【摘要】：氣單胞菌為條件致病菌,在水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中普遍存在;喹諾酮類藥物廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè),藥物的不合理使用導致細菌耐藥性問題嚴重化。質(zhì)粒介導喹諾酮類耐藥(Plasmid-mediated Quinolone Resistance,PMQR)是喹諾酮類耐藥機制的重要組成部分,可引起藥物低水平耐藥。本文旨在分離鑒定水產(chǎn)動物源氣單胞菌的基礎(chǔ)上,采用微量肉湯二倍稀釋法測定菌株對8大類22種常見抗菌藥物的最小抑菌濃度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC);采用PCR方法,檢測分離菌株P(guān)MQR基因的攜帶情況并分析喹諾酮類耐藥決定區(qū)(Quinolone Resistance Determining Region,QRDR)靶基因突變情況,同時提取PMQR陽性菌質(zhì)粒,了解菌株攜帶質(zhì)粒的情況;通過ERIC-PCR擴增分析PMQR陽性菌株的同源性。從1990~2014年采集于不同來源的患病水產(chǎn)動物中分離出116株氣單胞菌,經(jīng)分類鑒定,嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)有68株、維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)30株、豚鼠氣單胞菌(Aeromonas caviae)7株、達卡氣單胞菌(Aeromonas dhakensis)5株、簡達氣單胞菌(Aeromonas jandaei)4株、中間氣單胞菌(Aeromonas media)1株以及溫和氣單胞菌(Aeromonas sobria)1株。臨床分離的氣單胞菌以嗜水氣單胞菌為主。藥物敏感性試驗結(jié)果顯示,分離菌株對阿莫西林/克拉維酸的耐藥率為92.24%;對磺胺間甲氧嘧啶的耐藥率為83.62%;對萘啶酸、土霉素、磺胺甲VA唑/甲氧芐啶和多西環(huán)素的耐藥率介于25%~50%;對氯霉素、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、新霉素、慶大霉素、阿米卡星、頭孢噻肟和頭孢曲松的耐藥率在15%以下。28株(24.13%)氣單胞菌出現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象,從龜鱉類、經(jīng)濟價值較高且高密度養(yǎng)殖的魚類分離的氣單胞菌相對耐藥。PCR檢測結(jié)果顯示,18株(15.52%)菌株攜帶PMQR基因,其中8株(6.90%)攜帶qnrS2基因,9株(7.76%)攜帶aac(6′)-Ib-cr基因,1株(0.86%)同時攜帶qnrS2和aac(6′)-Ib-cr基因;60株(51.72%)菌株發(fā)生QRDR的單突變或雙突變;18株P(guān)MQR陽性菌株中,2株(11.11%)菌株的GyrA第83位點絲氨酸突變?yōu)楫惲涟彼?9株(50%)菌株除了GyrA發(fā)生突變外,其ParC第80位點絲氨酸突變?yōu)楫惲涟彼?7株無突變。18株P(guān)MQR基因陽性菌株中,11株菌株表現(xiàn)出對受試1種或以上喹諾酮類耐藥。單獨攜帶qnrS2基因的8株P(guān)MQR陽性菌中,除1株具有環(huán)丙沙星耐藥表型外,其他7株均對所受試的3種喹諾酮類藥物敏感,而且其gyrA和parC基因均不發(fā)生突變。攜帶aac(6')-Ib-cr基因的10株P(guān)MQR陽性菌中,除2株沒有環(huán)丙沙星耐藥表型外,其他8株均表現(xiàn)出對環(huán)丙沙星耐藥,且有8株出現(xiàn)gyrA和parC雙突變,2株出現(xiàn)gyrA的單突變。研究表明,嗜水氣單胞菌是導致廣東地區(qū)水產(chǎn)動物氣單胞菌病害的主要病原菌;臨床分離的水產(chǎn)源氣單胞菌對受試抗菌藥物產(chǎn)生不同程度的耐藥,從龜鱉類、經(jīng)濟價值較高且高密度養(yǎng)殖的魚類分離的氣單胞菌相對耐藥;qnrS2基因和aac(6')-Ib-cr基因在不同水產(chǎn)動物源氣單胞菌中檢出;攜帶aac(6')-Ib-cr基因的菌株均發(fā)生QRDR突變,并對NAL、CIP表現(xiàn)出耐藥,單獨攜帶qnrS2基因的菌株大部分不發(fā)生QRDR突變,但使CIP敏感性下降。研究結(jié)果為指導臨床合理用藥及闡明氣單胞菌的喹諾酮類耐藥機制提供理論依據(jù)。
【學位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S941.4
【圖文】：

抗菌譜比前三代大大提高，不僅對好氧或兼性厭氧菌有殺菌、衣原體和支原體引起的感染均有一定的療效（Barrett，2000；S目前主要用于人類醫(yī)療上。4 代喹諾酮類的結(jié)構(gòu)改變見圖 1。

SrRNA的PCR電泳圖

gyrB的PCR電泳圖

【參考文獻】

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本文編號：2758221