【摘要】：全球水產(chǎn)業(yè)每年因無乳鏈球菌(SStreptococcus agalactiae/group B Streptococcus,GBS)病的流行性暴發(fā)造成了慘重的經(jīng)濟損失,羅非魚是GBS的易感宿主之一,而近年來引起我國養(yǎng)殖羅非魚暴發(fā)該疾病的GBS又以Ia型為主。人們通常使用抗生素對羅非魚GBS病進行防治,隨著抗生素帶來的問題日益嚴重,人們開始研制或者找尋更有效、更安全的新型藥物來替代抗生素。在尋找抗生素替代品的過程中,卵黃抗體(immunoglobulin of egg yolk,IgY)由于生物學(xué)上不激活補體,不與Fc受體和人類風(fēng)濕因子結(jié)合,可與異源抗原上的更多表位發(fā)生反應(yīng)等高特異性優(yōu)勢；以及制備上成本低、產(chǎn)出率高、提純簡便快捷,并具有耐酸堿、穩(wěn)定性好等優(yōu)點,引起了許多研究人員的興趣。本研究以I。型菌株GBS/HN0303為抗原免疫蛋雞,采集免疫蛋；采用氯仿法與飽和硫酸銨鹽析法結(jié)合的方式制備特異性IgY。運用玻片凝集試驗、免疫印跡(WB)、細菌特異性染色、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)與試管凝集試驗等方法,從定性到定量,對所得IgY抗體特性、在蛋雞體內(nèi)免疫應(yīng)答情況及其理化性質(zhì)進行檢測；并通過／.外抑菌與體內(nèi)抗病試驗對其抗菌效果進行評價。1.IgY制備效果及理化性質(zhì)本研究以1×109CFU/mL菌液制成的全菌滅活疫苗,可引起蛋雞較好的免疫應(yīng)答,經(jīng)過四次免疫后,雞蛋中的IgY可以達到較高的濃度；經(jīng)間接ELISA測定,雞蛋中IgY抗體水平峰值出現(xiàn)于四免后第48d,可以達到1：100000,并可維持至少一個月時間。通過玻片凝集、特異性染色及免疫印跡等試驗,證明sp-IgY具有較高結(jié)合活性；另外在低溫環(huán)境下儲存IgY活性穩(wěn)定,且在pH3-7范圍內(nèi),IgY抗體活性良好。2.IgY的體外抑菌能力在液體環(huán)境中,sp-IgY的抑菌效率明顯,28℃下孵育,500μg/mL的sp-IgY可成功抑制等體積1×105CFU/mL的GBS/HN0303生長達12h：在固體培養(yǎng)條件下,sp-IgY抑菌效果與其特異性組分含量正相關(guān),含量越高,抑菌效果越佳,呈現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系；還證明了sp-IgY在魚體內(nèi)對GBS/HN0303具有中和能力。3.IgY的體內(nèi)抗病能力以羅非魚為模型動物,檢驗了所制備IgY的防治功效。總體上,都表現(xiàn)出了對羅非魚免疫增強的作用,具體體現(xiàn)為攻毒后延緩羅非魚發(fā)病進程,其中sp-IgY組較對照組有效降低了累計死亡率,表現(xiàn)出了其具有特異性抗病能力；而將sp-IgY拌料口服免疫時,隨著飼料中sp-IgY含量的升高,其免疫保護率亦隨之上升,最高免疫保護率可達46.7%,證實sp-IgY在體內(nèi)發(fā)揮抗病作用時,依舊存在量效關(guān)系。綜上所述,本研究制備的羅非魚源GBS特異性IgY具有一定保護作用,可將其作為一種新型的羅非魚抗菌免疫制劑。
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S948
【圖文】：

