【摘要】：綠蛙(Rana clamitans)屬兩棲綱(Amphibia)、無尾目(Anura)、蛙科(Ranidae1、蛙屬(Rana),是一種常見水棲動(dòng)物,其胚胎和幼體發(fā)育均在水中進(jìn)行,其原產(chǎn)地是美國(guó),目前中國(guó)多個(gè)省份都有引進(jìn)的綠蛙,且數(shù)量較多。本研究以綠蛙的蝌蚪組織為材料,采用透射電子顯微鏡和DNA末端限制性長(zhǎng)度多態(tài)性(Terminal-restriction fragment length polymorphism, T-RFLP)等技術(shù),研究綠蛙幼體蝌蚪消化道中腸超微結(jié)構(gòu)及其消化道微生物群落多樣性的特征,并發(fā)現(xiàn)500 mg/L氯化鈉對(duì)綠蛙幼體消化道及其微生物群落特征的研究結(jié)果有顯著的改變作用。主要研究成果如下：1.利用透射式電子顯微鏡觀察蝌蚪消化道中腸的超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示,正常蝌蚪的中腸腸道的結(jié)構(gòu)分為粘膜層、粘膜下層、肌層和外膜四部分；粘膜層上皮主要以上皮吸收細(xì)胞為主,細(xì)胞表面有微絨毛,細(xì)胞間連接不是很緊密,細(xì)胞間隙較大且不規(guī)則,有少量的杯狀細(xì)胞分散在粘膜層上皮的吸收細(xì)胞之間；在吸收細(xì)胞內(nèi)可以觀察到大量整齊排列的線粒體、核糖體、盤旋折疊的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和少量的脂滴；肌層不發(fā)達(dá),可以清楚看到二層內(nèi)環(huán)肌和一層外縱肌。2.通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),當(dāng)將蝌蚪暴露于500 mg/L氯化鈉中,利用透射式電子顯微鏡觀察中腸超微結(jié)構(gòu)的發(fā)生改變。氯化鈉處理使得蝌蚪消化道中腸粘膜層上皮的吸收細(xì)胞體積縮小,細(xì)胞發(fā)生固縮；細(xì)胞質(zhì)內(nèi)線粒體和游離核糖體的數(shù)目明顯下降；脂滴數(shù)目顯著增加,且在脂滴附近出現(xiàn)過氧化物酶體。說明氯化鈉對(duì)綠蛙蝌蚪中腸細(xì)胞造成了明顯損傷,表明兩棲類對(duì)氯化鈉的耐受性很低。3.利用DNA的T-RFLP技術(shù)研究綠蛙蝌蚪消化道微生物群落的生物多樣性特征,結(jié)果顯示,用HindP1Ⅰ、HaeⅢ、AluⅠ和MspⅠ四種不同內(nèi)切酶處理16srDNA后,檢測(cè)到的T-RF的數(shù)目結(jié)果各不相同,不同的T-RF代表不同的菌落。不同的氯化鈉環(huán)境對(duì)綠蛙蝌蚪消化道微生物群落的生物多樣性的測(cè)試效果有明顯的影響。在不外加氯化鈉的對(duì)照組蝌蚪實(shí)驗(yàn)中,用內(nèi)切酶HaelII處理其DNA后,檢測(cè)出的T-RF數(shù)目最多,用內(nèi)切酶MspI處理其DNA后,檢測(cè)出的T-RF數(shù)目最少。在500mg/L的氯化鈉處理蝌蚪的組中,做同樣的DNA處理實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示MspI組檢測(cè)出的T-RF數(shù)目最多,AluI組檢測(cè)出的T-RF數(shù)目最少。說明T-RFLP的實(shí)驗(yàn)環(huán)境氯化鈉對(duì)綠蛙蝌蚪消化道微生物菌群多樣性的研究結(jié)果有明顯的差別和影響。4.進(jìn)一步研究還發(fā)現(xiàn)氯化鈉對(duì)綠蛙蝌蚪消化道微生物群落的組成及豐度的變化有明顯的影響。用HaeⅢ酶切處理后,氯化鈉組T-RF15的相對(duì)含量顯著減少；用HindP1Ⅰ酶切處理后,氯化鈉組T-RF92和T-RF117相對(duì)含量顯著下降；AluI酶切后,氯化鈉組T-RF53和T-RF97的相對(duì)含量顯著下降；MspI酶切后,氯化鈉組的T-RF97和T-RF117顯著下降,說明這些菌群均對(duì)氯化鈉比較敏感。HaelII酶切后,氯化鈉組T-RF293的相對(duì)含量顯著增加；AluI酶切后,氯化鈉組T-RF72相對(duì)含量顯著增加；MspI酶切后,氯化鈉組的T-RF90和T-RF71相對(duì)含量顯著增加,說明這些菌群均對(duì)氯化鈉比較耐受。除此之外,還有新增和消失的T-RF片段,說明氯化鈉能使蝌蚪消化道微生物群落的組成和豐度發(fā)生改變。5.利用藍(lán)白斑篩選技術(shù)研究了綠蛙蝌蚪消化道中微生物菌落的種類組成,結(jié)果顯示,蝌蚪消化道微生物菌群主要分屬于紫單胞菌屬(Paludibacter)、泥桿菌屬(Ilyobacter)、擬桿菌屬(Bacteroides)、梭桿菌屬(Fusobacterium)和希瓦氏菌屬(Shewanella)。而且發(fā)現(xiàn)氯化鈉對(duì)泥桿菌屬與紫單胞菌屬微生物的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用,但對(duì)梭桿菌屬和希瓦氏菌有促進(jìn)生長(zhǎng)的作用。上述結(jié)果表明,500 mg/L氯化鈉有助于蝌蚪腸道亞顯微結(jié)構(gòu)的觀察和微生物群落種類的檢測(cè),但發(fā)現(xiàn)早期綠蛙蝌蚪對(duì)氯化鈉十分敏感,具有一定的毒性作用。通過對(duì)綠蛙幼體蝌蚪消化道中腸超微結(jié)構(gòu)及其消化道微生物群落多樣性的特征進(jìn)行研究,為進(jìn)一步研究?jī)蓷惒煌l(fā)育時(shí)期的微生物多樣性特征研究及水生野生動(dòng)物保護(hù)提供實(shí)驗(yàn)參照和理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：陜西師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S917.4
【圖文】：

