【摘要】：大菱鲆(Scophthalmus maximus)人工養(yǎng)殖是我國(guó)海水養(yǎng)殖的重要支柱產(chǎn)業(yè)之一。然而,隨著其規(guī)模的迅猛發(fā)展,各種養(yǎng)殖疾病接踵而至,由盾纖毛蟲(chóng)等引起的寄生蟲(chóng)病是其中危害嚴(yán)重的疾病之一。為防治盾纖毛蟲(chóng)病,開(kāi)發(fā)新型的生物殺蟲(chóng)劑具有十分廣闊的應(yīng)用前景。海洋微生物可產(chǎn)生結(jié)構(gòu)獨(dú)特、活性多樣且不同于陸地來(lái)源的代謝產(chǎn)物,其中某些代謝產(chǎn)物可作為殺蟲(chóng)制劑。本研究從近海微生物菌種資源庫(kù)中篩選獲得了一株有殺盾纖毛蟲(chóng)效果的細(xì)菌,并對(duì)其開(kāi)展了殺蟲(chóng)能力、遺傳背景的研究,主要研究成果如下:1.對(duì)采自萊州大菱鲆養(yǎng)殖場(chǎng)的11條典型病魚(yú)進(jìn)行了病理學(xué)觀察。組織切片顯示,病魚(yú)皮膚、鰭、鰓、肝臟、腸及腦中均檢出病原性纖毛蟲(chóng)。對(duì)分離自病魚(yú)腦部的纖毛蟲(chóng)進(jìn)行形態(tài)及分子鑒定,確定其為海洋尾絲蟲(chóng)(Uronema marinum)。感染實(shí)驗(yàn)證實(shí)海洋尾絲蟲(chóng)可感染大菱鲆,并引起大菱鲆盾纖毛蟲(chóng)病。2.對(duì)篩選獲得的有殺盾纖毛蟲(chóng)效果的細(xì)菌進(jìn)行鑒定,利用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法鑒定該菌為肋生鹽弧菌(Salinivibrio costicola subsp.)。通過(guò)共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行YCSC6殺滅大菱鲆病原性盾纖毛蟲(chóng)的藥效活性實(shí)驗(yàn),同時(shí)利用光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡觀察記錄YCSC6的殺蟲(chóng)特征。結(jié)果發(fā)現(xiàn)海洋細(xì)菌YCSC6發(fā)酵上清液可導(dǎo)致盾纖毛蟲(chóng)膜出現(xiàn)穿孔,膜完整性喪失從而裂解。在一定時(shí)間范圍內(nèi),發(fā)酵液發(fā)酵時(shí)間越長(zhǎng),裂解能力則越強(qiáng)。3.為了進(jìn)一步研究海洋細(xì)菌YCSC6的殺蟲(chóng)機(jī)制和次生代謝產(chǎn)物生物合成基因簇,我們對(duì)該菌株進(jìn)行了全基因組測(cè)序,通過(guò)基因組組裝、基因預(yù)測(cè)、功能注釋以及總次生代謝物生物合成基因簇預(yù)測(cè),為后期轉(zhuǎn)錄組及代謝組分析奠定了基礎(chǔ)。結(jié)果顯示,YCSC6全基因組大小為3.87Mb,共預(yù)測(cè)得到3896個(gè)基因。該基因組含兩個(gè)環(huán)形染色體,長(zhǎng)序列(scf7180000000004)為基因組序列,平均GC含量為50.03%,短序列(scf7180000000005)為質(zhì)粒,平均GC含量為48.80%,預(yù)測(cè)到21個(gè)次生代謝產(chǎn)物生物合成基因簇,相關(guān)功能基因18個(gè),主要分為三大類:膜綁定溶胞壁質(zhì)轉(zhuǎn)糖酶,他體細(xì)胞溶解,磷脂酶活性。該基因組GenBank注冊(cè)號(hào)為NHNL00000000,本文所介紹版本為NHNL01000000。4.在得到海洋細(xì)菌YCSC6全基因組的基礎(chǔ)上,本研究對(duì)不同培養(yǎng)時(shí)間的海洋細(xì)菌YCSC6轉(zhuǎn)錄組及代謝組進(jìn)行了分析,通過(guò)不同組間轉(zhuǎn)錄組和代謝組的比較,預(yù)測(cè)到大量差異表達(dá)基因及差異代謝物。代謝組鑒定到的物質(zhì)數(shù)目為1129,無(wú)法定性的物質(zhì)數(shù)目為16814。經(jīng)比對(duì),篩選出84種具有功能描述的顯著上調(diào)差異代謝物,后期可通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證這些物質(zhì)的殺蟲(chóng)及膜裂解活性。樣品表達(dá)模式分析顯示,在轉(zhuǎn)錄組和代謝組中分別有一組模塊表達(dá)模式與目的產(chǎn)物的作用模式效果重合,均在48h后逐漸高表達(dá),目的產(chǎn)物可能存在于其中。后期將重點(diǎn)分析差異基因及差異代謝物,以期找到殺蟲(chóng)基因及其代謝通路,為殺大菱鲆病原性盾纖毛蟲(chóng)開(kāi)發(fā)安全、高效的藥劑。
【學(xué)位授予單位】：國(guó)家海洋局第一海洋研究所
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S943
【圖文】：

