黑殼長牡蠣的育種工作已取得一定的進展,但長牡蠣黑色素的生成機制尚不明確。視黃酸作為生物體內(nèi)一種重要的活性物質(zhì),除了在早期調(diào)控胚胎發(fā)育和分化外,還對發(fā)育過程中的體色變化有重要影響。關(guān)于這方面在長牡蠣的前期工作中,沒有發(fā)現(xiàn)酪氨酸酶基因的編碼區(qū)變異與殼色形成有關(guān),但發(fā)現(xiàn)視黃醛脫氫酶和酪氨酸酶基因在黑殼牡蠣外套膜中的轉(zhuǎn)錄水平顯著高于白殼牡蠣,基于前期工作和前人成果,我們提出假設(shè):視黃醛脫氫酶基因表達上調(diào)后,能催化產(chǎn)生更多的視黃酸,視黃酸將與視黃酸受體結(jié)合,形成"視黃酸-視黃酸受體"復(fù)合物,復(fù)合物會與酪氨酸酶基因調(diào)控區(qū)的視黃酸反應(yīng)元件結(jié)合,上調(diào)酪氨酸酶基因表達,然后生成更多的黑色素。本文的主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:1長牡蠣的視黃酸暴露生理實驗研究以活體長牡蠣為實驗材料從生理生化角度,將外源視黃酸進行體表注射暴露,同時控制視黃酸為變量設(shè)置溶劑對照實驗,暴露結(jié)束后分別取外套膜組織和外殼等,利用光學(xué)分析儀器進行表觀色素差異分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)視黃酸的注射暴露會使長牡蠣內(nèi)殼顏色加深,且外套膜黑色素的相對含量變化差異顯著,可分析原因為高視黃酸含量的體內(nèi)環(huán)境可能會促使黑色素的含量升高。利用軟體動物專用酶聯(lián)免疫試劑盒... 

【文章來源】：魯東大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

視黃酸注射組A和對照組B的長牡蠣Figure2.1PacificoysterofRetinoicacidinjectiongroupAandcontrolgroupBAB

蠣（A 組）的外套膜外邊緣的腔道中如圖 2.2，注射量為 50μl（可，如用 10μl 的進樣器注射 5 次），另 組長牡蠣（B 組）作為溶劑等量的 DMSO 進行注射，注射完成后放回原養(yǎng)殖環(huán)境繼續(xù)飼養(yǎng)，以旋藻為餌料每天投喂，該注射操作每 2 天進行 次，共 5 次，10 天射。利用解剖工具對 A、B 兩組長牡蠣外套膜進行取樣備存，取樣過程上進行操作，將兩組長牡蠣的外套膜利用液氮取樣保存。其中，0mg 外套膜樣品用于實驗檢測，剩余外套膜組織同樣取出備份凍存殼剔除其他組織后完整保留，以做觀察。將取樣的外套膜每組每只樣品取 100mg（濕重）置于 1.5ml 離心管 Xing 等[108]的方法加入 1ml 的 1.0M 氫氧化鈉溶液，置于 80℃水浴 30min，10000g 離心 5min，棄沉淀取上清，利用紫外可見分光光0nm 波長下檢測吸光值（同濃度的氫氧化鈉溶液調(diào)零），將數(shù)據(jù)整理作表并分析結(jié)果，以此說明視黃酸注射對黑色素含量的影響。

視黃酸調(diào)控長牡蠣酪氨酸酶基因表達的研究2.3 結(jié)果2.3.1 外殼表征變化自兩組長牡蠣在進行視黃酸注射對比實驗開始起，觀察并記錄外殼顏色變化外殼的變化，將有顏色沉積變化者用相機記錄如圖 2.3 所示。其中 A 組表殼內(nèi)表面顏色沉著相比 B 組較為明顯，然而 B 組樣品也并非沒有沉色，只是相對 A 組較淺。該結(jié)果與預(yù)期實驗結(jié)果相符，能夠反映出視黃酸的存在與長牡蠣的色素沉著有 定的關(guān)系。

【參考文獻】：
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本文編號：2922278