鱖（Siniperca chuatsi）是我國優(yōu)質(zhì)淡水魚的重要品種,但隨著鱖養(yǎng)殖技術(shù)問題的解決和養(yǎng)殖規(guī)模的逐年擴(kuò)大和養(yǎng)殖密度的提高,嚴(yán)重的病害問題已成為限制鱖養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的主要瓶頸。特別是1994年起由傳染性脾腎壞死病毒（Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV）引起的鱖虹彩病毒病最為嚴(yán)重。因此,對其開展深入研究以及免疫防控研究意義重大。病毒滅活疫苗因具有制備簡便、免疫效果穩(wěn)定、研發(fā)周期短等優(yōu)勢而成為最具產(chǎn)業(yè)前景的疫苗之一。而有效的免疫佐劑可以提高病毒滅活疫苗的特異性免疫應(yīng)答,因此對ISKNV病毒滅活疫苗進(jìn)行免疫佐劑的篩選是十分必要的。在這項(xiàng)研究中,首先從鱖ISKNV感染下制備了滅活病毒疫苗,選擇了殼聚糖、poly（I:C）、山莨菪堿和ims1312四種佐劑分別于疫苗混合后進(jìn)行注射免疫,隨后為了研究佐劑增強(qiáng)疫苗的保護(hù)效果,分別進(jìn)行了病理學(xué)組織切片,血清中酶活動力學(xué)檢測,qRT-PCR和個(gè)體死亡率實(shí)驗(yàn)。主要的研究結(jié)果如下:1.殼聚糖佐劑顯著增強(qiáng)ISKNV感染后疫苗對肝脾保護(hù)效果在病毒攻毒后第7天對每個(gè)處理組的肝臟和脾臟分別取樣,制備... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１病鱖脾臟細(xì)胞的病毒電鏡?閣１－２病毒顆粒在電鏡觀察下呈??１８

為了探索ＩＳＫＮＶ在體內(nèi)感染后鱖的病理表觀變化和各器官的解剖變??化，共分為對照組與感染組，觀察兩組間的變化，結(jié)果表明，對照組和感染組兩??組間出現(xiàn)顯著差異（圖３－１?），從圖中可以發(fā)現(xiàn)對照組和感染組之間出現(xiàn)了明顯區(qū)??別，圖３－１Ａ所示感染組鰓蓋底部出現(xiàn)了明顯的出血現(xiàn)象，這是鱖感染了?ＩＳＫＮＶ??的表觀明顯癥狀。分別對兩組魚進(jìn)行解剖后觀察，腹腔內(nèi)各個(gè)器官也出現(xiàn)了明顯??的病理變化，其中打開鰓蓋后發(fā)現(xiàn)，與對照組相比感染組的鰓絲明顯的腫脹發(fā)白??（圖３－１Ｂ）；同時(shí)發(fā)現(xiàn)腹腔內(nèi)的肝臟也發(fā)白腫脹并帶有彌散化癥狀（圖３－１Ｃ）；??當(dāng)觀察到中腎器官時(shí)，感染組相比對照組中腎出現(xiàn)明顯的腫脹充血，這是由于病??毒侵入時(shí)中腎作為免疫器官和代謝器官被破壞出現(xiàn)的典型癥狀（圖３－１Ｄ）；并且??我們觀察到打開腹腔時(shí)對照組的腹腔內(nèi)各組織正常且并沒有出現(xiàn)黃色腹水，而感??染組作為很明顯的黃色腹水是ＩＳＫＮＶ感染的明顯癥狀（圖３－１Ｅ）。隨后對病魚??的組織混合后提�。模危吝M(jìn)行ＩＳＫＮＶ的分子水平檢測，通過與陽性對照的對比??發(fā)現(xiàn)病魚組織中存在明顯的ＩＳＫＮＶ條帶（圖３－１Ｆ，?Ｇ）。以上結(jié)果均證明ＩＳＫＮＶ??對于鱖的感染明顯成功

病毒滅活疫苗的安全性。從圖中我們可以看出，經(jīng)過７２?ｈ的恒溫培養(yǎng)后，觀察??到ＬＢ固體培養(yǎng)板沒有出現(xiàn)雜菌菌落，也沒有出現(xiàn)大量的真菌，用于驗(yàn)證制備的??病毒滅活疫苗并沒有混合其他的雜菌，排除了細(xì)菌對實(shí)驗(yàn)的影響（圖３－２Ａ）。在??熒光定量實(shí)驗(yàn)中，為了使定量結(jié)果準(zhǔn)確，對熒光定量ＰＣＲ的目標(biāo)基因進(jìn)行引物??檢測，必須使定量的引物形成單一條帶，于是分別對內(nèi)參基因伽和ＴＴＶＦ－ｃｔ、??／ｇＭ、吻以及ＺＳ幻ＶＫ－Ｗ７基因進(jìn)行定量引物凝膠電泳檢測，如圖所示，五個(gè)定??量基因的條帶均單一清晰，這為后面的實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)（圖３－２?８，（：，０，艮［）．??ｍｍ??焉函層｜｜＿??２５０ｂｐ?２５０ｂｐｆＹ?Ｙ?ｆ??ｌＯＯｂｐ?ＸＳＳｂｐ??ＨＨＢＨｉ?ＨｌＨＩＨｌ??圖３－２檢測定量引物及病毒滅活疫苗安全性。（Ａ）檢測疫苗的安全性。（Ｂ）核酸凝膠檢測片??（Ｃ）核酸凝膠檢測７７＾ａ．?（Ｄ）核酸凝膠檢測每Ｍ?（Ｅ）核酸凝膠檢測�。澹颍鳎�?（Ｆ）核酸凝膠檢測／５幻不如７．??Ｆｉｇ．?３－２?Ｔｏ?ｄｅｔｅｃｔ?ｔｈｅ?ｓａｆｅｔｙ?ｏｆ?ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ｐｒｉｍｅｒｓ?ａｎｄ?ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ?ｖｉｒｕｓ?ｖａｃｃｉｎｅ．?（Ａ）?Ｔｅｓｔ?ｔｈｅ?ｓａｆｅｔｙ??ｏｆ?ｔｈｅ?ＩＳＫＮＶ?ｖａｃｃｉｎｅ．?（Ｂ）?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｆｉ－ａｃｔｉｎ?ｂｙ?ｎｕｃｌｅｉｃ?ａｃｉｄ?ｇｅｌ．?（Ｃ）?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＴＮＦ－ａ?ｂｙ?ｎｕｃｌｅｉｃ?ａｃｉｄ?ｇｅｌ．??（Ｄ）?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＩｇＭ?ｂｙ?ｎｕｃｌｅｉｃ?ａｃｉｄ?ｇｅｌ．?（Ｅ）Ｄｅｔｅｃｔｉ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：2933726