【摘要】：對(duì)蝦急性肝胰腺壞死癥(Acute hepatopancreas necrosis syndrome,AHPNS),與早死綜合癥(early mortality syndrome,EMS),是近年來(lái)對(duì)東南亞和拉丁美洲的對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)造成重大損失的疾病,其主要病原都是副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)。副溶血弧菌為弧菌科(Vibrio Pacini 1854)弧菌屬(Vibrionaceae Veron 1965)細(xì)菌的成員。該菌是一種危害較大的病原菌,既可以導(dǎo)致多種水產(chǎn)動(dòng)物發(fā)病又可以引起人的副溶血弧菌腸炎。本研究主要目的是從已有的消毒劑種類中尋找能高效殺滅副溶血弧菌的消毒劑,并對(duì)這種消毒劑的一些化學(xué)性質(zhì),殺菌機(jī)理來(lái)進(jìn)行初步探究。(1)不同消毒劑對(duì)副溶血弧菌的殺滅能力比較及最佳消毒劑篩選選取生產(chǎn)實(shí)踐中常用的鹵素類、季銨鹽類、聚合胍類和醛類共計(jì)22種消毒劑于實(shí)驗(yàn)室條件下,用懸液定量殺菌法,培養(yǎng)24h,在0.5mg/L濃度進(jìn)行不同種類消毒劑殺滅副溶血弧菌效果比較,用殺滅對(duì)數(shù)值表示殺滅能力的大小。試驗(yàn)結(jié)果表明,鹵素類殺菌能力最強(qiáng)的是碘溴海因,0.5mg/L的殺滅對(duì)數(shù)值為5.6;季銨鹽類殺菌能力最強(qiáng)的是雙鏈季銨鹽絡(luò)合碘,殺滅對(duì)數(shù)值為5.52;聚合胍類效果最好的是聚六亞甲基胍鹽酸鹽(PHMGH),殺滅對(duì)數(shù)值為6。醛類、溴硝醇、過硫酸氫鉀復(fù)合鹽消毒效果較差,殺滅對(duì)數(shù)值僅為1。由此可見不同種類的消毒劑對(duì)副溶血弧菌的殺滅能力存在明顯差異,以聚合胍類的殺菌性能最好,醛類的殺菌性能最差。(2)消毒劑的毒性安全性實(shí)驗(yàn)選取上述試驗(yàn)中篩選獲得的PHMGH作為研究對(duì)象。探究該消毒劑的急性毒性和安全濃度,以達(dá)到科學(xué)用藥目的。試驗(yàn)結(jié)果得到PHMGH的24小時(shí)半數(shù)致死濃度87.49mg/L,48小時(shí)半數(shù)致死濃度27mg/L,該消毒劑的安全濃度2.7mg/L。(3)副溶血弧菌人工感染對(duì)蝦后治療試驗(yàn)對(duì)健康對(duì)蝦進(jìn)行人工感染副溶血弧菌,得到能有效感染對(duì)蝦的副溶血弧菌菌懸液濃度為10~7cfu/mL,再在該菌懸液濃度下設(shè)置不同的PHMGH濃度,觀察不同濃度的PHMGH對(duì)人工感染副溶血弧菌的對(duì)蝦的死亡率降低效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PHMGH在濃度為0.2mg/L-0.5mg/L時(shí)對(duì)降低副溶血弧菌感染的死亡率是有明顯效果的。(4)消毒劑的殺菌機(jī)理探究殺菌原理可能是由于PHMGH溶于水后的產(chǎn)物帶正電荷,細(xì)菌表面帶負(fù)電荷,二者結(jié)合后會(huì)堵住細(xì)菌呼吸通道,導(dǎo)致細(xì)胞死亡。實(shí)驗(yàn)一,對(duì)不同種類細(xì)菌懸液進(jìn)行定量殺菌實(shí)驗(yàn),分為革蘭氏陽(yáng)性和陰性,觀察消毒劑對(duì)兩類細(xì)菌殺滅能力的差異性。實(shí)驗(yàn)二,用SYTOX Green熒光染料對(duì)用PHMGH處理過的副溶血弧菌染色,該染料和死亡細(xì)胞的細(xì)胞核結(jié)合,在紫外光激發(fā)下可以產(chǎn)生綠色熒光。結(jié)果顯示PHMGH會(huì)使細(xì)胞膜破損。(5)消毒劑在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用對(duì)正處于副溶血弧菌爆發(fā)時(shí)的對(duì)蝦養(yǎng)殖池塘,進(jìn)行PHMGH消毒處理。向池塘中投加PHMGH,使其終濃度達(dá)到0.2mg/L。持續(xù)5天檢測(cè)施用后對(duì)蝦體內(nèi)和水體副溶血弧菌含量。結(jié)果顯示0h-24h內(nèi)對(duì)蝦體內(nèi)的副溶血弧菌含量略有上升,24h之后對(duì)蝦體內(nèi)的弧菌含量開始大幅度下降。水體中副溶血弧菌一直處于下降趨勢(shì)。PHMGH是一種能高效殺滅副溶血弧菌的消毒劑,對(duì)養(yǎng)殖對(duì)蝦具有較高的安全濃度,對(duì)被人工感染副溶血弧菌的對(duì)蝦能起到有效的保護(hù)作用,可以有效殺滅多種水產(chǎn)養(yǎng)殖中致病菌。對(duì)副溶血弧菌的主要?dú)邕^程是破壞細(xì)菌細(xì)胞膜的完整性。本研究為PHMGH在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的大量推廣應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S945.4
【圖文】：

