發(fā)布時(shí)間：2020-08-13 01:51

【摘要】：草魚(Ctenopharyngodon idellus)作為我國最大的淡水魚類養(yǎng)殖品種,在湖北省以至全國都有很大的養(yǎng)殖規(guī)模,隨著養(yǎng)殖密度和養(yǎng)殖規(guī)模的增加,疾病暴發(fā)在所難免。其中由柱狀黃桿菌(Flavobacterium cloumnare)引起的草魚爛鰓病是危害草魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的重要疾病,每年都會(huì)給草魚的養(yǎng)殖業(yè)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。過去幾年,使用抗菌藥物防治柱形病已經(jīng)導(dǎo)致多重耐藥菌株的出現(xiàn)。免疫增強(qiáng)劑具有副作用小、可引起特定的細(xì)胞反應(yīng)和預(yù)防某些特定的病原體等優(yōu)點(diǎn),在水產(chǎn)養(yǎng)殖中已有部分應(yīng)用。相關(guān)研究表明,細(xì)菌胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)可以增強(qiáng)魚類抵抗病原感染的能力,提高其免疫應(yīng)答水平,是亟待開發(fā)的新型多糖類免疫增強(qiáng)劑。目前開發(fā)較多的是海洋和極地微生物的胞外多糖,水產(chǎn)動(dòng)物致病菌的胞外多糖因其特殊的免疫原性,有望成為新型的免疫增強(qiáng)劑。因此,本研究以草魚為研究對(duì)象,探究柱狀黃桿菌的EPS作為免疫增強(qiáng)劑對(duì)草魚免疫功能的影響。主要的研究結(jié)果如下:1.柱狀黃桿菌EPS的制備。用本實(shí)驗(yàn)室前期從黃顙魚病魚上分離的一株柱狀黃桿菌Pf1,發(fā)酵培養(yǎng)得到含大量胞外多糖的上清液,經(jīng)三氯乙酸除蛋白、乙醇反復(fù)沉淀、蒸餾水透析、PEG20000濃縮后得到純度較高的EPS。用苯酚硫酸法測(cè)得EPS的濃度為1.2 mg/m L。2.EPS對(duì)草魚血清酶及免疫保護(hù)率的影響研究。采用酶標(biāo)儀檢測(cè)草魚血清中酶的活力,注射EPS的草魚與對(duì)照組相比,用柱狀黃桿菌浸泡感染前,堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性顯著降低,細(xì)菌感染后,AKP酶活性顯著升高,并在第4天時(shí),酶活性最大;實(shí)驗(yàn)組在感染的第2 d,超氧化物歧化酶(Super oxide Dismutase,SOD)活性顯著高于對(duì)照組,達(dá)到最大;草魚注射0.2 mg EPS一周后,與對(duì)照組相比,在浸泡感染柱狀黃桿菌的第14 d,注射EPS的草魚存活率為85%,遠(yuǎn)高于對(duì)照組的55%,草魚的免疫保護(hù)率為67%。該結(jié)果表明,柱狀黃桿菌產(chǎn)生的EPS可作為免疫增強(qiáng)劑使用。3.EPS對(duì)草魚免疫相關(guān)基因影響的研究。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明,草魚注射0.2 mg EPS一周后,與對(duì)照組相比,在浸泡感染柱狀黃桿菌的第4 d,在肝臟、脾臟、頭腎中,注射組的白介素1(IL-1)、組織相容性復(fù)合體I(MHC I)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的m RNA表達(dá)水平顯著提高;短鏈五聚素(PTX)在草魚的肝臟中,表達(dá)無顯著差異;在感染第4 d,PTX在脾和頭腎中的表達(dá)量顯著提高;四個(gè)基因在體腎的表達(dá)變化呈現(xiàn)不同的規(guī)律。該結(jié)果表明,柱狀黃桿菌產(chǎn)生的EPS可以加強(qiáng)機(jī)體的炎癥反應(yīng)、體液免疫和抗原提呈能力。結(jié)果表明:柱狀黃桿菌的EPS能夠增強(qiáng)草魚對(duì)柱狀黃桿菌的抵抗力,提高草魚的免疫應(yīng)答水平。EPS注射后的草魚,在柱狀黃桿菌感染時(shí)可產(chǎn)生和分泌更多的AKP、SOD。EPS可以使IL-1、MHC I、PTX和TNF-α等免疫相關(guān)基因表達(dá)量升高,增強(qiáng)草魚的免疫功能,顯著提高草魚的存活率。
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S943
【圖文】：

