本文研究了松江鱸(Trachidermus fasciatus)腎組織細胞系的建立過程,并分析了細胞生物學特性。結(jié)果表明組織塊培養(yǎng)法適用于松江鱸腎的原代培養(yǎng);在25℃、5%CO2培養(yǎng)箱中,原代培養(yǎng)啟動24h后有細胞貼壁牢固,36h后有細胞遷出,30d后長滿單層;主要為成纖維樣細胞;采用胰酶消化法進行傳代,傳代細胞生長與分裂狀態(tài)良好,20代后松江鱸腎5-6d便可長成單層,原代培養(yǎng)和早期培養(yǎng)時,培養(yǎng)液的成分是添加5ng/m L人堿性成纖維細胞生長因子(b FGF)、20μg/m L硫酸軟骨素、40ng/m LI型胰島素樣生長因子(IGF-I)的20%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基;35代后,所有培養(yǎng)液為20%FBS-DMEM/F12。目前,松江鱸腎組織細胞已傳至55代,成功建立松江鱸腎組織細胞系。經(jīng)實驗測定松江鱸腎組織細胞的群體倍增時間為別為56.32h,35代松江鱸腎組織細胞的核型分析結(jié)果是2n=40;核型公式為:14m+10sm+16t。病毒敏感性實驗表明松江鱸腎組織細胞對魚類諾達病毒不敏感,對鯉春病毒血癥病毒敏感,測定病毒滴度為106.53TCID50/m L。松江鱸腎組織細胞在不同血清濃度(0%、5%、10%、15%、20%)、不同濃度硫酸軟骨素(0、10、20、30、40μg/m L)、不同濃度人堿性成纖維細胞生長因子(b FGF)(0、2.5、5、7.5、10ng/m L)以及不同濃度I型胰島素樣生長因子(IGF-I)(0、10、20、30ng/m L)條件下的生長特性研究結(jié)果表明:松江鱸腎組織細胞生長最適血清濃度為15%。最適硫酸軟骨素的濃度為20μg/m L。最適IGF-Ⅰ的濃度為20ng/m L。最適b FGF的濃度為7.5ng/m L。本實驗初步探索了草甘膦對松江鱸腎組織細胞的毒性效應(yīng),測定草甘膦對松江鱸腎組織細胞的24h半數(shù)抑制濃度為1177.66mg/L。微核實驗表明:松江鱸腎組織細胞測試結(jié)果與對照組差異極顯著。
【學位單位】：大連海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：S917.4
【部分圖文】：

圖 1 松江鱸腎組織原代培養(yǎng)細胞Fig.1 kidney cells from rough skin sculpin in first passage量細胞從組織塊遷出(48h)； B 組織塊周圍長滿單層(6d)。標尺=100μ explant and outgrowth of a large number of cells(48h);B A mosurrounding tissue(6d).bar=100μm養(yǎng)組織細胞傳代后生長與分裂狀況良好，細胞透明，呈纖維樣。代 20 代以后（圖 2），細胞增殖速度加快，5~6d 可以長滿單層素樣生長因子（IGF-I）、人堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）和裂狀況都未受到影響。目前松江鱸腎組織細胞已經(jīng)傳代到 55 細胞系。

圖 1 松江鱸腎組織原代培養(yǎng)細胞 cells from rough skin sculpin in firs遷出(48h)； B 組織塊周圍長滿單層(6d)。utgrowth of a large number of cells(48surrounding tissue(6d).bar=100μm后生長與分裂狀況良好，細胞透明，呈圖 2），細胞增殖速度加快，5~6d 可以IGF-I）、人堿性成纖維細胞生長因子（到影響。目前松江鱸腎組織細胞已經(jīng)傳

第三章 松江鱸腎組織細胞系生物學特性分析圖 7 松江鱸腎組織細胞染色體數(shù)量分布圖Fig.7 Number distribution of chromosome in rough skin sculpin kidne134368021010203040506070809035 36 37 38 39 40 41 42胞數(shù)細nmburefocles染色體數(shù)number of chromosomes

【參考文獻】

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本文編號：2812928