淇河鯽（Qihe crucian carp Carassius auratus）,具有很高的營養(yǎng)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。近年來,高密度、集約化的養(yǎng)殖模式,導(dǎo)致魚類疾病暴發(fā)。因此,提高免疫能力對(duì)控制魚類疾病的發(fā)生顯得尤為重要。溶菌酶（Lysozyme,Lys）是一種重要的非特異性免疫因子,它通過水解細(xì)菌細(xì)胞壁的β-1,4糖苷鍵而殺死細(xì)菌,對(duì)魚類抵御外界細(xì)菌入侵具有重要作用。本研究以河南鶴壁水產(chǎn)養(yǎng)殖場的淇河鯽為研究對(duì)象,以肝臟總RNA為模板,使用RT-PCR和RACE技術(shù)克隆淇河鯽c型和g型溶菌酶c DNA全長;采用熒光定量PCR法和比濁法對(duì)淇河鯽不同組織溶菌酶的表達(dá)及酶活性進(jìn)行測定;同時(shí)對(duì)經(jīng)嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）和脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）處理后,各組織溶菌酶表達(dá)變化及酶活性進(jìn)行分析,為研究淇河鯽溶菌酶的免疫防御功能及分子機(jī)制奠定理論基礎(chǔ)�；蚩寺～@得c型溶菌酶c DNA全長為679 bp,開放閱讀框?yàn)?38 bp,編碼145個(gè)氨基酸。理論等電點(diǎn)為8.86,相對(duì)分子質(zhì)量為1.66 ku。含有兩個(gè)保守的氨基酸催化位點(diǎn),分別是Glu（第53位... 

【文章來源】：河南師范大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 前言
    1.1 魚類非特異性免疫
        1.1.1 非特異性免疫細(xì)胞
        1.1.2 非特異性免疫因子
    1.2 溶菌酶的研究進(jìn)展
        1.2.1 溶菌酶的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 溶菌酶的分類
        1.2.3 溶菌酶的結(jié)構(gòu)
        1.2.4 溶菌酶的生物學(xué)特性
        1.2.5 溶菌酶測定方法
    1.3 魚類溶菌酶研究
        1.3.1 魚類溶菌酶種類分布
        1.3.2 魚類溶菌酶結(jié)構(gòu)特征
        1.3.3 魚類溶菌酶在組織中的表達(dá)及活性
        1.3.4 應(yīng)激條件下魚類溶菌酶表達(dá)變化
        1.3.5 魚類溶菌酶重組蛋白表達(dá)及抗菌譜研究
    1.4 溶菌酶的應(yīng)用
        1.4.1 溶菌酶在漁業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用
        1.4.2 溶菌酶在疾病診療中的應(yīng)用
        1.4.3 溶菌酶在轉(zhuǎn)基因工程中的應(yīng)用
    1.5 論文的研究背景、目的意義及技術(shù)路線
第二章 淇河鯽c型和g型溶菌酶基因克隆
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)用魚
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 引物設(shè)計(jì)及合成
        2.2.2 淇河鯽總RNA的提取
        2.2.3 淇河鯽cDNA第一條鏈合成及中間片段擴(kuò)增
        2.2.4 淇河鯽c型和g型溶菌酶 3’RACE
        2.2.5 淇河鯽c型和g型溶菌酶 5’RACE
        2.2.6 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠回收
        2.2.7 膠回收產(chǎn)物與T載體連接
        2.2.8 大腸桿菌DH5α 感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化
        2.2.9 陽性克隆的檢測
        2.2.10 序列拼接及分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 肝臟總RNA的提取
        2.3.2 淇河鯽c型和g型溶菌酶中間片段克隆
        2.3.3 淇河鯽c型和g型溶菌酶 3’端擴(kuò)增
        2.3.4 淇河鯽c型和g型溶菌酶 5’端擴(kuò)增
        2.3.5 序列拼接及分析
        2.3.6 淇河鯽c型和g型溶菌酶高級(jí)結(jié)構(gòu)分析
        2.3.7 淇河鯽c型和g型溶菌酶同源性分析及進(jìn)化樹構(gòu)建
    2.4 討論
第三章 嗜水氣單胞菌和脂多糖處理后淇河鯽各組織溶菌酶基因表達(dá)量及酶活性變化
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.2 淇河鯽馴養(yǎng)
        3.1.3 嗜水氣單胞菌的培養(yǎng)及侵染
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 淇河鯽不同組織溶菌酶mRNA表達(dá)量
        3.2.2 淇河鯽不同器官組織溶菌酶活性測定
        3.2.3 嗜水氣單胞菌和LPS處理后溶菌酶基因表達(dá)的測定
        3.2.4 嗜水氣單胞菌和LPS處理后溶菌酶活性的測定
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 淇河鯽c型和g型溶菌酶在不同器官組織中的表達(dá)
        3.3.2 淇河鯽不同器官組織溶菌酶活性
        3.3.3 嗜水氣單胞菌和LPS處理后c型和g型溶菌酶的表達(dá)變化
        3.3.4 嗜水氣單胞菌和LPS處理后溶菌酶活性變化
    3.4 討論
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：2960475