【摘要】：近年來,由于棲息環(huán)境的破壞、水源污染、微生物侵襲、疾病流行等因素,導致兩棲動物的種群數(shù)量呈逐年下降趨勢。已有研究表明,嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila, Ah)作為一種普遍存在于兩棲類中的條件性致病菌,可以引起蛙類出血性敗血病(俗稱“紅腿病”),是影響其生存能力和種群數(shù)量下降的一個重要因素。在微生物侵襲時,機體Toll樣受體(Toll-like receptors, TLRs)不僅可以識別病原相關分子模式(pathogen associated molecular pattern, PAMP)啟動固有免疫應答,而且能激活信號通路調控適應性免疫應答。本研究采用高通量測序獲得東北林蛙(R.dybowskii) TLR4、MyD88、IRAK4. TRAF6和NF-κB mRNA序列設計引物,通過熒光定量PCR技術分別檢測東北林蛙在易感微生物嗜水氣單胞菌脅迫下,其腎臟、心臟、肝臟TLR4信號通路中TLR4、MyD88、IRAK4、TRAF6和NF-κB mRNA表達水平的變化,以期揭示東北林蛙被細菌感染后體內TLR4信號通路中的相關分子的動態(tài)效應。主要研究結果如下：1、在嗜水氣單胞菌感染東北林蛙早期,其心臟、肝臟和腎臟中的TLR4 mRNA均在6h出現(xiàn)表達峰值。此時東北林蛙體內的TLR4 mRNA是初始量的4-7倍。2、MyD88、IRAK4、TRAF6和NF-κB mRNA在腎臟、心臟和肝臟中的達到峰值的順序依次是腎臟、肝臟、心臟,表明在嗜水氣單胞菌感染東北林蛙后,腎臟中的TLR4信號通路被最先激活。3. TLR4、MyD88和IRAK4 mRNA在腎臟中的高峰表達變化量也明顯高于心臟和肝臟,表明腎臟在嗜水氣單胞菌脅迫東北林蛙觸發(fā)的先天免疫中發(fā)揮主要作用。4、與TLR4、MyD88、IRAK4、TRAF6相比,心臟、肝臟和腎臟NF-κB mRNA達到峰值時的表達量變化最為明顯,尤其是心臟和腎臟中,NF-κB mRNA的高峰表達變化量遠遠高于其他基因,表明NF-κB作為轉錄因子被激活后在體內大量表達,在TLR4信號通路連接天然免疫和適應性免疫時發(fā)揮主要作用,且參與機體的適應性免疫應答反應。在對抗嗜水單胞菌的后期防御機制中,心臟和腎臟發(fā)揮主要作用。5、結果表明嗜水氣單胞菌激活了東北林蛙腎臟、心臟和肝臟的TLR4信號通路并誘發(fā)了通路中MyD88、IRAK4、TRAF6和NF-κB mRNA的表達,使其參與東北林蛙機體的早期免疫應答并發(fā)揮作用。TLR4首先被激活并快速表達,TLR4的高表達激活了MyD88基因使之表達量增加,進而激活了IRAK4和TRAF6基因,最后由轉錄因子NF-κB發(fā)揮效應,表明TLR4信號通路在蛙類的抗細菌感染中發(fā)揮了重要作用。本研究探討了微生物侵襲時東北林蛙TLR4信號的調控機制,為認識兩棲類機體的先天免疫系統(tǒng)以及保護兩棲類的種群數(shù)量和多樣性提供了重要的理論基礎。
【學位授予單位】：東北林業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S947.2
【圖文】：

之后，位于細胞膜上的髓樣分化蛋白－２邋（ｍｙｅｌｏｉｄ化ｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｐｒｏ化ｉｎ－２，ＭＤ－２）與逡逑ＴＬＲ４作用形成復合體來完成對ＬＰＳ的識別。在胞外信號轉導過程中，ＣＤＵ、ＴＬＲ４與逡逑ＭＤ－２形成高親和力的＂ＬＰＳ識別受體復合物＂，完成胞外向胞內的傳遞（圖１－１）。逡逑Ｌb6Ｓ逡逑ＬＢＰ邋廣邋ｒ逡逑娍，．’Ｗ／勵逡逑：．３邐＼；逡逑ｒｉＲＡｐｆ］＾邋Ｉ邋�。埽颍幔礤义稀觯椋椋椤停殄义希停模福稿澹檫姡礤义线姡檫婂义蠄D１－１邋ＴＬ艮４信號途徑細胞外信號轉導ｔ６２ｌ逡逑Ｆｉｇ．邋１－１邋Ｔｈｅ邋ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ邋ｓｉｇｎａｌ邋ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ邋ｉｎ邋ＴＬＲ４邋ｓｉｇｎａｌｉｎｇ邋ｐａｔｈｗａｙ【６２Ｊ逡逑１．４．３．２細胞內的信號轉導部分逡逑化Ｒ４對ＬＰＳ識R%的胞內信號途徑因不同的接頭分子ＭｙＤ８８和１民１？［１0１１－１－１－逡逑ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ邋（ＴＩＲ）邋ｄｏｍａｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ邋ａｄａｐｔｏｒ－ｉｎｄｕｃｉｎｇ邋ＩＦＮ－ｂｅｔａ］分為邋ＭｙＤ８８邋依賴的ｆ旨號通逡逑路和ＭｙＤ８８非依賴的信號通路［６３］。其中ＭｙＤ８８蛋白由死亡結構域（ｄｅａ化ｄｏｍａｉｎ，逡逑ＤＤ）、ＴＩＲ邋（Ｔｏｌｌ／止－１民）結構域和…個短片段姐成；ＴＲＩＰ信號分子是第三個波鑒定出逡逑來的含有ＴＩ民結構域的蛋白，在ＭｙＤ８８非依賴途徑中主要通過ＴＲＩＰ相關接頭蛋白分逡逑子（ＴＲＡＭ）來募集ＴＲＩＦ。在ＴＬ艮４的胞內信號轉導途徑中

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本文編號：2725764