-1. 大菱鲆2-1. Symptbody surfafected tissu2 病魚(yú)組組織切片結(jié)構(gòu)松散皮膚組織變化明顯。隨著纖毛織切片顯鲆盾纖毛蟲(chóng)病C）感toms of infeace. B) Exopues (Arrows組織病理變化顯示，病魚(yú)散，空泡化�？椙衅@示，顯，皮下組織毛蟲(chóng)的大量示，正常鰓病癥狀 A）感染組織涂片ected turbotphthalmos (s indicate th化魚(yú)皮膚、鰓正常魚(yú)皮織和肌肉組量繁殖，組織鰓絲結(jié)構(gòu)緊）體表潰爛處片；D）纖t associated(Arrows indhe ciliates).ciliate.、肝臟、腸皮膚組織結(jié)構(gòu)組織中有大量織壞死，細(xì)胞密、規(guī)整（處；B) 眼球纖毛蟲(chóng)顯微特with ciliatedicate the foD) Microsc腸及腦組織均構(gòu)緊密（圖量纖毛蟲(chóng)，胞核固縮、（圖 2-2 C）球凸出（箭頭特征。es. A) Ulceroci). C) Smecopical char均感染了大圖 2-2 A），纖組織內(nèi)部有碎裂、溶解，纖毛蟲(chóng)侵頭指示病灶rative lesiears maderacteristic大量纖毛蟲(chóng)纖毛蟲(chóng)入有明顯的解（圖 2-2侵入鰓絲后

大得E））感入侵致病icriliatose.t def. F)) Citruct大菱鲆器官組得松散；C）正）正常鰭組感染纖毛蟲(chóng)侵導(dǎo)致腸絨毛病魚(yú)腦組織oscopic patte. B) CiliatC) Normalformation anCiliates in tiliates (arrowture without組織病理變正常鰓絲切組織切片；F后，肝組織毛細(xì)胞變形降解，空泡hological chtes (arrows)gill filamennd strong dithe fin of inws)caused dt ciliate. J) I變化 A）正常切片；D）感）病魚(yú)鰭組織裂解，空泡形壞死；K）泡化（箭頭hanges of in) in skin tissnt without cilatation ofnfected turbodisintegratioInvasion of常皮膚組織感染纖毛蟲(chóng)后組織切片出泡化；I）正正常腦組指示盾纖毛nfected turbsue of infectciliate.D) Cispace. E) Not. G) Normon of liver tf ciliates (arr切片；B）感后，鰓絲細(xì)現(xiàn)纖毛蟲(chóng)；正常腸絨毛織切片；L毛蟲(chóng)，標(biāo)尺bot. A) Normted turbot, tiliates (arroNormal fin timal liver tisstissues. I) Nrows) led to感染纖毛細(xì)胞嚴(yán)重G）正組織切）纖毛尺=25μmmal skinthe skinows) cauissue wsue withNormal bo necros

mmm最小值(μm) 20(μm) 5(μm) 24(μm) 10m) 12比例 0.3數(shù) 10m) 8m) 4小 最大值0 3010360 162 154 0.5012109平均值25.0930.912.813.30.4410.69.17.3中值標(biāo)準(zhǔn)差 S25 3.110 1.632 4.114 2.313 1.20.44 011 0.69 0.98 1.8準(zhǔn)SD變異系CV1 12.36 17.91 13.43 18.02 9.310.36.09 9.78 24.0系Vprotargol staining method)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號(hào)：2804121