蟹類作為一種營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、肉質(zhì)鮮美的水產(chǎn)品,廣受消費(fèi)者喜愛,但是隨之引起的食物過(guò)敏發(fā)病率持續(xù)上升。本文以擬穴青蟹（Scylla paramamosain）為研究對(duì)象,對(duì)青蟹中的新型過(guò)敏原肌質(zhì)鈣結(jié)合蛋白（sarcoplasmic calcium binding protein,SCP）進(jìn)行重組表達(dá),對(duì)其抗原表位進(jìn)行定位分析,探討酶法交聯(lián)反應(yīng)、美拉德反應(yīng)對(duì)重組SCP（rSCP）致敏性的影響,以期為過(guò)敏性疾病診斷和低致敏性食品開發(fā)提供理論依據(jù)。本研究首先從擬穴青蟹肌肉中純化出分子量約20 kDa的SCP,通過(guò)免疫新西蘭大白兔獲得兔抗青蟹SCP血清,純化得到兔抗SCP-IgG多克隆抗體。構(gòu)建表達(dá)載體pET-22b-SCP,在E.coli Rossetta菌株中誘導(dǎo)表達(dá)獲得可溶性的rSCP。圓二色譜、抑制性ELISA、免疫雜交分析結(jié)果顯示,rSCP與天然SCP（nSCP）均呈典型的α/β蛋白特征,在Ig E結(jié)合活性方面能夠相互抑制,在高溫（60℃¹00℃）、弱酸（pH 2.0⁵.0）、強(qiáng)堿（pH 10.0¹1.0）條件下均易發(fā)生聚合... 

【文章來(lái)源】：集美大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號(hào)表
第1章 引言
    1.1 食物過(guò)敏概況
    1.2 食物過(guò)敏反應(yīng)機(jī)制及診斷
    1.3 水產(chǎn)食物過(guò)敏及其過(guò)敏原
    1.4 水產(chǎn)過(guò)敏原抗原表位的研究進(jìn)展
    1.5 食物過(guò)敏原的加工消減技術(shù)
    1.6 本研究的目的和意義
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 動(dòng)物
        2.1.2 甲殼類過(guò)敏患者血清
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 主要溶液配制
    2.2 方法
        2.2.1 SCP的純化及抗體制備
        2.2.2 SCP的重組表達(dá)
        2.2.3 SCP的性質(zhì)分析
        2.2.4 SCP的抗原表位分析
        2.2.5 rSCP的食品加工處理
        2.2.6 統(tǒng)計(jì)分析
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 擬穴青蟹SCP的純化及抗體制備
        3.1.1 擬穴青蟹SCP的純化鑒定
        3.1.2 SCP多克隆抗體純化及效價(jià)分析
    3.2 擬穴青蟹SCP的重組表達(dá)
        3.2.1 重組表達(dá)載體構(gòu)建
        3.2.2 重組蛋白的表達(dá)、純化及鑒定
    3.3 SCP的性質(zhì)分析
        3.3.1 rSCP與nSCP的pH穩(wěn)定性及熱穩(wěn)定性比較
        3.3.2 rSCP與nSCP的二級(jí)結(jié)構(gòu)比較
        3.3.3 rSCP與nSCP的IgE結(jié)合活性比較
        3.3.4 不同來(lái)源SCP的免疫交叉反應(yīng)分析
        3.3.5 rSCP小鼠敏化模型分析
        3.3.6 rSCP對(duì)患者外周血嗜堿性粒細(xì)胞的激活能力分析
    3.4 SCP抗原表位分析
        3.4.1 噬菌體隨機(jī)肽庫(kù)親和淘選
        3.4.2 SCP的IgG抗原表位分析
        3.4.3 SCP的IgE抗原表位分析
        3.4.4 IgG表位與IgE表位的分析比較
    3.5 食品加工處理對(duì)rSCP致敏性的影響
        3.5.1 食品加工處理?xiàng)l件的優(yōu)化
        3.5.2 食品加工處理對(duì)rSCP結(jié)構(gòu)及致敏性的影響
        3.5.3 食品加工產(chǎn)物的消化穩(wěn)定性分析
        3.5.4 美拉德反應(yīng)產(chǎn)物的糖化位點(diǎn)鑒定
        3.5.5 樹突細(xì)胞對(duì)rSCP加工產(chǎn)物的吞噬情況
        3.5.6 rSCP加工產(chǎn)物對(duì)嗜堿性粒細(xì)胞的活化能力分析
第4章 討論
    4.1 SCP的重組表達(dá)與性質(zhì)分析
    4.2 SCP的抗原表位分析
    4.3 食品加工處理對(duì)SCP結(jié)構(gòu)與表位的影響
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
在學(xué)期間科研成果情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]噬菌體展示技術(shù)定位主要食物過(guò)敏原表位的研究進(jìn)展[J]. 袁水林,李欣,陳紅兵,高金燕,熊鼎.  食品工業(yè)科技. 2015(03)
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博士論文
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碩士論文
[1]皺紋盤鮑絲氨酸蛋白酶的基因克隆、體外表達(dá)及其免疫調(diào)控作用[D]. 胡健健.集美大學(xué) 2017
[2]章魚新型過(guò)敏原研究[D]. 陳仲瑋.集美大學(xué) 2016
[3]擬穴青蟹過(guò)敏原精氨酸激酶的抗原表位分析研究[D]. 楊陽(yáng).集美大學(xué) 2015
[4]多酚氧化酶交聯(lián)對(duì)花生過(guò)敏原蛋白Ara h 2致敏性的影響研究[D]. 韓遠(yuǎn)龍.南昌大學(xué) 2013
[5]克氏原螯蝦過(guò)敏原的性質(zhì)研究[D]. 陳亨莉.集美大學(xué) 2013
[6]擬穴青蟹精氨酸激酶的過(guò)敏性及其構(gòu)效關(guān)系的初步研究[D]. 毛海燕.集美大學(xué) 2013
[7]章魚過(guò)敏原的研究[D]. 沈海旺.集美大學(xué) 2012
[8]擬穴青蟹過(guò)敏原的性質(zhì)研究[D]. 余惠琳.集美大學(xué) 2011
[9]蝦類過(guò)敏原的活性分析及其抗原表位的研究[D]. 鄭禮娜.中國(guó)海洋大學(xué) 2011
[10]牛乳中α-乳白蛋白的表位定位研究[D]. 文學(xué)方.南昌大學(xué) 2010



本文編號(hào)：2924073