邐ｙ逡逑ｉ％邋Ｉ邐Ｉ家兔１逡逑圖１．１脊椎動物進化譜ｉｗ逡逑Ｆｉｇ邋１．１邋Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ逡逑２N２邋ＩｇＹ的結(jié)構(gòu)和功能逡逑最初，人們認為ＩｇＹ與ＩｇＧ相似，然而現(xiàn)在人們發(fā)現(xiàn)它是哺乳類動物ＩｇＧ、逡逑ＩｇＥ甚至包括ＩｇＡ的前體蛋白。雖然禽類ＩｇＹ在功能上與哺乳類動物ＩｇＧ差異不逡逑大，在結(jié)構(gòu)上卻差異很大。ＩｇＹ分子的一般結(jié)構(gòu)與ＩｇＧ分子相同，都由兩條重鏈逡逑（Ｈ）和兩條輕鏈（Ｌ）構(gòu)成，從分子量上比較，ＩｇＹ分子量（１８化Ｄａ）與ＩｇＹ重逡逑鏈分了量（６７－７０ｋＤａ）分別比ＩｇＧ的分子量（１５化Ｄａ）與ＩｇＧ重鏈分子量（５化Ｄａ）逡逑大。這是由于ＩｇＹ重鏈恒定結(jié)構(gòu)域與相應(yīng)的區(qū)域間碳氨鏈的數(shù)量有所增加，ＩｇＧ逡逑僅有３個保守區(qū)域（Ｃｙ１－Ｃｙ３），而ＩｇＹ有４個（Ｃ丫邋１－Ｃｙ４）邋ｗｎ邋（如圖１．２）。從邏逡逑輯上分析，由于ＩｇＹ分子較之ＩｇＧ分子的重鏈多出了邋一個保守區(qū)域Ｗ及其相應(yīng)的逡逑區(qū)域間碳氨鏈的分子量，所Ｗ形成了上述結(jié)果。ＩｇＹ在結(jié)構(gòu)上與ＩｇＧ相比較，還逡逑有其它一些不同之處

抗體制備情況見表２．４，蛋雞免疫后，試驗組１５羽蛋雞共采得雞蛋９０７枚，平均每逡逑周期３２．３９枚，雞日均產(chǎn)蛋０．７２枚；對照組５羽蛋雞共采得雞蛋３４９枚，平均每周期１２．４６逡逑枚，雞日均產(chǎn)蛋化８３枚�？贵w制備各步驟純度檢測結(jié)果見圖２．１。由圖可知，飽和硫逡逑酸轅鹽析分離的液體，經(jīng)ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電泳后形成兩個明顯條帶，分子量分別約為；６６ｋＤａ逡逑和２８ｋＤａ，該兩條帶分別對應(yīng)ＩｇＹ的重鏈和輕鏈，顯示出了該方法制備產(chǎn)物中的ＩｇＹ純逡逑度較高。逡逑表２．４抗體制備情況圖逡逑Ｔａｂ邋２．４邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋化ｅ邋ａｎｔｉｂｏｄｙ邋ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ逡逑＾驗組邐對照組邐￣逡逑提取液總體積（ｍＬ）邐２％＂７５邋（９０７枚）邐８７２５邋（３４９枚）逡逑提取液平均濃度（ｍｇ／ｍＬ）邐１０．５４１邐１０．５４９逡逑蛋平巧水溶性組分含量（ｍｇ）邐２６３．５２５邐２６３．７２５逡逑分離液總體積（ｍＬ）邐５４００邋（９０７枚）邐２０００邋（３４９枚）逡逑分離液平均濃度（ｍｇ／ｍＬ）邐１３．４３１邐１４．７８４逡逑蛋平均分離液含量（ｍｇ）邐７９．９６４邐８４．７２２邐逡逑Ｍ邋１邐２邐Ｍ邋３邐４逡逑ｋＤａ邋秦．‘。ｋＤａ邐ＶＳ邋Ｋ逡逑９７．２邐}0岕ｒ邋Ｗｍ．邐９Ｔ．２，ｍｍｒ邋ＷＭ逡逑６６．４邐ｍ邐６６．４邋髓邐ｌＵｆ逡逑４４．３邐瓣邐４４．３邋ｆｉｆ逡逑９０邋（＼邐那卿－２９．０邋ｍｍｍ邋．邐—邐￣＇…Ｊ逡逑＇兮．私岕＊＂＾＾邐揓＇：‘Ｖ游巧巧巧逡逑＇邋－邐曲

