遲緩愛德華氏菌和鰻弧菌是兩種重要的魚類致病菌,可分別引起愛德華氏菌病和弧菌病,導(dǎo)致世界范圍內(nèi)養(yǎng)殖魚類的重大損失。目前,針對上述兩種病原菌的感染,多種形式的疫苗已經(jīng)被廣泛的研究,包括滅活疫苗、減毒活疫苗、亞單位疫苗和DNA疫苗等。其中,滅活疫苗由于安全性高、成本低廉等優(yōu)勢在水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)被廣泛應(yīng)用,然而滅活疫苗無法在魚體內(nèi)繁殖的缺陷常導(dǎo)致免疫原性偏低,選擇有效的免疫佐劑或免疫增強(qiáng)劑是增加滅活疫苗免疫保護(hù)效果的重要手段。本研究首先以鰻弧菌滅活疫苗為基礎(chǔ)進(jìn)行滅活疫苗佐劑的篩選,發(fā)現(xiàn)鰻弧菌滅活疫苗單獨免疫大菱鲆或與佐劑配合使用時均獲得良好免疫保護(hù)效果,不適合滅活疫苗佐劑的篩選。而后以遲緩愛德華氏菌滅活疫苗為基礎(chǔ),進(jìn)行遲緩愛德華氏菌滅活疫苗佐劑的篩選。研究發(fā)現(xiàn),在13種不同的佐劑疫苗組中,以鞭毛蛋白FlgD為佐劑的遲緩愛德華氏菌滅活疫苗組免疫大菱鲆之后獲得良好的免疫保護(hù)效果,免疫大菱鲆一個月后的相對免疫保護(hù)率達(dá)到70%。此外,免疫大菱鲆體內(nèi)特異性抗體水平在免疫后第三周達(dá)到最大值,免疫反應(yīng)相關(guān)因子基因,如MHC-I, IgM, IL-1β, TCR,和TNFα等的表達(dá)也在免疫大菱鲆體內(nèi)顯著上調(diào),上述結(jié)果都表明以鞭毛蛋白FlgD為佐劑的遲緩愛德華氏菌滅活疫苗能夠同時激活大菱鲆體內(nèi)的體液免疫和細(xì)胞免疫。由此可見,鞭毛蛋白能夠有效增強(qiáng)遲緩愛德華氏菌滅活疫苗的免疫保護(hù)效果,可以作為魚類疫苗的潛在佐劑,用于后續(xù)疫苗產(chǎn)品的開發(fā)。
【學(xué)位單位】：華東理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：S948
【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)與魚類病害
        1.1.1 遲緩愛德華氏菌
        1.1.2 鰻弧菌
    1.2 魚用疫苗
        1.2.1 滅活疫苗
        1.2.2 減毒活疫苗
        1.2.3 亞單位疫苗
        1.2.4 載體疫苗
        1.2.5 DNA疫苗
    1.3 魚用疫苗的接種方式
        1.3.1 注射免疫
        1.3.2 浸泡免疫
        1.3.3 口服免疫
    1.4 魚用免疫佐劑
        1.4.1 油乳佐劑
        1.4.2 納米或微米粒子佐劑
        1.4.3 鋁鹽佐劑
        1.4.4 鞭毛蛋白
    1.5 本課題研究內(nèi)容和意義
第2章 鰻弧菌滅活疫苗的免疫佐劑篩選
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗用動物及菌株
        2.2.2 實驗用培養(yǎng)基和相關(guān)溶液配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 實驗用大菱鲆的健康檢查和飼養(yǎng)
        2.3.2 滅活鰻弧菌的制備
        2.3.3 滅活鰻弧菌與多糖或寡糖佐劑混合制備鰻弧菌滅活疫苗溶液
        2.3.4 鰻弧菌MVM425在大菱鲆上的預(yù)攻毒實驗
        2.3.5 不同佐劑的鰻弧菌滅活疫苗組的免疫實驗
    2.4 實驗結(jié)果與分析
        2.4.1 鰻弧菌在大菱鲆上攻毒劑量的確定
        2.4.2 多糖或寡糖佐劑(2 mg/ml)對鰻弧菌滅活疫苗效果的影響
        2.4.3 多糖或寡糖佐劑(1 mg/ml)對鰻弧菌滅活疫苗效果的影響
        2.4.4 鰻弧菌滅活疫苗濃度對多糖或寡糖佐劑效果的影響
    2.5 本章小結(jié)
第3章 遲緩愛德華氏菌滅活疫苗佐劑的免疫效果評價
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗動物和實驗用菌株
        3.2.2 實驗用培養(yǎng)基及試劑
    3.3 實驗方法
        3.3.1 鞭毛蛋白FlgD的表達(dá)
        3.3.2 遲緩愛德華氏菌滅活疫苗與佐劑的乳化工藝以及乳化液的質(zhì)量檢測
        3.3.3 包含不同佐劑的遲緩愛德華氏菌滅活疫苗組在大菱鲆上的免疫評價實驗
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 鞭毛蛋白FlgD的表達(dá)與純化
        3.4.2 遲緩愛德華氏菌滅活疫苗乳化液質(zhì)量檢測
        3.4.3 包含不同佐劑的遲緩愛德華氏菌滅活疫苗在大菱鲆上的免疫保護(hù)效果分析
    3.5 小結(jié)
第4章 以鞭毛蛋白FlgD為佐劑的疫苗免疫效果分析
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
    4.3 實驗方法
        4.3.1 大菱鲆遲緩愛德華氏菌滅活疫苗的免疫以及免疫后的取樣和攻毒
        4.3.2 大菱鲆腎臟病理組織切片制作
        4.3.3 免疫大菱鲆血清中抗體效價檢測
        4.3.4 免疫大菱鲆血清殺菌活力實驗
        4.3.5 免疫大菱鲆相關(guān)免疫因子應(yīng)答分析
    4.4 實驗結(jié)果與討論
        4.4.1 不同實驗組遲緩愛德華氏菌滅活疫苗在大菱鲆上的免疫保護(hù)效果分析
        4.4.2 免疫大菱鲆血清中抗體水平分析
        4.4.3 免疫大菱鲆血清中殺菌活力分析
        4.4.4 免疫后大菱鲆脾臟和腎臟中免疫相關(guān)因子的應(yīng)答
    4.5 小結(jié)
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
論文發(fā)表
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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1 王斌;孫岑;范薇;劉雙鳳;劉永波;孫彥珂;;養(yǎng)殖大菱鲆出血性敗血癥病原菌致病性的研究及鑒定[J];大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報;2006年02期

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本文編號：2843902