【摘要】：本試驗通過生長試驗和攻毒試驗研究磷對生長中期草魚生產(chǎn)性能、疾病抵抗力、腸道健康、鰓健康、機體健康和肌肉品質(zhì)的作用及機制。試驗選取體重為256.22 ± 0.60 g的生長中期草魚540尾,隨機分成6個處理,每個處理3個重復,分別飼喂含有效磷 0.95、2.46、3.96、5.68、7.10 和 8.75 g/kg(總磷水平分別為 2.3、4.0、5.6、7.6、9.2和11.0 g/kg)的飼糧60天,考察磷對生長中期草魚生產(chǎn)性能和肌肉品質(zhì)的影響。生長試驗結(jié)束后,分別進行14天的嗜水氣單胞菌攻毒試驗和3天的柱狀黃桿菌攻毒試驗,通過考察草魚腸道、鰓、皮膚、頭腎和脾臟中抗菌物質(zhì)、炎癥反應(yīng)、抗氧化損傷能力、凋亡相關(guān)指標和緊密連接蛋白以及相關(guān)信號分子,研究磷對魚類腸道、鰓和機體健康的作用及其機制。生長試驗結(jié)果表明:與磷缺乏組(有效磷0.95 g/kg)相比,適宜水平的磷提高了生長中期草魚增重百分比(PWG)、采食量(FI)、飼料效率(FE)和特異生長率(SGR)(P0.05),表明磷提高了生長中期草魚生產(chǎn)性能。適宜水平的磷還提高了生長中期草魚肌肉蛋白、必需氨基酸、風味氨基酸和多不飽和脂肪酸含量、pH、和羥脯氨酸含量,降低了剪切力、蒸煮損失、乳酸含量、組織蛋白酶B和L活力以及飽和脂肪酸含量,提高了肌肉品質(zhì);并且磷還通過增強Keap1/Nrf2信號上調(diào)CuZnSOD等抗氧化酶基因表達和活力,降低氧化損傷,提高了肌肉品質(zhì)。同時,適宜水平的磷降低了腸炎、爛鰓和赤皮發(fā)病率(P0.05),表明磷能夠增強草魚抵抗腸炎、爛鰓和赤皮發(fā)生的能力。魚體抵抗腸炎、爛鰓和赤皮發(fā)生的能力分別與腸道健康、鰓健康和機體健康有關(guān)。本試驗結(jié)果表明:適宜水平的磷提高了草魚腸道、鰓、皮膚、頭腎和脾臟中抗菌化合物溶菌酶(LZ)和酸性磷酸酶(ACP)的活力,補體C3、C4和免疫球蛋白M(IgM)的含量,上調(diào)部分抗菌肽如肝表達抗菌肽(LEAP)-2A、LEAP-2B和β防御素(β-defensin-1)的基因表達,表明磷能增強魚類的抗菌能力。同時,適宜水平的磷可能通過下調(diào)草魚腸道、鰓、皮膚、頭腎和脾臟中信號分子抑制蛋白κB激酶β(IKKβ)、IKKy和核因子-κB(NF-κB)p65的基因表達以及上調(diào)了核因子κB抑制蛋白α(IκBα)基因表達下調(diào)了促炎細胞因子白介素(IL)1β(除了后腸)、IL-6(除了鰓)、IL-15、IL-17D(除了鰓)和干擾素γ2(IFN-γ2)的基因表達;通過上調(diào)信號分子TOR和S6K1基因表達以及下調(diào)了其下游4E-BP基因表達上調(diào)了抗炎細胞因子IL-4/13A、IL-10、IL-11、TGF-β1和TGF-β2的基因表達,表明適宜水平的磷可能通過NF-κB和TOR信號途徑抑制魚類黏膜免疫器官和機體免疫器官的炎癥反應(yīng)。進一步的研究發(fā)現(xiàn):適宜水平的磷可通過抑制草魚腸道、鰓、皮膚、頭腎和脾臟Fas配體(FasL)和半胱天冬酶-8(caspase-8)介導的死亡受體途徑以及促凋亡蛋白凋亡酶激活因子1(Apaf-1)、B細胞淋巴瘤蛋白2相關(guān)X蛋白(Bax)家族和caspase-9介導的線粒體途徑,下調(diào)caspase-3和-7的基因表達,抑制細胞凋亡,增強了其細胞結(jié)構(gòu)完整性;還可能通過上調(diào)其核因子相關(guān)因子2(Nrf2)基因表達提高抗氧化酶錳超氧化物歧化酶(MnSOD)、過氧化氫酶(CAT)(除了脾臟)、谷胱甘肽過氧化物酶GPx(1a、1b)和谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶GST(R、01、02、P1、P2)的mRNA水平和酶活力,從而減少活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、蛋白羰基(PC)含量,提高了魚類抗氧化能力,降低了氧化損傷。同時,適宜水平的磷可能通過下調(diào)肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)信號促進緊密連接蛋白閉鎖連接蛋白(ZO)、occludin(除了前腸和中腸)、claudin-c、-f、-7和-11基因表達,抑制孔隙緊密連接蛋白claudin-12基因表達,維持了細胞間結(jié)構(gòu)完整性。綜上所述,飼糧磷能夠提高生長中期草魚的生產(chǎn)性能,并通過增強草魚肌肉中抗氧化能力,改善其理化指標特性、風味氨基酸以及保健脂肪酸組成,增強肌肉品質(zhì)。這與其通過提高生長中期草魚腸道、鰓和機體健康增強抵抗腸炎、爛鰓和赤皮發(fā)生的能力有關(guān):(1)適宜水平的磷提高了腸道、鰓、皮膚、頭腎和脾臟抗菌物質(zhì)活力、含量和基因表達,提高了抗菌能力,并通過調(diào)控NF-κB與TOR信號分別抑制促炎細胞因子和促進抗炎細胞因子的基因表達,緩解炎癥反應(yīng)。(2)適宜水平的磷可能通過Nrf2信號途徑上調(diào)SOD等抗氧化酶基因表達和提高其活力,增強自由基清除能力,從而降低了氧化損傷,并通過抑制死亡受體和線粒體途徑抑制了細胞凋亡,維持了細.胞結(jié)構(gòu)完整性;還可能通過抑制MLCK信號加強細胞間緊密連接蛋白屏障功能,維持了細胞間結(jié)構(gòu)完整性。最后,以PWG和抵抗腸炎、爛鰓和赤皮發(fā)生能力為標識確定生長中期草魚(254-898 g)有效磷的需要量分別為4.10、4.68、5.77和4.13 g/kg飼糧。
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S917.4
【圖文】：

