig.3?The?electrophoresis?test?results?oirpoN?gene's?ND?and?NU??19??

大腸桿菌


:?DNAMarkerDL5000;泳道?l:r;>圖2大腸桿菌r/^TV-Tl電泳檢測(cè)結(jié)?The?electrophoresis?test?results?of?rpo的獲得??V-UF和rpoA^UR、下游同源臂引rimeSTAR?Max?DNA?Polymerase?p,476bp?(圖3)。??1??.?.?'vid'l?e'?.is'?'?;"***???

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
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[2]細(xì)菌鞭毛運(yùn)動(dòng)、黏附和免疫逃逸機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 許綿,周明旭,朱國強(qiáng).  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2017(02)
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碩士論文
[1]溶藻弧菌野生株和突變株ΔtssJ的差異表達(dá)序列分析及其TssJ多抗制備[D]. 范雪亭.海南大學(xué) 2016
[2]tssJ基因?qū)θ茉寤【\(yùn)動(dòng)性和生物膜形成的影響[D]. 劉文竹.海南大學(xué) 2015
[3]溶藻弧菌毒力菌株基因缺失突變株的構(gòu)建及表型初步分析[D]. 李宏.海南大學(xué) 2013



本文編號(hào):2966528

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