脊椎動(dòng)物的免疫系統(tǒng)由先天免疫和適應(yīng)免疫組成,無(wú)脊椎動(dòng)物缺乏特有的適應(yīng)性免疫,主要依靠先天免疫抵御病原微生物的入侵。有關(guān)果蠅的先天免疫研究的比較深入,發(fā)現(xiàn)了果蠅中存在三條主要的免疫相關(guān)信號(hào)通路,Toll、IMD和Jak/Stat信號(hào)通路,有關(guān)這三條信號(hào)通路的調(diào)控也有相關(guān)報(bào)道。在其他無(wú)脊椎動(dòng)物如對(duì)蝦中,也存在類似的信號(hào)通路,但是關(guān)于這些信號(hào)通路調(diào)控的研究報(bào)道卻很少。本論文主要研究了對(duì)蝦中Toll和Jak/Stat信號(hào)通路的調(diào)控;另外還對(duì)感知和識(shí)別病原的模式識(shí)別受體纖維蛋白原相關(guān)蛋白在抗細(xì)菌免疫中的功能開(kāi)展了研究。1.β抑制蛋白通過(guò)調(diào)控Dorsal的核移位和轉(zhuǎn)錄活性來(lái)負(fù)性調(diào)控Toll信號(hào)通路Toll信號(hào)通路在果蠅和哺乳動(dòng)物先天免疫中起著非常重要的作用。Toll信號(hào)通路的激活和抑制在這些生物中受到精細(xì)的調(diào)控。盡管已經(jīng)在對(duì)蝦中發(fā)現(xiàn)了 Toll信號(hào)通路的一些關(guān)鍵的分子元件,但是關(guān)于這條信號(hào)通路的功能和調(diào)控研究的很少。為了研究β抑制蛋白（β-arrestins）對(duì)Toll信號(hào)通路的調(diào)控,我們首先利用Staphylocaccus aureus刺激對(duì)蝦,檢測(cè)Toll信號(hào)通路轉(zhuǎn)錄因子Dorsal的核移位變... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 無(wú)脊椎動(dòng)物先天免疫研究進(jìn)展
    1. 無(wú)脊椎動(dòng)物的Toll信號(hào)通路
    2. 無(wú)脊椎動(dòng)物的IMD信號(hào)通路
    3. 無(wú)脊椎動(dòng)物的Jak/Stat信號(hào)通路
    4.抑制蛋白arrestins對(duì)調(diào)控信號(hào)通路機(jī)制的研究
    5. 無(wú)脊椎動(dòng)物PRRs中的FREPs
    6. 本論文研究的目的,結(jié)果及意義
第二章 在對(duì)蝦中,β-arrestin通過(guò)調(diào)控Dorsal的轉(zhuǎn)位和轉(zhuǎn)錄活性來(lái)負(fù)性調(diào)控Toll信號(hào)通路
    一、前言
    二、材料和方法
        1. 試劑和儀器
        2. 細(xì)菌刺激和樣品的收集
        3. cDNA的克隆和序列分析
        4. 組織的提取和半定量RT-PCR水平和western blot水平的表達(dá)模式
        5. 重組蛋白的表達(dá)和抗體的制備
        6. 熒光實(shí)時(shí)定量PCR反轉(zhuǎn)得到的cDNA
        7. RNAi實(shí)驗(yàn)
        8. 核質(zhì)提取的實(shí)驗(yàn)
        9. 細(xì)菌清除和存活率的實(shí)驗(yàn)
        10. Pull-down實(shí)驗(yàn)
        11. 免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)
        12. 免疫共沉淀
        13. PD98059抑制劑實(shí)驗(yàn)
    三、結(jié)果
        1. 在S. aureus刺激后Toll信號(hào)通路被激活并在對(duì)蝦抗細(xì)菌免疫中起著關(guān)鍵的作用
        2. βArr1,βarr2和ERK參與了Toll信號(hào)通路的調(diào)控
        3. βArrs和Cactus作用形成βarr-Cactus-Dorsal三聚體
        4. βArrs的N-terminal結(jié)構(gòu)域與Cactus的PEST結(jié)構(gòu)域具有相互作用
        5. 用GST-binding柱料和His-binding柱料來(lái)做pull down實(shí)驗(yàn)
        6. Cactus的ANK結(jié)構(gòu)域和Dorsal的RHD結(jié)構(gòu)域作用及βarrs,Cactus和Dorsal形成復(fù)合物
