【摘要】：本文研究了蛋白對生長中期草魚生產(chǎn)性能、疾病抵抗力、腸道健康、機體健康、鰓健康和肌肉品質(zhì)的作用及其作用機制,并根據(jù)不同的標識確定了生長中期草魚的蛋白質(zhì)需要量。試驗選取體重為264.11±0.76 g健康草魚540尾,分別飼喂含不同水平蛋白的飼糧(可消化蛋白分別為143.1、176.7、217.2、257.5、292.2和322.8 g kg~(-1))8周。生長試驗結(jié)束后,用嗜水氣單胞菌攻毒14天和魚害粘球菌攻毒3天,分別考察蛋白對草魚腸道、頭腎、脾臟和皮膚以及鰓免疫功能、抗氧化損傷能力、細胞凋亡相關(guān)指標和緊密連接蛋白的作用及其作用機制。本試驗結(jié)果表明,與低蛋白組(可消化蛋白143.1 g kg~(-1)飼糧)或高蛋白組(可消化蛋白322.8 g kg~(-1)飼糧)相比,適宜水平的蛋白提高了生長中期草魚增重百分比、采食量、飼料效率和特異性生長率(P0.05),表明蛋白能夠提高草魚的生產(chǎn)性能。同時,適宜水平的蛋白提高了生長中期草魚攻毒成活率,降低了腸炎發(fā)病率、赤皮發(fā)病率以及爛鰓發(fā)病率(P0.05),表明蛋白能夠增強草魚抵抗腸炎、赤皮和爛鰓發(fā)生的能力。魚體抵抗腸炎、赤皮和爛鰓發(fā)生的能力與腸道健康、機體健康和鰓健康有關(guān)。進一步研究發(fā)現(xiàn)：適宜水平的蛋白增加了生長中期草魚腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓中溶菌酶和酸性磷酸酶活力、補體C3和C4含量(P0.05),上調(diào)了抗菌肽LEAP-2、Hepcidin、β-defensin、抗炎細胞因子轉(zhuǎn)化生長因子-β1 (TGF-β1)和TGF-β2以及信號分子核因子KB抑制因子α(IκBα)、雷帕霉素靶蛋白(TOR)和核糖體蛋白S6激酶1(S6K1)的基因表達(P0.05),下調(diào)了促炎細胞因子腫瘤壞死因子α (TNF-α)、白介素~(-1)β (IL~(-1)β)、IL~(-1)2p35和干擾素γ2 (IFN-γ2)以及信號分子核因子轉(zhuǎn)錄子-κB (NF-κB) P65、抑制蛋白κB激酶β(IKKβ)、抑制蛋白κB激酶γ(IKKγ)和eIF4E結(jié)合蛋白2(4E-BP2)的mRNA水平(P0.05),表明蛋白能夠緩解草魚的炎癥反應(yīng),提高黏膜免疫和機體免疫功能。同時,適宜水平的蛋白降低了生長中期草魚腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓中活性氧、丙二醛和蛋白羰基的含量(P0.05),提高了抗氧化酶谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GST)和谷胱甘肽還原酶(GR)活力和mRNA水平(P0.05)；同時,上調(diào)了信號分子核因子相關(guān)因子2(Nrf2)的基因表達(P0.05),下調(diào)了信號分子Kelch綁定蛋白1b (Keap1b)的mRNA水平(P0.05),增強了抗氧化損傷能力,降低了氧化損傷；同時,上調(diào)了B-細胞淋巴瘤蛋白-2(Bcl-2)、凋亡抑制蛋白(IAP)和髓細胞白血病基因~(-1)(Mc1~(-1))的基因表達(P0.05),下調(diào)了半胱氨酸天冬氨酸酸性蛋白酶(caspase 3、8、9)、脂肪酸合成酶配體(FasL)、凋亡蛋白酶活化因子~(-1)(Apaf~(-1))和B-細胞淋巴瘤-2相關(guān)X蛋白(Bax)的基因表達(P0.05),抑制了細胞凋亡,保證了腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓細胞結(jié)構(gòu)完整性；并可能通過下調(diào)肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)基因表達上調(diào)了緊密連接蛋白occludin、緊密連接1(ZO~(-1))、claudin b、7a、7b、12和15a的基因表達(P0.05),維持了草魚腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓細胞間結(jié)構(gòu)完整性。與此同時,適宜水平的蛋白增加了肌肉蛋白質(zhì)、脂肪和羥脯氨酸含量、必需氨基酸和游離脂肪酸組成,以及剪切力和pH;降低了肌肉中水分、乳酸、組織蛋白酶B和L,提高了魚類的肌肉品質(zhì)。此外,適宜水平的蛋白降低了生長中期草魚肌肉中活性氧、丙二醛和蛋白羰基的含量(P0.05),提高了CuZnSOD、MnSOD、ASA、AHR、GPx、GST和GR活力和mRNA水平(P0.05),同時,上調(diào)了信號分子Nrf2、CK2α、CK2β、TOR和S6K1的mRNA水平(P0.05),下調(diào)了信號分子Keap1a和Keap1b的mRNA水平(P0.05),增強了肌肉抗氧化能力,降低了氧化損傷,保證了肌肉的結(jié)構(gòu)完整性。綜上所述,飼糧中適宜水平的蛋白能夠提高生長中期草魚的生產(chǎn)性能以及抵抗腸炎、赤皮和爛鰓發(fā)生的能力。抵抗腸炎、赤皮和爛鰓發(fā)生能力的提高與蛋白通過提高免疫功能和結(jié)構(gòu)完整性從而增強草魚腸道健康、機體健康和鰓健康有關(guān)。蛋白提高草魚腸道黏膜免疫、機體免疫和鰓黏膜免疫功能與其提高腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓抗菌物質(zhì)產(chǎn)生,并可能通過TOR信號上調(diào)抗炎細胞因子和NF-κB信號下調(diào)促炎細胞因子,降低炎癥反應(yīng)有關(guān)。蛋白提高草魚腸道、頭腎、脾臟、皮膚和鰓結(jié)構(gòu)完整性可能與其通過Nrf2信號上調(diào)抗氧化酶基因表達并提高酶活力,增強了抗氧化能力,降低氧化損傷；通過上調(diào)抗凋亡蛋白,下調(diào)促凋亡蛋白基因表達,抑制細胞凋亡；并可能通過調(diào)控MLCK信號調(diào)控細胞間緊密連接蛋白表達,增強細胞間的結(jié)構(gòu)完整性有關(guān)。同時,蛋白提高魚類肌肉品質(zhì)可能與提高的抗氧化能力有關(guān)。在本試驗條件下,以生產(chǎn)性能和抵抗疾病發(fā)生能力為標識：264-787 g草魚的蛋白質(zhì)需要量為286.82 g kg~(-1)(250.66 g可消化蛋白kg~(-1))、283.06 g kg~(-1)(245.88 g可消化蛋白kg~(-1))、292.10 g kg~(-1)(255.47 g可消化蛋白kg~(-1))、294.53 g kg~(-1)(258.88 g可消化蛋白kg~(-1))、241.45 g kg~(-1) (217.68 g可消化蛋白kg~(-1))和286.65 g kg~(-1)(253.73g可消化蛋白kg~(-1))飼糧。
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S965.112
【圖文】：