Ｆｉｇ邋２．２邋Ｔｈｅ邋Ｋｓｕｌｔ邋ｏｆ邋ａｇｇｌｕＵｎａｔｉｏｎ邋ｔ：ｅｓｔ逡逑染色逡逑出，經(jīng)過細菌特異性染色后，ｓｐ－ＩｇＹ組（圖２．３－NB圖２．３－Ｂ左）與空白姐（圖２．３－Ｃ左）則未顯色，鏡染之后，每沮都可見均質(zhì)紅染的細菌細胞（圖２．３－Ａ對ＧＢＳ／ＨＮ０３０３具有特異性結(jié)合能力。逡逑５．１逡逑．采x锿兀豪杳位Α叮危渝澹靛危懼危誨�，’逦＊辶x希掊危渙顧 乏邋＊彟邋＾邐、）逡逑�。垮澹�，邋；邐！邋Ｓ邋＆．嗦刦逡逑４＇邋’％％換；，二禾產(chǎn)私}sＪＩ逡逑＊魯泌復(fù)＊

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 石和榮;黃木珍;黎炯;潘忠超;陳善真;李其昌;王志花;;羅非魚無乳鏈球菌與嗜水性單胞菌病的防治初探[J];當代水產(chǎn);2014年01期

2 吳斌;;“新吉富”羅非魚免疫球蛋白單克隆抗體的制備及其在免疫效果評價上的應(yīng)用[J];福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2017年02期

3 汪開毓;陳德芳;黃凌遠;連海;王均;李成偉;;2009年8-9月海南羅非魚暴發(fā)性疾病初探[J];科學(xué)養(yǎng)魚;2010年01期

4 吳毓波;;論羅非魚菜品開發(fā)[J];食品安全導(dǎo)刊;2018年36期

5 廖靜;羅茵;;羅非魚內(nèi)銷突破產(chǎn)業(yè)瓶頸[J];海洋與漁業(yè);2017年12期

6 陳永光;;羅非魚傳統(tǒng)單養(yǎng)和生態(tài)混養(yǎng)的對比分析[J];農(nóng)民致富之友;2018年11期

7 王文彬;;微利時期養(yǎng)殖羅非魚?增收措施[J];漁業(yè)致富指南;2016年23期

8 郭志文;;羅非魚越冬管理淺談[J];漁業(yè)致富指南;2016年23期

9 盧邁新;朱華平;黃樟翰;高風(fēng)英;可小麗;劉志剛;曹建萌;王淼;;莫荷羅非魚“廣福1號”[J];中國水產(chǎn);2016年12期

10 盧太滿;;羅非魚標粗苗的日常管理流程[J];水產(chǎn)養(yǎng)殖;2017年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 范晶晶;單奇;尹怡;劉書貴;李麗春;鄭光明;;頭孢喹肟在羅非魚體內(nèi)的藥代動力學(xué)[A];2016年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2016年

2 劉濤;孟順龍;裘麗萍;陳家長;;滅多威對羅非魚精巢組織半胱天冬氨酸蛋白酶活性的影響[A];2016年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2016年

3 張靜怡;包斌;王南平;何蘭;Elango Jeevithan;吳文惠;;羅非魚膠原蛋白抗原性刺激性和植入特性的研究[A];全國第九屆海洋生物技術(shù)與創(chuàng)新藥物學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2014年

4 公翠萍;朱文彬;董在杰;;不同體色紅羅非魚生長動態(tài)的觀察與分析[A];2014年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2014年

5 陳興婷;王蘭梅;董在杰;;紅羅非魚體色相關(guān)基因的表達模式分析[A];2015年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2015年

6 周游;陳石;張成林;;冬季羅非魚循環(huán)水暫養(yǎng)系統(tǒng)研究[A];2015年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2015年

7 馬艷平;李嘉彬;馮國清;葉清生;郝樂;劉振興;柯浩;;廣州市羅非魚源無乳鏈球菌分離鑒定與致病性研究[A];中國水產(chǎn)學(xué)會魚病專業(yè)委員會2013年學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2013年

8 王婷;溫子健;年益瑩;王玲;季曉彤;孫黎明;;羅非魚魚皮發(fā)酵產(chǎn)物的生物活性研究[A];中國食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會第十三屆年會論文摘要集[C];2016年

9 趙婷婷;劉奕;汪學(xué)杰;劉超;胡隱昌;羅建仁;;布氏羅非魚肌肉營養(yǎng)成分分析和營養(yǎng)分析評價[A];2014年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2014年

