本文通過(guò)線(xiàn)性連續(xù)梯度非變性電泳結(jié)合鄰苯二酚發(fā)色法分離純化了光棘球海膽（Strongylocentrotus nudus）體腔液上清中的酚氧化酶（PO）。結(jié)果顯示:光棘球海膽體腔液上清中存在3種PO,在聚丙烯酰胺凝膠中與鄰苯二酚反應(yīng)分別呈現(xiàn)褐色、黃色和紫色,根據(jù)其分子質(zhì)量從高到低依次命名為SnPO1,SnPO2和SnPO3。分析研究了PO的最適溫度和pH、底物特異性、動(dòng)力學(xué)參數(shù)、金屬離子和抑制劑對(duì)酶活的影響。結(jié)果顯示:光棘球海膽PO可有效氧化左旋多巴（L-DOPA）、多巴胺和對(duì)苯二酚,但不能氧化酪氨酸,表明該酶可催化鄰二酚和對(duì)二酚類(lèi)底物而不能催化單酚類(lèi)底物,屬于漆酶型酚氧化酶;SnPO1,SnPO2和SnPO3的最適溫度分別為75℃、70℃和40℃,最適pH分別為7.0、9.0和8.0;光棘球海膽PO在沸水中孵育60min后活力顯著增強(qiáng)表明SnPO1,SnPO2和SnPO3是嗜熱的;SnPO1活力可被Cu2+、Mn2+和Fe2+顯著增強(qiáng),被Pb2+、Cd2+、EDTA、DETC、亞硫酸鈉和抗壞血酸抑制,而SnPO2和SnPO3卻受Pb2+和Cd2+影響不大,表明這三種酚氧化酶是含銅的,并... 

【文章來(lái)源】：大連海洋大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：33 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

光棘球海膽體腔液上清非變性電泳圖

13圖2 溫度和pH對(duì)光棘球海膽PO活力的影響Fig. 2. The effects of temperature and pH on the proteins with PO-like activities in S. nudus. (A) The optimumtemperature of SnPOs. (B) Thermostable analysis of SnPOs. (C) The optimum pH of SnPOs. Values withdifferent letters indicate significant differences (P < 0

14圖3 二價(jià)金屬離子和抑制劑對(duì)光棘球海膽PO活力的影響Fig. 3. The effects of divalent metal ions and inhibitors on the proteins with PO-like activities in S. nudus. (A)The effects of metal ions on SnPO1; (B) The effects of metal ions on SnPO2; (C) The effects of metal ions onSnPO3; (D) The effects of inhibitors on the proteins with PO-like activities in S. nudus. Values from metal ion orinhibitor treatments with an asterisk indicate a significant difference (P < 0.05) compared with controls.A：二價(jià)金屬離子對(duì)光棘球海膽PO1活力的影響；2：二價(jià)金屬離子對(duì)光棘球海膽PO2活力的影響；3：二價(jià)金屬離子對(duì)光棘球海膽PO3活力的影響；4：抑制劑對(duì)光棘球海膽PO活力的影響3.討論線(xiàn)性連續(xù)梯度非變性電泳結(jié)合鄰苯二酚發(fā)色法共檢測(cè)出三個(gè)蛋白條帶，根據(jù)分子量從高到低依次命名為SnPO1, SnPO2和SnPO3（如圖1）。在這三個(gè)蛋白條帶中，SnPO1相對(duì)分子質(zhì)量小于21 kDa，SnPO2的電泳遷移速度平行于溴酚藍(lán)，SnPO3的電泳遷移速度大于溴酚藍(lán)。在海洋無(wú)脊椎動(dòng)物中極小的酚氧化酶的分子量是不常見(jiàn)的，在線(xiàn)性連續(xù)梯度非變性電泳中酚氧化酶的分子量一般大于100 kDa[12，56]。在與兒茶酚反應(yīng)后，SnPO1和SnPO2都呈黃色

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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