【摘要】：髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)廣泛地存在于動(dòng)物體內(nèi),參與了體內(nèi)多種生理反應(yīng)。當(dāng)機(jī)體受到刺激而產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)時(shí),髓過(guò)氧化物酶含量迅速升高,表現(xiàn)出強(qiáng)烈的氧化活性,可以殺滅入侵的微生物、增強(qiáng)免疫等。同時(shí),髓過(guò)氧化物酶表現(xiàn)出來(lái)的強(qiáng)氧化性對(duì)藥物的氧化代謝也具有重要作用。吡喹酮(praziquantel,PZQ)是一種喹啉吡嗪衍生物,作為抗寄生蟲藥物,廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)上。本研究擬以吡喹酮為模式藥物,鯽為模式生物,分析了鯽在單劑量口灌吡喹酮后,鯽血髓過(guò)氧化物酶基因在m RNA水平的表達(dá)與血液中吡喹酮濃度的關(guān)系,并且研究了黃芪、柴胡、黃連三種中草藥對(duì)吡喹酮代謝以及髓過(guò)氧化物酶基因m RNA水平表達(dá)的影響,嘗試建立一種利用髓過(guò)氧化物酶基因表達(dá)評(píng)價(jià)魚類體內(nèi)藥物殘留的方法,并為進(jìn)一步建立健全水產(chǎn)養(yǎng)殖安全用藥體系提供理論基礎(chǔ)。本文中的主要研究以及結(jié)果如下:1.鯽血髓過(guò)氧化物酶(MPO)mRNA的表達(dá)與血藥濃度關(guān)聯(lián)性本實(shí)驗(yàn)以鯽為試驗(yàn)動(dòng)物,單劑量(10mg/kg)口灌吡喹酮后,在鯽血液中選取β-actin為內(nèi)參基因,通過(guò)熒光定量PCR,分析了不同時(shí)間點(diǎn)鯽血液中MPO m RNA水平的相對(duì)表達(dá)量的變化;利用高效液相色譜(HPLC)技術(shù),測(cè)定了吡喹酮在鯽體內(nèi)的血藥濃度,分析兩者之間的相關(guān)性。結(jié)果顯示,吡喹酮能夠迅速進(jìn)入血液,并被快速消除,血藥濃度與時(shí)間關(guān)系曲線符合二室開(kāi)放模型。在1h時(shí),血液中吡喹酮的濃度達(dá)到最大值,96h后血液中檢測(cè)不到吡喹酮;灌藥后,髓過(guò)氧化物酶基因表達(dá)量隨時(shí)間表現(xiàn)出先升高后下降現(xiàn)象,在1h時(shí)髓過(guò)氧化物酶基因表達(dá)量最高。此外,0.25 h組、0.5 h組、1 h組、3 h組與6 h組與對(duì)照組差異性極顯著(P0.01,下同),12 h組和24 h組與對(duì)照組差異性顯著(P0.05,下同)。48 h與96 h組與對(duì)照組差異不顯著(P0.05,下同)。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),MPO m RNA相對(duì)表達(dá)量與血液吡喹酮濃度之間的相關(guān)系數(shù)r=0.967,為高度相關(guān),并且推測(cè)MPO可能參與吡喹酮的氧化代謝。2.黃芪、黃連與柴胡對(duì)鯽體內(nèi)吡喹酮的代謝影響鯽連續(xù)投喂分別添加有黃芪、柴胡和黃連的飼料,同時(shí)以喂食無(wú)中草藥添加飼料的鯽作為對(duì)照。持續(xù)喂食三十天后,各組鯽分別以10 mg/kg的給藥劑量單次口灌吡喹酮,給藥4 h后恢復(fù)正常投餌,并且分別于口灌后0.25 h、0.5 h、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48h、96 h尾靜脈取血(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5尾),通過(guò)高效液相色譜技術(shù)分析口灌吡喹酮后不同時(shí)間點(diǎn)血液中吡喹酮濃度。結(jié)果顯示,吡喹酮藥時(shí)數(shù)據(jù)在各組鯽血液中符合二室開(kāi)放模型。各組血液中吡喹酮濃度呈現(xiàn)先上升后迅速下降趨勢(shì),對(duì)照組鯽血液中吡喹酮達(dá)峰時(shí)間(T_(max))為1 h,峰值(C_(max))為2.71 mg·L-1,黃芪組鯽血液中吡喹酮達(dá)峰時(shí)間(T_(max))為1 h,峰值(C_(max))為2.90 mg·L-1,柴胡組鯽血液中吡喹酮達(dá)峰時(shí)間(T_(max))為1 h,峰值(C_(max))為3.01 mg·L-1;黃連組鯽血液中吡喹酮達(dá)峰時(shí)間(T_(max))為3 h,峰值(C_(max))為2.50 mg·L-1。黃芪組、柴胡組和黃連組消除半衰期(t1/2β)分別為78.69 h、61.708 h、56.967 h,皆大于對(duì)照組的15.007 h。黃芪組、柴胡組和黃連組的藥時(shí)曲線下面積(AUC(0-∞))分別為136.591mg/L·h、75.009mg/L·h、77.69mg/L·h,分別約為對(duì)照組的4.43倍、2.44倍和2.52倍。黃芪組、柴胡組和黃連組的總體清除率(CL/F)分別為0.073 L/kg、0.133 L/kg、0.129 L/kg,較對(duì)照組的0.325 L/kg顯著降低。說(shuō)明黃芪、柴胡和黃連雖然能夠提高吡喹酮在鯽體內(nèi)的生物利用率,但是卻大大延緩其代謝,致使吡喹酮在鯽體內(nèi)的殘留時(shí)間延長(zhǎng)。水產(chǎn)上中草藥與吡喹酮配伍使用時(shí)應(yīng)當(dāng)慎重。3.黃芪、黃連與柴胡對(duì)鯽血液中髓過(guò)氧化物酶(MPO)mRNA表達(dá)的影響本研究通過(guò)對(duì)鯽連續(xù)投喂分別添加有黃芪、柴胡和黃連的飼料,同時(shí)以喂食無(wú)中草藥添加飼料的鯽作為對(duì)照。持續(xù)投喂三十天后,各組鯽魚分別以10mg/kg的給藥劑量單次口灌吡喹酮,以喂食無(wú)中草藥添加飼料并且未口灌吡喹酮的鯽作為空白對(duì)照,并且于灌藥1 h后于各組鯽尾靜脈取血,(每個(gè)組5尾),利用熒光定量PCR,分析各組鯽外周血中MPO m RNA水平的相對(duì)表達(dá)量的變化。結(jié)果顯示,對(duì)照組髓過(guò)氧化物酶表達(dá)量相對(duì)于空白對(duì)照組明顯升高,說(shuō)明吡喹酮誘導(dǎo)了鯽體內(nèi)髓過(guò)氧化物酶的表達(dá),而黃芪組、柴胡組和黃連組髓過(guò)氧化物酶表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照組顯著降低,說(shuō)明三種中草藥對(duì)髓過(guò)氧化物酶的表達(dá)均有抑制作用。
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S948
【圖文】：

