中華鱉具有肉質(zhì)鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富等特點(diǎn),自古以來(lái)都是我國(guó)傳統(tǒng)食療的滋補(bǔ)佳品。隨著人們物質(zhì)生活水平的不斷提高,海內(nèi)外市場(chǎng)對(duì)中華鱉的需求也越來(lái)越大,加速對(duì)中華鱉的人工繁殖和養(yǎng)殖已成為一個(gè)必然的趨勢(shì)。近年來(lái),隨著生產(chǎn)中一些養(yǎng)殖戶的不規(guī)范引種、倒種,不注重品種的培育,導(dǎo)致中華鱉的品種混亂,遺傳多樣性降低。種質(zhì)是產(chǎn)業(yè)的源頭,是物種生命延續(xù)和種群繁衍的根本保證。為合理開(kāi)發(fā)與保護(hù)中華鱉的種質(zhì)資源,本研究以浙江省寧波市姚江流域的中華鱉群體為主要研究對(duì)象,首先對(duì)其染色體的制備方法進(jìn)行了探究,并對(duì)核型及G-帶做了準(zhǔn)確的分析,旨在為中華鱉的性別研究及人工繁殖提供理論依據(jù);然后采用RAPD及DNA條形碼的方法,對(duì)姚江群體及其他5個(gè)地理群體(黃河群體、清溪花鱉、日本群體、太湖群體及清溪烏鱉)的中華鱉進(jìn)行了遺傳多樣性分析,以期能對(duì)不同地理群體的中華鱉進(jìn)行準(zhǔn)確地鑒別。具體結(jié)果如下:在染色體核型分析方面,本研究發(fā)現(xiàn),秋水仙素的注射量對(duì)中華鱉的染色體制備有很大的影響,腹腔注射1μg/g(體重)秋水仙素,作用時(shí)間為1h比較適合中華鱉染色體標(biāo)本的制備。用熒光顯微鏡和Photoshop CS3軟件對(duì)染色體配對(duì)分析,按LEVAN等標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行染色體分類發(fā)現(xiàn),中華鱉存在異形性染色體,其核型公式為2n=66=4m+4st+34sm+22T+ZZ/ZW;雄性的臂數(shù)為104,雌性為105;對(duì)比發(fā)現(xiàn),雌雄染色體的相對(duì)長(zhǎng)度差異不大。33對(duì)染色體中,1~6號(hào)為大染色體,其余均為小型染色體。用胰蛋白酶處理法制備了染色體G帶,并繪制了1~6號(hào)染色體的G帶模型圖。在RAPD分析上,本研究采用篩選出的9條隨機(jī)引物對(duì)中華鱉6個(gè)不同地理群體的112個(gè)個(gè)體進(jìn)行RAPD擴(kuò)增分析。結(jié)果表明,9條10bp的隨機(jī)引物在6個(gè)中華鱉群體中共擴(kuò)增出156條帶,其中多態(tài)性條帶(P)為142(91.03%),僅14條帶在6個(gè)群體中穩(wěn)定出現(xiàn),各群體的多態(tài)位點(diǎn)比例(P)在39.34~75.00%之間,Nei’s基因多樣性指數(shù)在0.1144~0.2643之間,Shannon信息指數(shù)在0.1684~0.3934之間,各項(xiàng)遺傳多樣性指標(biāo)中,姚江群體均處于最高水平,表明姚江群體具有較高的遺傳多樣性;在親緣關(guān)系中,姚江群體與清溪花鱉間的關(guān)系最近,與黃河群體最遠(yuǎn);基于電泳條帶,未發(fā)現(xiàn)用于區(qū)分不同群體的特異性標(biāo)記,但基于個(gè)體遺傳距離構(gòu)建的分子系統(tǒng)樹(shù),不同群體中華鱉在進(jìn)化樹(shù)上的聚類具有種的特性,因此可以通過(guò)進(jìn)化樹(shù)分析將各個(gè)群體區(qū)分開(kāi)。在DNA條形碼鑒別方面,根據(jù)已有的中華鱉COI基因序列片段,本研究設(shè)計(jì)了特異性引物進(jìn)行中間片段、3’和5’RACE反應(yīng),得到了中華鱉COI基因全長(zhǎng)為1635bp的序列,并以此設(shè)計(jì)用于DNA條形碼分析的通用引物,對(duì)中華鱉6個(gè)地理群體的111個(gè)體及鱉科不同屬間進(jìn)行遺傳多樣性分析。結(jié)果表明,從1534bp的序列中,共檢測(cè)到保守位點(diǎn)(C)928個(gè),變異位點(diǎn)(V)606個(gè),簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)(Pi)337個(gè),自裔位點(diǎn)(S)269個(gè),各堿基平均含量為A=30.10%、T=30.27%、C=23.41%、G=16.22%,A+T的含量(60.37%)明顯高于C+G的含量(39.63%);總?cè)后w的單倍型多樣性指數(shù)(H)為0.972,堿基多樣性指數(shù)(Pi)為0.0171,表明各群體均具有較高的遺傳多樣性;群體遺傳距離在0.0203~0.0417之間,群體內(nèi)平均遺傳距離在0.0113~0.0338之間,種間與種內(nèi)的遺傳距離沒(méi)有形成有效的條形碼間隙,個(gè)體NJ樹(shù)上,各群體間的個(gè)體并沒(méi)有形成有效的分支。而在對(duì)鱉科不同屬間的分析時(shí)發(fā)現(xiàn),屬間及屬內(nèi)遺傳距離形成了明顯的差異間隙,在NJ樹(shù)上,不同鱉按照屬的特性分別進(jìn)行聚類,并具有較高的節(jié)點(diǎn)支持率,聚類分析可信度高。因此,COI基因作為DNA條形碼,能夠有效地用于區(qū)分鱉科動(dòng)物的不同屬,但不適用于中華鱉地理群體的分離鑒定。
【學(xué)位單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：S917.4
【部分圖文】：

姚江水系中華鱉背面圖

圖 1-2 姚江水系中華鱉腹面圖Fig.1-2 The segmental venter of Pelodiscus sinensis Yaojiang River strain1.2 生態(tài)習(xí)性姚江水系中華鱉生活于 3‰左右鹽度的水體，水質(zhì) pH 為 8.5 左右，偏弱堿性。攝食溫度為 25~30℃，最適攝食溫度為 30℃，低于 22℃一般不飲食，高于 35℃

圖 2-1 中華鱉雄（1）、雌（2）染色體中期分裂相Fig.2-1 The metaphases of male(1) and female(2) of P. sinensis2.2.3 核型分析分別選取染色體數(shù)目完整，分散良好，形態(tài)清晰，著絲點(diǎn)易辨的中期分裂相

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

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本文編號(hào)：2827117