發(fā)布時間：2020-12-17 06:45

　　白斑綜合癥病毒簡稱為WSSV（White spot syndrome virus, WSSV）危害水產(chǎn)養(yǎng)殖界,它能感染多種蝦、蟹等多種甲殼類動物。由WSSV引起的白斑病導致水產(chǎn)養(yǎng)殖出現(xiàn)高致死率并帶來了重大的經(jīng)濟損失。因此,研究宿主先天免疫系統(tǒng)抗病毒的機制,對預防和控制甲殼類大規(guī)模爆發(fā)病毒性疾病具有重要意義。前期研究發(fā)現(xiàn),泛素化和類泛素化途徑在對蝦的抗病毒免疫中發(fā)揮重要作用。E3泛素連接酶Parkin作為線粒體質(zhì)量控制的分子,在線粒體自噬中發(fā)揮重要作用。最近又報道Parkin能夠通過類似線粒體自噬的途徑清除胞內(nèi)的病原菌。但是一些詳細機理還不清楚。通過轉(zhuǎn)錄組測序在日本囊對蝦（Marsupenaeus japonicus）中鑒定出了泛素連接酶Parkin,我們把它其命名為sParkin （shrimp Parkin）。 sParkin的cDNA全長1656bp,這里面含有一個完整的開放閱讀框含為552個氨基酸。其中包含N端的泛素樣結(jié)構(gòu)域（ubiquitin-like UBQ）和其后的RINGO, RING1, RING2結(jié)構(gòu)域。組織分布顯示sParkin在對蝦的主要器官如心臟、肝胰腺、胃、鰓... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號說明
第一章 無脊椎動物先天免疫概述
    一. 細胞免疫和體液免疫
        1. 吞噬作用
        2. 包囊與結(jié)節(jié)的形成
        3. 胞吐作用
        4. 酚氧化酶級聯(lián)反應(yīng)
        5. 抗菌肽的表達
        6. 凝集素
        7. 免疫相關(guān)信號的激活
    二、泛素化修飾與免疫應(yīng)答
        1. 泛素化過程
        2. 泛素化在免疫中的功能
            2.1. 泛素化修飾在Toll信號通路中的調(diào)控
            2.2. 泛素化修飾在IMD信號通路中的調(diào)控
            2.3. 泛素化修飾與抗病毒免疫
    三、泛素連接酶Parkin的研究進展
        1. E3的種類
        2. Parkin的結(jié)構(gòu)
        3. Parkin的功能
            3.1. Parkin與線粒體自噬
            3.2. Parkin在神經(jīng)性疾病保護方面的功能
            3.3. Parkin介導其有害底物通過蛋白酶體途徑的降解
            3.4. Parkin介導的非降解信號轉(zhuǎn)導
            3.5. Parkin參與的自噬性免疫
    四、本論文研究的目的與技術(shù)路線
第二章 泛素連接酶Parkin通過蛋白酶體和異體自噬途徑介導對蝦的抗病毒免疫反應(yīng)
    一、引言
    二、材料與方法
        1. 菌株,載體,試劑,儀器
        2. 實驗材料和免疫刺激
        3. 基因克隆及序列分析
        4. RNA的提取與cDNA的合成
        5. 連接轉(zhuǎn)化與篩選陽性克隆
        6. 重組蛋白的表達與純化
        7. 實時定量PCR
        8. 基因組DNA的提取
        9. Pull-down實驗
        10. SDS-PAGE及Western blot
        11. 免疫細胞化學
        12. 體內(nèi)RNA干擾及過表達實驗
        13. 免疫膠體金實驗
        14. 體外泛素化實驗
        15. 蛋白酶體途徑與自噬途徑的抑制試驗
    三、結(jié)果
        1. sParkin的序列分析
        2. sParkin的組織分布
        3. WSSV感染對蝦后sParkin會呈現(xiàn)出表達量上調(diào)的趨勢
        4. 干擾sParkin后能促進WSSV在體內(nèi)的復制
        5. 干擾sParkin后對蝦的存活率降低而過表達sParkin后對蝦存活率升高
        6. rsParkin能與WSSV的囊膜蛋白VP19,VP24,VP26,VP28相結(jié)合,并主要通過rsParkin的UBQ結(jié)構(gòu)域負責結(jié)合
        7. rsParkin能夠與WSSV病毒粒子相結(jié)合
        8. sParkin能夠在體外泛素化修飾VP19,VP24,VP26,VP28
        9. WSSV的囊膜蛋白泛素化修飾后進入蛋白酶體降解
        10. WSSV的囊膜蛋白泛素化修飾后進入自噬溶酶體途徑降解
    四、討論
總結(jié)與創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
學位論文評閱及答辯情況表



本文編號：2921586