３．６．３利用Ｔ－ＲＦＬＰ技術(shù)分析得出氯化鋼處理前后綠蛙蝴抖消化道微生逡逑物牌ｎｄＰｌＩ酶切）逡逑群落組成如圖３－３所示，每個(gè)峰值（Ｔ－ＲＦ）至少代表一個(gè)微生物種或?qū)�。逡逑邐－？－ｆ邐．……．．．．…氣…．１＊邐．．．．．邐逡逑Ａ邋二邐邐Ｌ邐：邐Ｊ邐Ｊ邐邐＾邐’一邐Ｌ邐Ｉ邐邐逡逑＇Ｉ邐Ｉ邐：邐：邐；逡逑言埾邋邐�?zhēng)邐！……－鳥－叫邐１… …‘…十邐ｔ邐＾邐ｈｒ—逡逑ｇ邋巧邐；；：；：；；邐；撕．．逡逑Ｉ邋Ｉ邋邐邐；邐畝■Yj冿夬唐…ｆ——邐ｐ邐ｉ邐ｆ邐邐逡逑一邐ｐ邐？邐；邐７７邐？邐ｌｉ７邐；邐：邐？邐；邐ｔ逡逑Ｓ邐邐ｒ邐－－ｒ－馬？．說－）一邐１邐１邐于邐產(chǎn)邐ｒ邐逡逑扮．５邐；邐：邐＾邐：邐Ｉ邐；邐；邐；逡逑巧邋Ｉ邋邐；邐；邐馬！邋邐ｊ邐ｊ邋邐ｊ＿邐［邐［邐逡逑Ｉ

３．６．３利用Ｔ－ＲＦＬＰ技術(shù)分析得出氯化鋼處理前后綠蛙蝴抖消化道微生逡逑物牌ｎｄＰｌＩ酶切）逡逑群落組成如圖３－３所示，每個(gè)峰值（Ｔ－ＲＦ）至少代表一個(gè)微生物種或?qū)佟ｅ义线姡�？－ｆ邐．……．．．．…氣…．１＊邐．．．．．邐逡逑Ａ邋二邐邐Ｌ邐：邐Ｊ邐Ｊ邐邐＾邐’一邐Ｌ邐Ｉ邐邐逡逑＇Ｉ邐Ｉ邐：邐：邐；逡逑言埾邋邐�?zhēng)邐！……－鳥－叫邐１… …‘…十邐ｔ邐＾邐ｈｒ—逡逑ｇ邋巧邐；；：；：；；邐；撕．．逡逑Ｉ邋Ｉ邋邐邐；邐畝■Yj冿夬唐…ｆ——邐ｐ邐ｉ邐ｆ邐邐逡逑一邐ｐ邐？邐；邐７７邐？邐ｌｉ７邐；邐：邐？邐；邐ｔ逡逑Ｓ邐邐ｒ邐－－ｒ－馬？．說－）一邐１邐１邐于邐產(chǎn)邐ｒ邐逡逑扮．５邐；邐：邐＾邐：邐Ｉ邐；邐；邐；逡逑巧邋Ｉ邋邐；邐；邐馬！邋邐ｊ邐ｊ邋邐ｊ＿邐［邐［邐逡逑Ｉ

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 楊倩;蔣陽(yáng)月;王小軍;陳英文;沈樹寶;石利利;劉濟(jì)寧;;不同區(qū)域污水處理廠活性污泥中微生物菌落結(jié)構(gòu)分析[J];化工進(jìn)展;2014年12期

2 張小妹;岳秀萍;王國(guó)英;米靜;薄泓淼;;全程與短程缺氧反硝化降解苯酚的動(dòng)力學(xué)及菌群結(jié)構(gòu)對(duì)比[J];太原理工大學(xué)學(xué)報(bào);2015年06期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 李寶;溫度對(duì)A/O-MBR運(yùn)行效果及膜污染的研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2012年

2 劉亞君;生物除鐵除錳濾池工程調(diào)試及錳氧化菌的多樣性研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2012年

3 孫長(zhǎng)奇;小清河底泥微生物區(qū)系的研究[D];山東師范大學(xué);2015年

本文編號(hào)：2727686