度和質(zhì)量檢測、ｃＤＮＡ合成和實時熒光定量Ｐ隆出的和ＮＣＢＩ中己有的草魚基因進行設(shè)計，研磨成粉狀，加入ＲＮＡｉｓｏ邋Ｐｌｕｓ［寶生物工程（次，ＲＮＡ質(zhì)量用瓊脂糖凝膠電泳檢測，條帶可前者兩倍（見圖１）；濃度檢測用和核酸檢測Ｄ２８０值在１．８？２．２符合要求。接著，ｃＤＮＡＡ可以直接使用或者在保存于－２０°Ｃ冰箱中。邋ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ？邋ＲＴ－ＰＣＲ邋Ｋｉｔ邋ＩＩ邋（Ｐｅｒｆｅｃｔ邋Ｒｅａｌ邋ＴｉＲＲ０８３Ａ］進行擴增，弓丨物和擴增條件見表５。測是否有非特異性擴增。以ｐ－ａｃｔｉｎ為內(nèi)參制標準曲線，基因標準曲線的擴增效率接近１０用２４ＡＣＴ法計算基因相對表達量。逡逑．’—７Ｗ逡逑

５．３磷對生長中期草魚疾病抵抗能力的影響逡逑５．３．１磷對生長中期草魚抵抗腸炎發(fā)生能力的影響逡逑磷對生長中期草魚嗜水氣單胞菌攻毒后腸炎發(fā)病率的影響見圖２，對腸炎表觀癥逡逑２１逡逑

磷對生長中期草魚嗜水氣單胞菌攻毒后赤皮發(fā)病率的影響見圖６，赤皮表觀癥狀邐，逡逑見圖７。逡逑赤皮發(fā)病率：隨著飼糧有效磷水平的增加而顯著下降（Ｐ＜邋０．０５），當有效磷水平逡逑增加到３．９６邋ｇ／ｋｇ后，有效磷的增加對赤皮發(fā)病率影響差異不顯著＞邋０．０５）。逡逑由圖７可以看出，磷缺乏組皮膚出現(xiàn)淲片脫落，脫落處皮膚糜爛，同時可見皮膚逡逑出血及發(fā)炎。整個腹鰭完全充血，末端有輕微糜爛癥狀。而適宜水平的磷添加組，未逡逑見上述表觀癥狀。逡逑２５％逡逑ｆ邐２０３％，邋ｃ逡逑｜邋２０％邋？邋■逡逑！邐■姦％，ｂ逡逑Ｉ邋游。．＿逡逑｜邐■邐■邐６．６７％

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本文編號：2805195