５．３巧抗疾病發(fā)生能力逡逑５．３．１抵抗腸炎發(fā)生能力逡逑蛋白對生長中期草魚成活率和腸炎發(fā)病率的影響見圖１。由圖１可知，連白對生逡逑長中期等魚成活率和肪炎發(fā)病率具有顯著的影響（Ｐ＜０．０５）。逡逑成活率：適宜水平的蛋白可Ｗ提高生長中期草魚的成活率（＾＜０．０５）。隨著蛋白逡逑水平的增加，草魚成活率晶著增加，當飼糧中可消化蛋白水平為２１７．２邋ｇｋｇ－ｉ時達到逡逑最大（尸＜０．０５），繼續(xù)添加蛋白，生長中期草魚成活率變化差異不強著（Ｐ＞０．０５）。逡逑腸炎發(fā)病率：適宜水平的蛋白可Ｗ降低生長中期草魚的腸炎發(fā)病率（尸＜０．０５）。逡逑隨著蛋白水平的增加，草魚腸炎發(fā)病率顯著降低，當飼糧中可消化蛋白水平為２１７．２邋ｇ逡逑ｋｇ－ｉ時達到最低（Ｐ＜０．０５），隨后隨著蛋白的繼續(xù)添加，腸炎發(fā)病率逐漸升高。逡逑２１逡逑

時達到最大，隨后逐漸下調(diào)。逡逑蛋白對生長中期草魚前腸、中腸和后腸促炎細胞因子山－ｉｐ、比－８、比－１２口３５、逡逑止－１２口４０、止－１５、化－１７０、ＩＦＮ－丫２和ＴＮＦ－ａ基因表達的影響見圖５。逡逑止－１｜３、山－８、ＩＬ１２ｐ３５、ＩＬ１２ｐ４０、止－１５、比－１７Ｄ、ＩＦＮ－Ｙ２邋和邋ＴＮＦ－ａ邋基因表達；逡逑適宜水平的蛋白可（＾下調(diào)生長中期草魚腸道的山－１｜３、山－８、山－１２９３５、山－１２自４０、比－１５、逡逑ＩＬ１７Ｄ、ＩＦＮ－ｙ２和ＴＮＦ－ａ基因表達（／＞邋＜０．０５）。當可消化蛋白水平分別為２９２．２、２５７．５、逡逑２５７．５、２５７．５、２５７．５、２５７．５邋和邋２５７．５邋ｇｋｇ－ｉ邋時，ＩＬｌｐ、Ｌ－１２ｐ３５、Ｌ－１２ｐ４０、比－１５、逡逑ＩＬ－１７Ｄ、ＩＦＮ－侶和ＴＮＦ－ａ在前筋基因表達達到最小值，隨后隨著蛋白水平的增加，逡逑其基因表達逐漸上調(diào)；飼糧蛋白水平對前腸比－８基因表達無顯著影響（Ｐ＞邋０．０５）。逡逑化－８、ｎ＾－１２ｐ３５、比－１２口４０、止－１５、化－１７０和ＩＦＮ－丫２在中胺的基因表達隨著巧糧蛋逡逑白水平的X椉又鸞ソ檔停彼橇縛上鞍姿椒直鷂玻擔罰�、２巧．５、２P�、２巧．５、辶x希玻擔罰島停玻ィ玻玨澹耄紓貝锏階畹�，随后随字Z鞍姿降腦黽又鸞ド系鰨恢諧ι劍保澈灣義希裕危疲岬幕蟣澩鎪孀諾鞍姿皆黽酉災(zāi)南碌鰨逼湮保罰叮峰澹緲上鞍祝耄紓卞義獻畹

本文編號：2778050