PHMGH 對(duì)對(duì)蝦的急性毒性和安全濃度當(dāng) PHMGH 的濃度為 0.2mg/L 到 1.442mg/L 之間，48h 內(nèi)無(wú)對(duì)蝦死亡現(xiàn)象GH 濃度達(dá)到 10.209mg/L 時(shí)，24h 即出現(xiàn)死亡，未死的對(duì)蝦 48h 死亡數(shù)目增達(dá)到 72.193mg/L 時(shí)，死亡趨勢(shì)和 10.209mg/L 相同。當(dāng)濃度為 500mg/L 時(shí)之內(nèi)即全部死亡。消毒劑剛加入時(shí)，除最后兩組出現(xiàn)對(duì)蝦跳躍不安等應(yīng)激剩余組的對(duì)蝦無(wú)異常反應(yīng)，但是 24h后，出現(xiàn)死亡的組中，部分未死蝦則伏 ， 身 體 僵 硬 ，喪 失 行 動(dòng) 能 力。 通 過 計(jì) 算 得到 24h 半 數(shù) 致 死 濃=87.49mg/L，48 小時(shí)半數(shù)致死濃度為 LC50=27mg/L，安全濃度 SC 為 2.7m見表 3.2和圖 3.2.1。圖 3.1.1 聚六亞甲基胍鹽酸鹽最小殺滅副溶血弧菌濃度的確定Fig. 3.1.1 M inimum bactericidal concentration of PHM GH to V.P

圖 3.2.1 不同濃度的 PHMGH 對(duì)對(duì)蝦死亡率的影響Fig. 3.2.1 mortality rate of shrimp treated by different concentration of PHM GH PHMGH 對(duì)人工感染副溶血弧菌對(duì)蝦的保護(hù)作用.1 副溶血弧菌對(duì)對(duì)蝦有效感染濃度的確定試驗(yàn)結(jié)果如圖 3.3.1 顯示，當(dāng)副溶血弧菌菌懸液濃度在 1×106cfu/mL 時(shí)，對(duì)蝦累亡率僅有 10%。當(dāng)菌懸液 1×107cfu/mL 時(shí)，48h 內(nèi)可以使對(duì)蝦死亡率達(dá)到 80%以其他幾組菌懸液濃度不會(huì)對(duì)對(duì)蝦造死亡。可以看出菌懸液對(duì)對(duì)蝦的有效侵染濃度值在濃度 1×106cfu/mL-1×107cfu/mL 之間，因此選擇 1×107cfu/mL 作為后面MGH 保護(hù)試驗(yàn)中的侵染濃度。

圖 3.3.1 副溶血弧菌對(duì)對(duì)蝦人工感染導(dǎo)致死亡率Fig. 3.3.1 mortality rate of shrimp treated by different concentration of V.P bacteria suspension.2 PHMGH 對(duì)人工感染副溶血弧菌對(duì)蝦的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖 3.3.2 顯示，PHMGH 的濃度在 0.2mg/L 時(shí)，即可以對(duì)被副溶血弧的凡納濱對(duì)蝦有明顯的治療效果，當(dāng)濃度達(dá)到 0.5mg/L 時(shí)，對(duì)蝦成活率達(dá)。但是當(dāng) PHMGH 的濃度大于 0.5mg/L 時(shí)，病蝦成活率不再有明顯差異。因此養(yǎng)殖實(shí)際生產(chǎn)中，可以根據(jù)對(duì)蝦發(fā)病的情況，使用濃度 0.2mg/L-0.5mg/L，可有效的防治對(duì)蝦肝胰腺壞死癥。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2793879