圖 1 氯氮平的體內(nèi)代謝過(guò)程[46]Fig. 1 In vivo metabolism of clozapine氟培拉平（fluperlapine）（a），首先經(jīng)過(guò)細(xì)胞色素酶 P450 催化氧，在 F 的相鄰位置生成羥基，變?yōu)槲镔|(zhì)（b），然后再髓過(guò)氧化物酶與次氯酸共同作用下，羥基被氧化為羰基，生成物質(zhì)（c），經(jīng)過(guò)一系列反應(yīng)，最后氟培拉平被轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物

圖 2 氟培拉平的體內(nèi)代謝過(guò)程[46]Fig. 1 In vivo metabolism of fluperlapine苯進(jìn)入機(jī)體后，先是經(jīng)過(guò)一系列催化反應(yīng)被 CYP2E1 催化生成苯的雙羥基或者三羥基化合物，又被髓過(guò)氧化物酶催化形成苯醌，接著被還原酶 NQO1 還原成為一種具有微量毒性的多羥基苯。最終經(jīng)過(guò)Ⅱ相代謝反應(yīng)后排出體外[49, 50]。

瓊脂糖（1.2 %）凝膠電泳檢測(cè)出 3 條清晰條帶，由上往下依次為 28 S、18 S、5 S（圖1-1）。說(shuō)明提取的總鯽血總 RNA 純度較高并且完整，可以進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

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本文編號(hào)：2756385