當(dāng)前,我國水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中出現(xiàn)了諸多的病害問題,其中以水產(chǎn)致病細(xì)菌引發(fā)的病害問題尤為嚴(yán)重,其爆發(fā)性強(qiáng)、來勢迅猛。如何能有效防治水產(chǎn)病害是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)面臨的重要任務(wù)。傳統(tǒng)上,防治水產(chǎn)細(xì)菌性病害的重要手段是化學(xué)抗生素或化學(xué)藥物,化學(xué)抗生素或化學(xué)藥物確實(shí)在一定程度上解決了細(xì)菌性病害問題,但使用化學(xué)抗生素或化學(xué)藥物往往會(huì)帶來病原菌耐藥性、水產(chǎn)品藥物殘留和環(huán)境污染等問題,因此,尋找無污染、無耐藥性和無公害的化學(xué)抗生素或化學(xué)藥物替代物成為解決問題的關(guān)鍵。深海芽孢桿菌代謝途徑多樣性及頑強(qiáng)的生命力,賦予了其具有分泌新型抑菌活性物質(zhì)的能力。從深海芽孢桿菌中分離出能拮抗水產(chǎn)致病細(xì)菌且無公害、無耐藥性的蛋白,是當(dāng)前防治水產(chǎn)病害的研究熱點(diǎn)。本論文針對我國突出的水產(chǎn)細(xì)菌病害和水產(chǎn)品安全問題,通過對西太平洋雅浦海溝的水樣篩選,獲得對水產(chǎn)病原細(xì)菌強(qiáng)拮抗作用的菌株,對菌種發(fā)酵培養(yǎng),通過硫酸銨分級(jí)沉淀和葡聚糖凝膠層析法獲得具有抗菌生物活性的蛋白,該蛋白具有較好防治水產(chǎn)病原細(xì)菌的能力,可作為化學(xué)抗生素或化學(xué)藥物替代物解決水產(chǎn)細(xì)菌性疾病問題。研究的主要結(jié)果如下:1.拮抗水產(chǎn)細(xì)菌病害DH82菌株篩選分離及鑒定本論文用加熱處理、梯度稀釋法,結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察從西太平洋雅浦海溝6000米深的水樣中分離出106株芽孢桿菌,對其進(jìn)行拮抗水產(chǎn)病原細(xì)菌的初篩實(shí)驗(yàn),篩選出79株拮抗菌;然后,再對拮抗菌活性產(chǎn)物是否是蛋白進(jìn)行復(fù)篩,得到具有高抗菌蛋白活性的DH82菌株。DH82菌株鑒定采用形態(tài)學(xué)觀察、生理學(xué)和生物生化特性研究以及分子生物學(xué)分析三者相結(jié)合的方法。最后鑒定DH82菌株為貝萊斯芽孢桿菌Bacillus velezensis。2.貝萊斯芽孢桿菌DH82抗菌粗蛋白制備及理化性質(zhì)研究為進(jìn)一步研究抗菌活性物質(zhì)的性質(zhì),用改良LB培養(yǎng)基培養(yǎng)貝萊斯芽孢桿菌DH82,研究貝萊斯芽孢桿菌DH82生長特性,確定其產(chǎn)抗菌蛋白的最佳發(fā)酵時(shí)間為24 h。通過硫酸銨分級(jí)沉淀法獲取抗菌蛋白,確定最佳硫酸銨沉淀飽和度為70%。研究了抗菌粗蛋白理化性質(zhì),以遲緩愛德華氏菌作為指示病原細(xì)菌,結(jié)果發(fā)現(xiàn)貝萊斯芽孢桿菌DH82的抗菌粗蛋白熱穩(wěn)定性較強(qiáng),對蛋白酶K、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶都不敏感,在pH7.0抑菌活性最佳,金屬K~+、Na~+促進(jìn)抗菌粗蛋白活性,金屬M(fèi)g~(2+)、Fe~(3+)部分抑制抗菌粗蛋白活性,金屬Ca~(2+)嚴(yán)重抑制其抑菌活性。3.抗菌粗蛋白初步分離純化及其抑菌譜檢測通過對貝萊斯芽孢桿菌DH82的抗菌粗蛋白進(jìn)行Sephadex G-75柱層析分離純化,獲得兩個(gè)具有抑菌活性的峰蛋白PrI和PrII。兩個(gè)峰蛋白PrI和PrII經(jīng)抑菌譜檢測,發(fā)現(xiàn)對常見水產(chǎn)指示病原細(xì)菌包括遲緩愛德華氏菌、嗜水氣單胞菌、坎氏弧菌、溶藻弧菌、哈維氏弧菌、無乳鏈球菌和金黃色葡萄球菌都具有較好抑菌活性,說明深海貝萊斯芽孢桿菌DH82產(chǎn)生的抗菌粗蛋白對水產(chǎn)病原細(xì)菌的抑菌譜較廣,其中峰蛋白PrII對指示植物病原真菌水賊鐮刀菌也具有較好抑菌作用。再進(jìn)一步對峰蛋白進(jìn)行最低抑菌濃度(MIC)檢驗(yàn),發(fā)現(xiàn)其對遲緩愛德華氏菌和溶藻弧菌的MIC都較低(為7.16μg/mL)。因此,得出深海貝萊斯芽孢桿菌DH82具有較廣的抑菌譜及較強(qiáng)的抑菌活性,預(yù)示該菌株在常見水產(chǎn)細(xì)菌性及個(gè)別植物真菌性病害防治上有較好的開發(fā)利用價(jià)值。
【學(xué)位單位】：自然資源部第三海洋研究所
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S941.42
【部分圖文】：

圖 2-1 部分活性菌株的抑菌活性Fig. 2-1 The antimicrobial activity of partial active strainsa 嗜水氣單胞菌 b 遲緩愛德華氏菌 c 坎氏弧菌 d 副溶血弧菌 e 溶藻弧d-2 e-2

DH82菌株的革蘭氏染色Fig.2-2TheGramologicalphotographofstrainDH82

圖 2-3 基于 16S rDNA 序列 BLAST 結(jié)果構(gòu)建菌株 DH82 的系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig. 2-3 Phylogentic tree of strain DH82 based on BLAST results of 16S rDNAsequence

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8 Y.Kato;李文楚;;家蠶抗菌蛋白Ceeropin B cDNAs的表達(dá)及其特性[J];國外農(nóng)學(xué)(蠶業(yè));1994年02期

9 ;蟾蜍的“無菌腦”[J];大科技(百科新說);2011年12期

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6 袁鳳華;何禮遠(yuǎn);宋伯符;;馬鈴薯抗青枯菌抗菌蛋白的研究(英文)[A];“植物病蟲害生物學(xué)研究進(jìn)展”——植物病蟲害生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室研究論文選[C];1995年

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8 文鳳云;董淑麗;李曉麗;李宏偉;謝三磊;李俊強(qiáng);;Dw-6菌抗革蘭氏陽性菌多肽的分離純化及其抑菌活性研究[A];全國動(dòng)物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2010年

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