【摘要】：近年來(lái),由于棲息環(huán)境的破壞、水源污染、微生物侵襲、疾病流行等因素,導(dǎo)致兩棲動(dòng)物的種群數(shù)量呈逐年下降趨勢(shì)。已有研究表明,嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila, Ah)作為一種普遍存在于兩棲類(lèi)中的條件性致病菌,可以引起蛙類(lèi)出血性敗血病(俗稱(chēng)“紅腿病”),是影響其生存能力和種群數(shù)量下降的一個(gè)重要因素。在微生物侵襲時(shí),機(jī)體Toll樣受體(Toll-like receptors, TLRs)不僅可以識(shí)別病原相關(guān)分子模式(pathogen associated molecular pattern, PAMP)啟動(dòng)固有免疫應(yīng)答,而且能激活信號(hào)通路調(diào)控適應(yīng)性免疫應(yīng)答。本研究采用高通量測(cè)序獲得東北林蛙(R.dybowskii) TLR4、MyD88、IRAK4. TRAF6和NF-κB mRNA序列設(shè)計(jì)引物,通過(guò)熒光定量PCR技術(shù)分別檢測(cè)東北林蛙在易感微生物嗜水氣單胞菌脅迫下,其腎臟、心臟、肝臟TLR4信號(hào)通路中TLR4、MyD88、IRAK4、TRAF6和NF-κB mRNA表達(dá)水平的變化,以期揭示東北林蛙被細(xì)菌感染后體內(nèi)TLR4信號(hào)通路中的相關(guān)分子的動(dòng)態(tài)效應(yīng)。主要研究結(jié)果如下：1、在嗜水氣單胞菌感染東北林蛙早期,其心臟、肝臟和腎臟中的TLR4 mRNA均在6h出現(xiàn)表達(dá)峰值。此時(shí)東北林蛙體內(nèi)的TLR4 mRNA是初始量的4-7倍。2、MyD88、IRAK4、TRAF6和NF-κB mRNA在腎臟、心臟和肝臟中的達(dá)到峰值的順序依次是腎臟、肝臟、心臟,表明在嗜水氣單胞菌感染東北林蛙后,腎臟中的TLR4信號(hào)通路被最先激活。3. TLR4、MyD88和IRAK4 mRNA在腎臟中的高峰表達(dá)變化量也明顯高于心臟和肝臟,表明腎臟在嗜水氣單胞菌脅迫東北林蛙觸發(fā)的先天免疫中發(fā)揮主要作用。4、與TLR4、MyD88、IRAK4、TRAF6相比,心臟、肝臟和腎臟NF-κB mRNA達(dá)到峰值時(shí)的表達(dá)量變化最為明顯,尤其是心臟和腎臟中,NF-κB mRNA的高峰表達(dá)變化量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他基因,表明NF-κB作為轉(zhuǎn)錄因子被激活后在體內(nèi)大量表達(dá),在TLR4信號(hào)通路連接天然免疫和適應(yīng)性免疫時(shí)發(fā)揮主要作用,且參與機(jī)體的適應(yīng)性免疫應(yīng)答反應(yīng)。在對(duì)抗嗜水單胞菌的后期防御機(jī)制中,心臟和腎臟發(fā)揮主要作用。5、結(jié)果表明嗜水氣單胞菌激活了東北林蛙腎臟、心臟和肝臟的TLR4信號(hào)通路并誘發(fā)了通路中MyD88、IRAK4、TRAF6和NF-κB mRNA的表達(dá),使其參與東北林蛙機(jī)體的早期免疫應(yīng)答并發(fā)揮作用。TLR4首先被激活并快速表達(dá),TLR4的高表達(dá)激活了MyD88基因使之表達(dá)量增加,進(jìn)而激活了IRAK4和TRAF6基因,最后由轉(zhuǎn)錄因子NF-κB發(fā)揮效應(yīng),表明TLR4信號(hào)通路在蛙類(lèi)的抗細(xì)菌感染中發(fā)揮了重要作用。本研究探討了微生物侵襲時(shí)東北林蛙TLR4信號(hào)的調(diào)控機(jī)制,為認(rèn)識(shí)兩棲類(lèi)機(jī)體的先天免疫系統(tǒng)以及保護(hù)兩棲類(lèi)的種群數(shù)量和多樣性提供了重要的理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S947.2
【圖文】：