        7. βArrs和非磷酸化的ERK相互作用抑制ERK的磷酸化
        8. βArrs的C-terminus與ERK作用
        9. ERK影響細(xì)胞核中Dorsal的磷酸化水平
    四、討論
第三章 β-Arrestin 1與TC45作用使Stat去磷酸化進(jìn)而抑制抗菌肽的表達(dá)
    一、前言
    二、材料和方法
        1. 試劑和儀器
        2. 組織分布
        3. 分子克隆和序列分析
        4. 重組表達(dá)和抗體制備
        5. RNAi實(shí)驗(yàn)
        6. 細(xì)菌的清除和死亡率實(shí)驗(yàn)
        7. Western blotting分析
        8. 免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)
        9. 免疫共沉淀
        10. 抑制劑實(shí)驗(yàn)
        11. Pull-down實(shí)驗(yàn)
        12. 干擾掉Stat,βarr1和TC45再用形V.anguillarum刺激檢測(cè)AMPs的變化
        13. βArr1和TC45過(guò)表達(dá)
    三、結(jié)果
        1. 對(duì)蝦中βarrs,TC45和Stat的組織分布
        2. Stat參與了對(duì)蝦抗細(xì)菌免疫
        3. 干擾掉βarr1和TC45后Stat的磷酸化水平升高
        4. βArr1和TC45通過(guò)使活化的Stat的去磷酸化負(fù)性調(diào)控了Stat的抗細(xì)菌免疫
        5. βArr1,TC45和Stat三者之間能發(fā)生相互作用
        6. βArr1的C-terminal結(jié)構(gòu)域和Stat的Link結(jié)構(gòu)域作用
599-800,βarrl的C-terminal結(jié)構(gòu)域作用">        7. TC45分別與Stat^599-800,βarrl的C-terminal結(jié)構(gòu)域作用
        8. βArr1和TC45影響Stat所調(diào)控的AMPs的表達(dá)
    四、討論
第四章 一種纖維蛋白原相關(guān)蛋白參與對(duì)蝦的抗細(xì)菌免疫
    一、引言
    二、材料和方法
        1. 試劑和儀器
        2. 病原免疫刺激和組織樣提取
        3. RNA的提取和cDNA的合成
        4. MjFREP2全長(zhǎng)的克隆
        5. 序列BLAST分析和相似性比較
        6. MjFREP2蛋白的表達(dá)和純化及抗體的制備
        7. 半定量PCR和熒光定量PCR
        8. Western blot分析
        9. 細(xì)菌凝集實(shí)驗(yàn)
        10. 細(xì)菌結(jié)合實(shí)驗(yàn)
        11. 酶聯(lián)免疫反應(yīng)實(shí)驗(yàn)（ELISA）
        12. 免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)
        13. 細(xì)菌清除實(shí)驗(yàn)
        14. 熒光標(biāo)記細(xì)菌和吞噬實(shí)驗(yàn)
        15. RNAi實(shí)驗(yàn)
        16. 對(duì)蝦死亡率實(shí)驗(yàn)
    三、結(jié)果
        1. MjFREP2基因克隆和序列分析
        2. MjFREP2廣泛分布各個(gè)組織中及受到細(xì)菌刺激之后上調(diào)表達(dá)
        3. MjFREP2在鈣離子存在下能夠凝集細(xì)菌
        4. MjFREP2通過(guò)結(jié)合多糖結(jié)合到細(xì)菌的表面
        5. MjFREP2被血細(xì)胞分泌出去并結(jié)合到血淋巴中的細(xì)菌上
        6. 在對(duì)蝦體內(nèi),MjFREP2促進(jìn)了細(xì)菌的清除
        7. MjFREP2促進(jìn)了對(duì)蝦血細(xì)胞的吞噬
    四、討論
論文創(chuàng)新點(diǎn)總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號(hào)：2937562