10 王振華;宋紅橋;吳凡;吳錦婷;;低溫暫養(yǎng)環(huán)境對羅非魚血液生化指標與排泄水平的影響[A];2015年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2015年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 海洋;羅非魚鏈球菌有了“緊箍咒”[N];中國漁業(yè)報;2015年

2 張強;“羅非魚關(guān)鍵技術(shù)”提升整個產(chǎn)業(yè)[N];中國漁業(yè)報;2010年

3 本報記者 金昌波 特約記者 何光興;海南勤富實業(yè)有限公司董事長周勤富：從“鴨司令”到“羅非魚大王”[N];海南日報;2019年

4 劉甜寧 雷長寧;小小羅非魚“游”向國際大市場[N];中國國門時報;2019年

5 記者 梁振君 特約記者 張振豪 通訊員 李寧;我省上半年出口羅非魚制品近1.4億美元[N];海南日報;2019年

6 本報記者 張晴丹;一條“零浪費”的魚[N];中國科學(xué)報;2018年

7 張振豪 李寧;�？谝巧习肽瓿隹诹_非魚制品近1.4億美元[N];中國漁業(yè)報;2019年

8 王文彬;盡早做好羅非魚苗種越冬準備工作[N];中國漁業(yè)報;2015年

9 倪世俊;羅非魚苗種管理技術(shù)[N];中國漁業(yè)報;2015年

10 ;外貿(mào)走量小 短期羅非魚價難漲[N];新農(nóng)村商報;2015年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 趙永強;羅非魚片臭氧減菌化處理中自由基的產(chǎn)生及其對產(chǎn)品品質(zhì)與安全性的影響[D];中國海洋大學(xué);2013年

2 孟順龍;環(huán)境雌激素滅多威對雄羅非魚下丘腦—垂體—性腺軸和抗氧化防御系統(tǒng)的影響研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 陳棟;金雀異黃素對尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）生長的影響及其機制研究[D];中國海洋大學(xué);2013年

4 胡重江;羅非魚和南方鲇生殖細胞幾種分子標記的克隆和表達研究[D];西南大學(xué);2008年

5 李明輝;羅非魚基因敲除技術(shù)的建立及其在性別決定與分化研究中的應(yīng)用[D];西南大學(xué);2014年

6 何安元;羅非魚PPARγ在脂代謝中的調(diào)節(jié)作用及其轉(zhuǎn)錄活性[D];華東師范大學(xué);2016年

7 吳利敏;Rspo1和β-catenin在羅非魚卵巢分化、維持過程中的功能研究[D];西南大學(xué);2016年

8 王蓓;基于全基因組序列分析篩選羅非魚源無乳鏈球菌ZQ0910株保護性抗原及其免疫保護性研究[D];中國海洋大學(xué);2013年

9 冉超;酵母在健康水產(chǎn)養(yǎng)殖中的作用和初步機理研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

10 芮沫;羅非魚TOLL樣受體和FGF受體的克隆、鑒定、表達和分子分析[D];吉林大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 曾宇鯤;羅非魚源無乳鏈球菌特異性卵黃抗體的制備及其活性研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

2 趙良;高壓靜電場對羅非魚片品質(zhì)的影響及作用機理研究[D];上海海洋大學(xué);2016年

3 何其;基于物性表征的凍羅非魚片品質(zhì)特性的研究[D];海南大學(xué);2014年

4 王術(shù)娥;羅非魚營養(yǎng)、揮發(fā)性成分及質(zhì)構(gòu)特性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

5 王斌;中國羅非魚出口貿(mào)易國際競爭力研究[D];江南大學(xué);2011年

6 孫永軍;廣西羅非魚產(chǎn)業(yè)發(fā)展研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

7 原雪;羅非魚魚鱗膠原及其低聚肽的制備及純化[D];福建師范大學(xué);2015年

8 饒偉民;不同大小羅非魚對苦草和附著藻的影響及其對淺水富營養(yǎng)湖泊修復(fù)的意義[D];暨南大學(xué);2014年

9 蔣麗;羅非魚皮膠原蛋白及多肽美容護膚作用研究[D];合肥工業(yè)大學(xué);2016年

10 陸成偉;環(huán)境因子對紅羅非魚生長及性別決定的影響研究[D];福州大學(xué);2014年

本文編號：2774748