【摘要】：綠蛙(Rana clamitans)屬兩棲綱(Amphibia)、無尾目(Anura)、蛙科(Ranidae1、蛙屬(Rana),是一種常見水棲動物,其胚胎和幼體發(fā)育均在水中進行,其原產(chǎn)地是美國,目前中國多個省份都有引進的綠蛙,且數(shù)量較多。本研究以綠蛙的蝌蚪組織為材料,采用透射電子顯微鏡和DNA末端限制性長度多態(tài)性(Terminal-restriction fragment length polymorphism, T-RFLP)等技術(shù),研究綠蛙幼體蝌蚪消化道中腸超微結(jié)構(gòu)及其消化道微生物群落多樣性的特征,并發(fā)現(xiàn)500 mg/L氯化鈉對綠蛙幼體消化道及其微生物群落特征的研究結(jié)果有顯著的改變作用。主要研究成果如下：1.利用透射式電子顯微鏡觀察蝌蚪消化道中腸的超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示,正常蝌蚪的中腸腸道的結(jié)構(gòu)分為粘膜層、粘膜下層、肌層和外膜四部分；粘膜層上皮主要以上皮吸收細胞為主,細胞表面有微絨毛,細胞間連接不是很緊密,細胞間隙較大且不規(guī)則,有少量的杯狀細胞分散在粘膜層上皮的吸收細胞之間；在吸收細胞內(nèi)可以觀察到大量整齊排列的線粒體、核糖體、盤旋折疊的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和少量的脂滴；肌層不發(fā)達,可以清楚看到二層內(nèi)環(huán)肌和一層外縱肌。2.通過實驗發(fā)現(xiàn),當將蝌蚪暴露于500 mg/L氯化鈉中,利用透射式電子顯微鏡觀察中腸超微結(jié)構(gòu)的發(fā)生改變。氯化鈉處理使得蝌蚪消化道中腸粘膜層上皮的吸收細胞體積縮小,細胞發(fā)生固縮；細胞質(zhì)內(nèi)線粒體和游離核糖體的數(shù)目明顯下降；脂滴數(shù)目顯著增加,且在脂滴附近出現(xiàn)過氧化物酶體。說明氯化鈉對綠蛙蝌蚪中腸細胞造成了明顯損傷,表明兩棲類對氯化鈉的耐受性很低。3.利用DNA的T-RFLP技術(shù)研究綠蛙蝌蚪消化道微生物群落的生物多樣性特征,結(jié)果顯示,用HindP1Ⅰ、HaeⅢ、AluⅠ和MspⅠ四種不同內(nèi)切酶處理16srDNA后,檢測到的T-RF的數(shù)目結(jié)果各不相同,不同的T-RF代表不同的菌落。不同的氯化鈉環(huán)境對綠蛙蝌蚪消化道微生物群落的生物多樣性的測試效果有明顯的影響。在不外加氯化鈉的對照組蝌蚪實驗中,用內(nèi)切酶HaelII處理其DNA后,檢測出的T-RF數(shù)目最多,用內(nèi)切酶MspI處理其DNA后,檢測出的T-RF數(shù)目最少。在500mg/L的氯化鈉處理蝌蚪的組中,做同樣的DNA處理實驗,結(jié)果顯示MspI組檢測出的T-RF數(shù)目最多,AluI組檢測出的T-RF數(shù)目最少。說明T-RFLP的實驗環(huán)境氯化鈉對綠蛙蝌蚪消化道微生物菌群多樣性的研究結(jié)果有明顯的差別和影響。4.進一步研究還發(fā)現(xiàn)氯化鈉對綠蛙蝌蚪消化道微生物群落的組成及豐度的變化有明顯的影響。用HaeⅢ酶切處理后,氯化鈉組T-RF15的相對含量顯著減少；用HindP1Ⅰ酶切處理后,氯化鈉組T-RF92和T-RF117相對含量顯著下降；AluI酶切后,氯化鈉組T-RF53和T-RF97的相對含量顯著下降；MspI酶切后,氯化鈉組的T-RF97和T-RF117顯著下降,說明這些菌群均對氯化鈉比較敏感。HaelII酶切后,氯化鈉組T-RF293的相對含量顯著增加；AluI酶切后,氯化鈉組T-RF72相對含量顯著增加；MspI酶切后,氯化鈉組的T-RF90和T-RF71相對含量顯著增加,說明這些菌群均對氯化鈉比較耐受。除此之外,還有新增和消失的T-RF片段,說明氯化鈉能使蝌蚪消化道微生物群落的組成和豐度發(fā)生改變。5.利用藍白斑篩選技術(shù)研究了綠蛙蝌蚪消化道中微生物菌落的種類組成,結(jié)果顯示,蝌蚪消化道微生物菌群主要分屬于紫單胞菌屬(Paludibacter)、泥桿菌屬(Ilyobacter)、擬桿菌屬(Bacteroides)、梭桿菌屬(Fusobacterium)和希瓦氏菌屬(Shewanella)。而且發(fā)現(xiàn)氯化鈉對泥桿菌屬與紫單胞菌屬微生物的生長有明顯的抑制作用,但對梭桿菌屬和希瓦氏菌有促進生長的作用。上述結(jié)果表明,500 mg/L氯化鈉有助于蝌蚪腸道亞顯微結(jié)構(gòu)的觀察和微生物群落種類的檢測,但發(fā)現(xiàn)早期綠蛙蝌蚪對氯化鈉十分敏感,具有一定的毒性作用。通過對綠蛙幼體蝌蚪消化道中腸超微結(jié)構(gòu)及其消化道微生物群落多樣性的特征進行研究,為進一步研究兩棲類不同發(fā)育時期的微生物多樣性特征研究及水生野生動物保護提供實驗參照和理論依據(jù)。
【學位授予單位】：陜西師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S917.4
【圖文】：

