為了鑒定牙鲆甲狀腺激素受體TRs介導甲狀腺激素調控的靶基因,研究采用RT-PCR克隆了TRαA基因的CDS區(qū),并構建了p3×Flag-TRαA重組真核表達載體;該重組質粒轉染HEK293T細胞后, RT-PCR、實時定量PCR與Western blot檢測均表明牙鲆TRαA在哺乳動物蛋白表達系統(tǒng)中成功轉錄并翻譯;且重組質粒轉染的細胞裂解液通過G1親和層析柱純化、過濾除菌可得到純的融合蛋白3×Flag-TRαA,然后雙熒光素酶報告實驗通過在HEK293T細胞中共轉染p3×Flag-TRαA和含候選靶啟動子的報告基因表達載體pGL3-Pro-atoh8-1517/1333/708,表明TRαA受體結合在atoh8基因啟動子區(qū) 1497— 688特異的2個TRE識別序列來調控該基因的轉錄,即atoh8是TRαA介導甲狀腺激素直接調控的靶基因。研究為深入探究甲狀腺激素受體TRαA介導甲狀腺激素調控的信號通路提供了基礎依據。

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：2811889