【摘要】：脆殼全海筍、寬殼全海筍和大沽全海筍均屬軟體動(dòng)物門、雙殼綱、海螂目、海筍科、全海筍屬。本論文對(duì)比研究了寬殼全海筍和脆殼全海筍水管和內(nèi)臟團(tuán)組織的營(yíng)養(yǎng)成分,探究了其營(yíng)養(yǎng)成分的差異;進(jìn)一步運(yùn)用分子遺傳學(xué)技術(shù),獲得了一種寬殼全海筍線粒體COⅠ基因特異性擴(kuò)增引物;同時(shí)探討了三種海筍COⅠ基因組成的差別,分析了其遺傳差異程度和在遺傳進(jìn)化中的親緣關(guān)系,揭示了3個(gè)物種的進(jìn)化歷程,研究結(jié)果為3種海筍的種質(zhì)資源保護(hù)和開發(fā)利用提供了可靠的理論依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:采用常規(guī)營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)測(cè)定方法,對(duì)脆殼全海筍和寬殼全海筍的水管和內(nèi)臟團(tuán)組織的營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行了測(cè)定和比較分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)其水管組織的水分和粗蛋白含量均高于內(nèi)臟團(tuán);粗脂肪和總糖的含量均低于內(nèi)臟團(tuán);脆殼全海筍兩種組織的灰分含量均較高;水管和內(nèi)臟團(tuán)中均含有16種氨基酸,內(nèi)臟團(tuán)中必需氨基酸占總氨基酸比例為35.32%-35.54%,這與WHO/FAO推薦的模式相近,高于水管;鮮味氨基酸占總氨基酸的比例為40.38%-51.50%,其中谷氨酸含量最高,其比例達(dá)到13.67%-17.05%;除寬殼全海筍的水管外,兩種海筍氨基酸評(píng)分(AAS)和化學(xué)評(píng)分(CS)的第一限制氨基酸均為蛋氨酸+胱氨酸;礦質(zhì)元素比例均衡,Fe含量豐富。研究結(jié)果表明,兩種海筍的水管是高蛋白、低脂肪、味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富的海產(chǎn)品;脆殼全海筍在補(bǔ)充人類礦物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)元素、治療疾病方面具有廣闊的應(yīng)用前景;寬殼全海筍在補(bǔ)充蛋白質(zhì)和食用口感上更優(yōu)。在3對(duì)自主設(shè)計(jì)的引物中,篩選出一種特異性強(qiáng)、擴(kuò)增效率高的寬殼全海筍COⅠ基因的擴(kuò)增引物,為寬殼全海筍的群體遺傳學(xué)研究提供了便利。運(yùn)用分子遺傳標(biāo)記檢測(cè)技術(shù),比較研究了三種海筍線粒體DNA的COⅠ基因片段,用Dna SP軟件比較了其種內(nèi)和種間的變異位點(diǎn)、單倍型數(shù)、單倍型多樣性、核苷酸多樣性和平均核苷酸差異數(shù),并進(jìn)一步運(yùn)用MEGA 6.0軟件進(jìn)行了堿基組成、遺傳距離的分析,建立了NJ進(jìn)化樹。研究結(jié)果顯示:3種海筍中變異位點(diǎn)、單倍型數(shù)以及遺傳多樣性最多的都是脆殼全海筍,其次為大沽全海筍,而寬殼全海筍的最小。檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)種內(nèi)遺傳距離最大的是脆殼全海筍,其次是寬殼全海筍,大沽全海筍的最小;且種內(nèi)遺傳距離小于種間遺傳距離;在NJ進(jìn)化樹上,寬殼全海筍和脆殼全海筍聚為一支,大沽全海筍單獨(dú)一支。研究結(jié)果表明,脆殼全海筍是這3種生物中最具變異可能性的物種,進(jìn)化樹證明了寬殼全海筍和脆殼全海筍在進(jìn)化上的親緣關(guān)系較近,與大沽全海筍的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。目前,隨著海洋生物的生態(tài)環(huán)境遭到破壞,人類所能利用的海洋生物資源急劇減少。本論文的研究結(jié)果可為海洋貝類的資源保護(hù)、分類和可持續(xù)利用提供重要依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S917.4
【圖文】：

看一下序列是否可用。不可用的話要重新測(cè)序，可用的話需要利用 DNAStar 的 Seqman進(jìn)行校正與正反向拼接，拿到準(zhǔn)確的基因序列。（2）將每一個(gè)序列都用 BioEdit 打開，然后利用復(fù)制與粘貼將序列整合到同一個(gè)窗口下，如圖 2-1：

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)全日制碩士專業(yè)學(xué)位論文3.2 一種寬殼全海筍線粒體 COI 基因擴(kuò)增引物根據(jù)已擴(kuò)增出的寬殼全海筍 COI 基因片段，利用 primmer 5.0 軟件，共設(shè)COI 基因片段的特異性引物，分別是：COIBF：5′-CGACGAATCATAAGGCOIBR：5′-GCCCGAGGGATCAAAG-3′；COIBF-1：5′-CGACGAATCATAACOIBF-1：5′-GCCGAAGAATCAAAA-3′；COIBF-2：5′-CGACGAATCATAAGCOIBF-2：5′-GGATGGCCGAAGAATC-3′。將各引物擴(kuò)增出的產(chǎn)物，用 1.5%糖凝膠電泳檢測(cè)，由凝膠電泳的結(jié)果觀察分析，三對(duì)引物都能擴(kuò)增出單一COIBF 和 COIBR 擴(kuò)增出的條帶最清晰，擴(kuò)增效率較另外兩對(duì)引物高，且擴(kuò)增目遠(yuǎn)高于另外兩對(duì)引物，擴(kuò)增出 29 個(gè)個(gè)體，擴(kuò)增效率高達(dá) 90%。擴(kuò)增產(chǎn)物交因進(jìn)行雙向測(cè)序。測(cè)得的序列用 BioEdit 軟件拼接后，與 NCBI 上下載的 CO多重比對(duì)分析，確定所得序列為寬殼全海筍 COI 序列。

21圖 3-2 三種海筍 COI 基因片段序列比對(duì)Picture 3-2 Comparison of three kinds of Pholadidae COI gene fragment sequence3.3.3 遺傳距離用 MEGA 6.0 軟件進(jìn)行遺傳距離計(jì)算，選擇 Distances 中 Choose Model，將 Model改為 Kimura-2-parameter。結(jié)果見圖 3-3：三種海筍的種內(nèi)遺傳距離都小于種間的遺傳距離；種內(nèi)遺傳距離最大的是脆殼全海筍，在 0 到 0.018 之間，大沽全海筍和寬殼全海筍的遺傳距離，都小于 0.01。種間距離上，最大的是脆殼全海筍和大沽全海筍的距離（1.443），寬殼全海筍與大沽全海筍的種間遺傳距離次之（1.374），最小的是寬殼全

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7 本報(bào)記者 任

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