３．６．３利用Ｔ－ＲＦＬＰ技術(shù)分析得出氯化鋼處理前后綠蛙蝴抖消化道微生逡逑物牌ｎｄＰｌＩ酶切）逡逑群落組成如圖３－３所示，每個峰值（Ｔ－ＲＦ）至少代表一個微生物種或?qū)佟ｅ义线姡�？－ｆ邐．……．．．．…氣…．１＊邐．．．．．邐逡逑Ａ邋二邐邐Ｌ邐：邐Ｊ邐Ｊ邐邐＾邐’一邐Ｌ邐Ｉ邐邐逡逑＇Ｉ邐Ｉ邐：邐：邐；逡逑言埾邋邐爭邐！……－鳥－叫邐１… …‘…十邐ｔ邐＾邐ｈｒ—逡逑ｇ邋巧邐；；：；：；；邐；撕．．逡逑Ｉ邋Ｉ邋邐邐；邐畝■Yj冿夬唐…ｆ——邐ｐ邐ｉ邐ｆ邐邐逡逑一邐ｐ邐？邐；邐７７邐？邐ｌｉ７邐；邐：邐？邐；邐ｔ逡逑Ｓ邐邐ｒ邐－－ｒ－馬？．說－）一邐１邐１邐于邐產(chǎn)邐ｒ邐逡逑扮．５邐；邐：邐＾邐：邐Ｉ邐；邐；邐；逡逑巧邋Ｉ邋邐；邐；邐馬！邋邐ｊ邐ｊ邋邐ｊ＿邐［邐［邐逡逑Ｉ

３．６．３利用Ｔ－ＲＦＬＰ技術(shù)分析得出氯化鋼處理前后綠蛙蝴抖消化道微生逡逑物牌ｎｄＰｌＩ酶切）逡逑群落組成如圖３－３所示，每個峰值（Ｔ－ＲＦ）至少代表一個微生物種或?qū)�。逡逑邐－？－ｆ邐．……．．．．…氣…．１＊邐．．．．．邐逡逑Ａ邋二邐邐Ｌ邐：邐Ｊ邐Ｊ邐邐＾邐’一邐Ｌ邐Ｉ邐邐逡逑＇Ｉ邐Ｉ邐：邐：邐；逡逑言埾邋邐爭邐！……－鳥－叫邐１… …‘…十邐ｔ邐＾邐ｈｒ—逡逑ｇ邋巧邐；；：；：；；邐；撕．．逡逑Ｉ邋Ｉ邋邐邐；邐畝■Yj冿夬唐…ｆ——邐ｐ邐ｉ邐ｆ邐邐逡逑一邐ｐ邐？邐；邐７７邐？邐ｌｉ７邐；邐：邐？邐；邐ｔ逡逑Ｓ邐邐ｒ邐－－ｒ－馬？．說－）一邐１邐１邐于邐產(chǎn)邐ｒ邐逡逑扮．５邐；邐：邐＾邐：邐Ｉ邐；邐；邐；逡逑巧邋Ｉ邋邐；邐；邐馬！邋邐ｊ邐ｊ邋邐ｊ＿邐［邐［邐逡逑Ｉ

【共引文獻】

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本文編號：2727686