【摘要】：氣單胞菌為條件致病菌,在水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中普遍存在;喹諾酮類藥物廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè),藥物的不合理使用導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性問題嚴(yán)重化。質(zhì)粒介導(dǎo)喹諾酮類耐藥(Plasmid-mediated Quinolone Resistance,PMQR)是喹諾酮類耐藥機(jī)制的重要組成部分,可引起藥物低水平耐藥。本文旨在分離鑒定水產(chǎn)動(dòng)物源氣單胞菌的基礎(chǔ)上,采用微量肉湯二倍稀釋法測(cè)定菌株對(duì)8大類22種常見抗菌藥物的最小抑菌濃度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC);采用PCR方法,檢測(cè)分離菌株P(guān)MQR基因的攜帶情況并分析喹諾酮類耐藥決定區(qū)(Quinolone Resistance Determining Region,QRDR)靶基因突變情況,同時(shí)提取PMQR陽性菌質(zhì)粒,了解菌株攜帶質(zhì)粒的情況;通過ERIC-PCR擴(kuò)增分析PMQR陽性菌株的同源性。從1990~2014年采集于不同來源的患病水產(chǎn)動(dòng)物中分離出116株氣單胞菌,經(jīng)分類鑒定,嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)有68株、維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)30株、豚鼠氣單胞菌(Aeromonas caviae)7株、達(dá)卡氣單胞菌(Aeromonas dhakensis)5株、簡(jiǎn)達(dá)氣單胞菌(Aeromonas jandaei)4株、中間氣單胞菌(Aeromonas media)1株以及溫和氣單胞菌(Aeromonas sobria)1株。臨床分離的氣單胞菌以嗜水氣單胞菌為主。藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示,分離菌株對(duì)阿莫西林/克拉維酸的耐藥率為92.24%;對(duì)磺胺間甲氧嘧啶的耐藥率為83.62%;對(duì)萘啶酸、土霉素、磺胺甲VA唑/甲氧芐啶和多西環(huán)素的耐藥率介于25%~50%;對(duì)氯霉素、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、新霉素、慶大霉素、阿米卡星、頭孢噻肟和頭孢曲松的耐藥率在15%以下。28株(24.13%)氣單胞菌出現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象,從龜鱉類、經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高且高密度養(yǎng)殖的魚類分離的氣單胞菌相對(duì)耐藥。PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,18株(15.52%)菌株攜帶PMQR基因,其中8株(6.90%)攜帶qnrS2基因,9株(7.76%)攜帶aac(6′)-Ib-cr基因,1株(0.86%)同時(shí)攜帶qnrS2和aac(6′)-Ib-cr基因;60株(51.72%)菌株發(fā)生QRDR的單突變或雙突變;18株P(guān)MQR陽性菌株中,2株(11.11%)菌株的GyrA第83位點(diǎn)絲氨酸突變?yōu)楫惲涟彼?9株(50%)菌株除了GyrA發(fā)生突變外,其ParC第80位點(diǎn)絲氨酸突變?yōu)楫惲涟彼?7株無突變。18株P(guān)MQR基因陽性菌株中,11株菌株表現(xiàn)出對(duì)受試1種或以上喹諾酮類耐藥。單獨(dú)攜帶qnrS2基因的8株P(guān)MQR陽性菌中,除1株具有環(huán)丙沙星耐藥表型外,其他7株均對(duì)所受試的3種喹諾酮類藥物敏感,而且其gyrA和parC基因均不發(fā)生突變。攜帶aac(6')-Ib-cr基因的10株P(guān)MQR陽性菌中,除2株沒有環(huán)丙沙星耐藥表型外,其他8株均表現(xiàn)出對(duì)環(huán)丙沙星耐藥,且有8株出現(xiàn)gyrA和parC雙突變,2株出現(xiàn)gyrA的單突變。研究表明,嗜水氣單胞菌是導(dǎo)致廣東地區(qū)水產(chǎn)動(dòng)物氣單胞菌病害的主要病原菌;臨床分離的水產(chǎn)源氣單胞菌對(duì)受試抗菌藥物產(chǎn)生不同程度的耐藥,從龜鱉類、經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高且高密度養(yǎng)殖的魚類分離的氣單胞菌相對(duì)耐藥;qnrS2基因和aac(6')-Ib-cr基因在不同水產(chǎn)動(dòng)物源氣單胞菌中檢出;攜帶aac(6')-Ib-cr基因的菌株均發(fā)生QRDR突變,并對(duì)NAL、CIP表現(xiàn)出耐藥,單獨(dú)攜帶qnrS2基因的菌株大部分不發(fā)生QRDR突變,但使CIP敏感性下降。研究結(jié)果為指導(dǎo)臨床合理用藥及闡明氣單胞菌的喹諾酮類耐藥機(jī)制提供理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S941.4
【圖文】：

抗菌譜比前三代大大提高，不僅對(duì)好氧或兼性厭氧菌有殺菌、衣原體和支原體引起的感染均有一定的療效（Barrett，2000；S目前主要用于人類醫(yī)療上。4 代喹諾酮類的結(jié)構(gòu)改變見圖 1。

SrRNA的PCR電泳圖

gyrB的PCR電泳圖

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2758221