樹突狀細(xì)胞（Dendritic cell,DC）在調(diào)控機(jī)體免疫中發(fā)揮著關(guān)鍵作用,通過(guò)抗原遞呈作用將抗原物質(zhì)呈遞給T淋巴細(xì)胞從而決定免疫反應(yīng)和免疫耐受,并分泌多種免疫相關(guān)細(xì)胞因子調(diào)控機(jī)體免疫活動(dòng)。本研究旨在分離并鑒定草魚（Ctenopharyngodon Idellus）樹突狀細(xì)胞,通過(guò)轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)分析從草魚腸道中分離出的一株枯草芽孢桿菌（Bacillus Subtilis）Ch9對(duì)草魚DC基因表達(dá)的影響,探討草魚DC基因表達(dá)與機(jī)體免疫功能之間的聯(lián)系。主要研究?jī)?nèi)容和試驗(yàn)結(jié)果如下:機(jī)械法分離獲得草魚脾臟單細(xì)胞懸液,體外培養(yǎng)5 d后,密度梯度離心法獲得一類形態(tài)上具有典型樹突樣突起的細(xì)胞,Transwell遷移實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)這類細(xì)胞在LPS與嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）刺激下,遷移細(xì)胞數(shù)量顯著高于對(duì)照組和益生枯草芽孢桿菌處理組（B.Subtilis）。同種異體混合淋巴反應(yīng)（Mixed Lymphocyte Reaction,MLR）表明這類細(xì)胞可顯著激活同種異體淋巴細(xì)胞的增殖且呈劑量依賴性。RT-qPCR法檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記分子CD80/86和CD83的表達(dá),LPS刺激12... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)錄組分析流程

草魚樹突狀細(xì)胞的分離鑒定和益生芽孢桿菌對(duì)其功能的影響A 文庫(kù)的構(gòu)建和 Illumina 測(cè)序品檢測(cè)合格后，用帶有 Oligo（dT）的磁珠，通過(guò) A-T 互補(bǔ) ployA 尾結(jié)合的方式富集真核生物的 mRNA。隨后加入 fragmRNA 打斷成短片段，以 mRNA 為模板，用六堿基隨機(jī)引物（合成一鏈 cDNA，然后加入緩沖液、dNTPs 和 DNA polymerasA，隨后利用 AMPure XP beads 純化雙鏈 cDNA。純化的雙鏈 cD復(fù)、加 A 尾并連接測(cè)序接頭，然后用 AMPure XP beads 進(jìn)行后進(jìn)行 PCR 富集得到最終的 cDNA 文庫(kù)。文庫(kù)構(gòu)建原理如圖

草魚樹突狀細(xì)胞的分離鑒定和益生芽孢桿菌對(duì)其功能的影響Millions base pairs sequenced）是每百萬(wàn) fragments 中來(lái)自某一基因每千堿基長(zhǎng)度的 fragments 數(shù)目，其同時(shí)考慮了測(cè)序深度和基因長(zhǎng)度對(duì) fragments 計(jì)數(shù)的影響，是目前最為常用的基因表達(dá)水平估算方法（Trapnell et al 2010）。本研究采用HTSeq 軟件對(duì)各樣品進(jìn)行基因表達(dá)水平分析，使用的模型為 union。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：2927709