【摘要】：黑色素是軟體動物體內(nèi)可以自行合成的重要色素,具有多種生物活性。黑色素不僅具有獨特的著色機制,還具有一定的免疫功能,如:清除體內(nèi)自由基、抗菌、抗氧化等免疫能力。黑色素在自然界分布最為廣泛,對其免疫功能的解析一直是色素功能研究中的熱點問題。長牡蠣是世界范圍內(nèi)重要的經(jīng)濟貝類,也是軟體動物研究的模式生物,不同長牡蠣個體的殼及外套膜組織中常出現(xiàn)黑色素沉積的差異現(xiàn)象。但以往的研究多集中在對長牡蠣黑色素的提取和鑒定方面,對其功能,尤其是免疫功能的認知較少。前期研究顯示,長牡蠣殼中的黑色素沉積與外套膜中的黑色素含量有顯著的相關性,而長牡蠣組織中更多的黑色素沉積是否會對長牡蠣的免疫功能產(chǎn)生影響,還需進一步的生理實驗解析。因此,在本研究中,選取兩種具有不同黑色素含量的長牡蠣外套膜組織(本實驗室選育的黑色素含量高的黑殼長牡蠣和黑色素含量低的白殼長牡蠣)為研究對象,從生理、分子和毒理三個方面研究黑色素是否影響長牡蠣的免疫。主要研究結(jié)果如下:1.通過黑殼與白殼長牡蠣的免疫指標比較,分析具有不同黑色素含量的長牡蠣間免疫能力的差異情況。首先利用灰度比較評估兩種牡蠣黑色素含量差異,再綜合比較分析黑色素含量差異對牡蠣外套膜組織免疫相關指標的綜合影響(TYR,LZM,MPV,IHR,T-AOC和ROS)。其次,通過RNA-Seq解析兩種不同黑色素含量的長牡蠣外套膜組織差異基因表達情況,通過GO和KEGG富集分析黑色素含量對免疫相關生物學過程及通路可能的影響。最后,篩選與免疫相關的差異基因,通過qRT-PCR驗證其差異表達情況。2.分析環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(雙酚A)對黑殼與白殼長牡蠣免疫力的影響。首先采用高效液相色譜-質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)測定天然海水中白殼與黑殼長牡蠣外套膜組織中雙酚A(BPA)含量,發(fā)現(xiàn)黑殼長牡蠣外套膜中的BPA含量較白殼長牡蠣低(P0.05)。由于黑色素合成過程中的關鍵酶酪氨酸酶是一種酚氧化酶,可以通過對酚類或芳胺類等多種底物的氧化起催化作用,因此推測其在BPA等酚類毒物的降解中也發(fā)揮重要作用。其次,為了進一步研究不同黑色素含量牡蠣對BPA降解能力和對BPA損傷抵抗能力的差異,本實驗進行了濃度為1 mg/L,1.5 mg/L和2 mg/L的BPA亞慢性暴露實驗。通過對暴露后長牡蠣外套膜組織中BPA含量分析發(fā)現(xiàn),白殼與黑殼長牡蠣外套膜中BPA含量均隨著暴露濃度的升高而升高。且3種濃度BPA亞慢性暴露后,黑殼長牡蠣外套膜BPA含量均低于白殼長牡蠣外套膜BPA含量,但是差異不顯著(P0.05)。采用3種濃度BPA亞慢性暴露后,黑殼長牡蠣外套膜組織中活性氧(ROS)熒光值均顯著低于白殼長牡蠣(P0.01)。通過對外套膜組織學觀察發(fā)現(xiàn),2 mg/L的高濃度BPA暴露使白殼長牡蠣外套膜組織發(fā)生了明顯的病理變化,黑殼長牡蠣外套膜未發(fā)生明顯的病理變化。可見,黑殼長牡蠣對BPA暴露可能具有更強的抵抗能力。本文通過轉(zhuǎn)錄組及生理指標分析,從分子、生理方面評估兩種黑色素含量不同的長牡蠣在免疫功能上的差異情況,并通過毒理實驗,分析兩種黑色素含量不同的長牡蠣對雙酚A免疫響應的差異情況,初步探討了黑色素含量對長牡蠣免疫力的影響,為深入研究海洋生物黑色素功能以及闡明高黑色素含量長牡蠣的育種優(yōu)勢提供了豐富的基礎資料。
【學位授予單位】：上海海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S917.4
【圖文】：

圖 - 差異表達基因的 - 富集分析圖,OM[XK - - KTXOINSKTZ GTGR_YOY UL *+-Y注：圖 - 為 - 富集分析三大功能類別各自的前 個條目，紅色為生物過程類別，綠色為細胞組分類別，藍色為分子功能類別。

圖 - 白殼與黑殼長牡蠣外套膜 含量比較結(jié)果牡蠣，( 代表黑殼長牡蠣；**代表在統(tǒng)計學上具有極顯著性差異（)USVGXOYUT UL HKZ]KKT ]NOZK YNKRR ( ) GTJ HRGIQ YNKRR (() GIOL, Z_XUYOTGYK , ]NOZK-YNKRRKJ GIOLOI U_YZKX ( ) (, HRGIQ-YNKRRKJ GIOLOHGX XKVXKYKTZY SKGT ± * (T ) ** OTJOIGZKY P牡蠣外套膜 含量比較如圖 - 所示，白、炓殼長牡蠣均值分別為 ± TM S ， ± TM S ，黑殼均值的 倍，在統(tǒng)計學上具有極顯著差異（P 相比，黑殼長牡蠣的外套膜中具有更多的酪氨酸酶含量，色素沉積與酪氨酸酶含量正相關，外套膜顏色就越深，酪氨

圖 - 自然海水中白殼與黑殼長牡蠣外套膜 ( ' 含量牡蠣，( 代表黑殼長牡蠣； *代表在統(tǒng)計學上具有極顯著性差異（PXOYUT UL ( ' IUTZKTZ HKZ]KKT ]NOZK YNKRR ( ) GTJ HRGIQ YNKRR (() GIOLOIYKG]GZKXHOYVNKTUR' , ]NOZK-YNKRRKJ GIOLOI U_YZKX ( ) (, HRGIQ-YNKRRKJ GIOLOHGX XKVXKYKTZY SKGT ± * (T ) * OTJOIGZKY P殼與黑殼長牡蠣 ( ' 含量如圖 - 所示。自然海水中白殼 TM SM，黑殼長牡蠣外套膜 ( ' 含量為 ± TM是炓殼長牡蠣外套膜 ( ' 含量的 倍，由于黑殼長牡蠣蠣高，黑色素合成過程中的關鍵酶酪氨酸酶是一種酚氧化酶等多種底物的氧化起催化作用，從而使其在酚類毒物的降解露后白殼與黑殼長牡蠣外套膜 ( ' 含量分析

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本文編號：2751574