柱狀黃桿菌胞外多糖對(duì)草魚免疫活性的研究驗(yàn)結(jié)果苯酚硫酸法測(cè)定柱狀黃桿菌胞外多糖濃度照 2.2.3 的操作，以葡萄糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如圖 2.1 所示，得到回歸方程 y=0.0077x+0.0405，相0.9972。此圖表明，多糖質(zhì)量濃度在 0.02-0.2 mg/mL 范圍內(nèi)與 OD490性關(guān)系。用此方法測(cè)得提取的 EPS 的濃度為 1.2 mg/mL。

柱狀黃桿菌 EPS 對(duì)感染柱狀黃桿菌的草魚血清 AKP 活*P < 0.05,**P < 0.01The effects of EPS from F.columnare onAKP activity of graschallenge of F.columnare, *P < 0.05,**P < 0.01.糖對(duì)柱狀黃桿菌攻毒的草魚血清 SOD 的影響桿菌浸泡感染前，注射 EPS 組的草魚（EF 組）血液中的組（CF 組）的草魚沒有顯著差異；用柱狀黃桿菌浸泡感染的 SOD 活性沒有顯著影響；在感染柱狀黃桿菌的 2 d 時(shí) CF 組（圖 4.2）。

柱狀黃桿菌 EPS 對(duì)感染柱狀黃桿菌的草魚血清 AKP 活*P < 0.05,**P < 0.01he effects of EPS from F.columnare onAKP activity of graschallenge of F.columnare, *P < 0.05,**P < 0.01.糖對(duì)柱狀黃桿菌攻毒的草魚血清 SOD 的影響桿菌浸泡感染前，注射 EPS 組的草魚（EF 組）血液中（CF 組）的草魚沒有顯著差異；用柱狀黃桿菌浸泡感染的 SOD 活性沒有顯著影響；在感染柱狀黃桿菌的 2 d 時(shí) CF 組（圖 4.2）。

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉洪展;趙惠婭;鄭風(fēng)榮;徐琦;林學(xué)政;;南極細(xì)菌Pseudoalteromonas sp.胞外多糖提高刺參免疫力的研究[J];海洋湖沼通報(bào);2014年04期

2 黎雪梅;李小兵;鄭宗林;郭益紅;;水生動(dòng)物柱狀黃桿菌的研究進(jìn)展[J];飼料與畜牧;2014年06期

3 龐麗姣;吳志新;熊娟;張朋;余劍敏;曲藝;何超軍;楊麗;陳孝煊;;低聚木糖對(duì)草魚非特異性免疫功能的影響[J];動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào);2010年06期

4 劉樹青,江曉路,牟海津,王慧謐,管華詩;免疫多糖對(duì)中國對(duì)蝦血清溶菌酶、磷酸酶和過氧化物酶的作用[J];海洋與湖沼;1999年03期

5 陳昌福;柱狀嗜纖維菌的血清型與其菌苗抗原性的關(guān)系[J];華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);1997年06期

6 馬淑懿;黃榮春;;四種淡水養(yǎng)殖魚類肝胰臟顯微結(jié)構(gòu)的比較研究[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1987年03期

7 黃琪琰,鄭德崇,蔡完其,陸宏達(dá);草魚細(xì)菌性爛鰓病的組織病理研究[J];水產(chǎn)學(xué)報(bào);1983年02期

8 盧全章,倪達(dá)書,葛蕊芳;草魚(Ctenopharyngodon idellus)爛鰓病的研究 Ⅰ.細(xì)菌性病原的研究[J];水生生物學(xué)集刊;1975年03期

9 李常林;馬勝;林虹梅;盧秀芬;;熱滅活法檢測(cè)骨堿性磷酸酶技術(shù)的臨床應(yīng)用[J];中華現(xiàn)代兒科學(xué)雜志;2005年01期

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1 高培麗;產(chǎn)胞外多糖南極微生物的篩選及其胞外多糖的應(yīng)用研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2017年

2 李凱;南極細(xì)菌Pseudoalteromonas sp.3-3-1-2胞外多糖發(fā)酵條件優(yōu)化及免疫活性研究[D];山東大學(xué);2015年

3 李青梅;多個(gè)免疫相關(guān)基因在草魚中腎的表達(dá)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2013年

4 許金花;生孢噬纖維菌的分離鑒定及胞外多糖的免疫作用的研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

本文編號(hào)：2791343