之后，位于細(xì)胞膜上的髓樣分化蛋白－２邋（ｍｙｅｌｏｉｄ化ｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｐｒｏ化ｉｎ－２，ＭＤ－２）與逡逑ＴＬＲ４作用形成復(fù)合體來(lái)完成對(duì)ＬＰＳ的識(shí)別。在胞外信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中，ＣＤＵ、ＴＬＲ４與逡逑ＭＤ－２形成高親和力的＂ＬＰＳ識(shí)別受體復(fù)合物＂，完成胞外向胞內(nèi)的傳遞（圖１－１）。逡逑Ｌb6Ｓ逡逑ＬＢＰ邋廣邋ｒ逡逑娍，．’Ｗ／勵(lì)逡逑：．３邐＼；逡逑ｒｉＲＡｐｆ］＾邋Ｉ邋�。埽颍幔礤义稀觯椋椋椤停殄义希停模福稿澹檫姡礤义线姡檫婂义蠄D１－１邋ＴＬ艮４信號(hào)途徑細(xì)胞外信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)ｔ６２ｌ逡逑Ｆｉｇ．邋１－１邋Ｔｈｅ邋ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ邋ｓｉｇｎａｌ邋ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ邋ｉｎ邋ＴＬＲ４邋ｓｉｇｎａｌｉｎｇ邋ｐａｔｈｗａｙ【６２Ｊ逡逑１．４．３．２細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)部分逡逑化Ｒ４對(duì)ＬＰＳ識(shí)R%的胞內(nèi)信號(hào)途徑因不同的接頭分子ＭｙＤ８８和１民１？［１0１１－１－１－逡逑ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ邋（ＴＩＲ）邋ｄｏｍａｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ邋ａｄａｐｔｏｒ－ｉｎｄｕｃｉｎｇ邋ＩＦＮ－ｂｅｔａ］分為邋ＭｙＤ８８邋依賴(lài)的ｆ旨號(hào)通逡逑路和ＭｙＤ８８非依賴(lài)的信號(hào)通路［６３］。其中ＭｙＤ８８蛋白由死亡結(jié)構(gòu)域（ｄｅａ化ｄｏｍａｉｎ，逡逑ＤＤ）、ＴＩＲ邋（Ｔｏｌｌ／止－１民）結(jié)構(gòu)域和…個(gè)短片段姐成；ＴＲＩＰ信號(hào)分子是第三個(gè)波鑒定出逡逑來(lái)的含有ＴＩ民結(jié)構(gòu)域的蛋白，在ＭｙＤ８８非依賴(lài)途徑中主要通過(guò)ＴＲＩＰ相關(guān)接頭蛋白分逡逑子（ＴＲＡＭ）來(lái)募集ＴＲＩＦ。在ＴＬ艮４的胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中

Ｍ：邋ＤＮＡ邋Ｍａｒｋｅｒ邋５０邋ｂｐ邋ＤＮＡ邋Ｌａｄｄｅｒ，邋ＫＭｙＤ８８，１４２ｂｐ；邋２．Ｔ民ＡＦ６，邋１２７ｂｐ；邋３．ｐ－ａｃｔｉｎ，邋１７６ｂｐ。４．ＴＬＲ４，邋１７３ｂｐ；邐５．逡逑ＮＦ－ｋＢ，Ｉ４８ｂｐ；邋６．ＩＲＡＫ４，１２８ｂｐ。逡逑圖３－２艮Ｔ－ＰＣ民擴(kuò)增結(jié)果逡逑Ｆｉｇ．３－２邋艮巧ｕｌｔｓ邋ｏｆ邋民Ｔ－ＰＣ民逡逑３．４內(nèi)參基因逡逑內(nèi)參基因ｐ－ａｃｔｉｎ和ＧＡＰＤＨ的ＰＣ民擴(kuò)X棽锏纈窘峁繽跡常乘荊蟊擼程跤懼義系牢ǎ常幔悖簦椋釤醮�，右睌]忍跤鏡牢牽粒校模忍醮�，从咒\杉ǎ常幔悖簦椋釤醮齲牽粒校模忍蹂義洗髁燎邐�，而苛ＰＤＵJ(rèn)嘍越舷�，钡a髟詿舜問(wèn)笛櫓�，７w幔悖簦椋畋齲牽粒校模缺澩鋦儒義隙�、睗惋翍┎更丰富，因达晻疋定量ＰＣ民实验选择Ｐ－ａｃｔｉｂO誆位頡ｅ義锨桑盒�？？？逦３褭褭褭阉血邋Ｗ逦菓亓x下《琳冀蛹骸鰣危懾義咸恚麇澹叔義希椋齲椋椋椋椋恚齲椋殄義賢跡常襯誆位潁穡幔悖簦椋詈停牽粒校模鵲模校茫依┰霾锏纈就煎義希疲椋紓常沖迕瘢澹螅酰歟簦簀澹錚駑澹穡幔悖簦椋鑠澹幔睿溴澹牽粒校模儒澹校妹皴澹幔恚穡歟椋媯椋悖幔簦椋錚鑠義希常抵怨舛浚校茫彝嘶鷂露扔嘔峁義賢ü裕硤荻齲校敏薹ㄔ冢擔(dān)啊�？６�

本文編號(hào)：2725764