【摘要】：牙鲆是我國北方重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟魚類,針對近年來種質(zhì)退化的趨勢,多種育種方法成功地應(yīng)用到其育種中,但這些育種方法耗時長、過程繁瑣,因此拓展新的牙鲆育種方法是非常重要的。利用原始生殖細胞(PGCs)發(fā)展新的育種手段,例如借腹生子、轉(zhuǎn)基因魚、冷凍保存等是近年來發(fā)展的趨勢。標(biāo)記PGCs是利用PGCs的前提,而PGCs標(biāo)志基因的獲得是關(guān)鍵。我們獲得了PGCs標(biāo)記基因之一:牙鲆nanos3,通過RT-PCR和原位雜交的方法分析其在牙鲆胚胎發(fā)育過程中的表達圖式。結(jié)果表明,牙鲆nanos3在胚胎發(fā)育的整個過程中均有表達;并且具有PGCs特異性。因此nanos3作為牙鲆PGCs的標(biāo)記基因是可靠的。根據(jù)牙鲆胚胎發(fā)育過程中nanos3的表達圖式我們構(gòu)建了PGCs的遷移模式,牙鲆PGCs的遷移過程與其他硬骨魚類類似,但在15體節(jié)期體軸兩側(cè)的PGCs開始向體軸聚合,并形成比較松散的結(jié)構(gòu),然后整體向胚體后部遷移,在心跳期,PGCs再次分開為兩個對稱的緊密的聚合體,自此這兩個對稱聚合體向尾側(cè)遷移直至生殖嵴。這種遷移模式與現(xiàn)在報道的PGCs遷移模式均不同,是一種新型的遷移模式。我們獲得牙鲆nanos3 3’UTR,構(gòu)建了驅(qū)動GFP表達的載體GFP-ypnanos33’UTR,通過顯微注射該載體的RNA到斑馬魚受精卵中,研究其對于PGCs的標(biāo)記功能。結(jié)果表明,牙鲆nanos3 3’UTR可以最早在8體節(jié)期將斑馬魚PGCs標(biāo)記出來,因此牙鲆nanos3 3’UTR可以對斑馬魚PGCs進行活體標(biāo)記。對牙鲆nanos3 3’UTR序列進行分析,我們預(yù)測到3個miR-430結(jié)合的GCAC位點,以及Dnd蛋白結(jié)合的U-rich區(qū)域。通過對不同長度牙鲆nanos3 3’UTR的PGCs特異調(diào)控效率的分析,我們找到了67bp(38-105bp)的調(diào)控片段,并驗證了GCAC1和GCAC2可能是miR430的結(jié)合位點,U-rich區(qū)域1可能是Dnd蛋白的結(jié)合位點。獲得牙鲆sdf1、cxcr4基因,通過原位雜交的方法研究在胚胎發(fā)育過程中的表達,同PGCs在胚胎發(fā)育過程中的遷移路線進行對比分析,我們認為sdf1、cxcr4在體節(jié)發(fā)生的早期對于PGCs的遷移有引導(dǎo)作用,尤其是對于15體節(jié)時PGCs軸向遷移到胚體中軸線上具有非常重要的作用。
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)院研究生院(海洋研究所)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S917.4
【圖文】：

圖 1.1 PGCs 的發(fā)生發(fā)育Figure 1.1 The occurrence and development of PGCs原始生殖細胞的標(biāo)記基因

是定位于生殖質(zhì)中，對 PGCs 的遷移以及存活有重要的作用。s 遷移有關(guān)的因子，表達于 PGCs 的細胞膜上，其與間充質(zhì)細胞sdf1 因子相互作用，引導(dǎo) PGCs 能夠向著生殖嵴的方向正確遷移原始生殖細胞的形成發(fā)育的早期，生殖細胞就與體細胞出現(xiàn)分離。根據(jù)對不同物種的分析，學(xué)者們認為生物界中生殖細胞的生成存在兩種模式（圖成論（Cassandra et al.，2003）。先成論認為 PGCs 在胚胎發(fā)育的形成是由母源遺傳物質(zhì)生殖質(zhì)決定的，果蠅、線蟲、爪蟾、等屬于先成論模式（Hui-Ru et al.，2011）。后成論認為 PGCs 由其它細胞誘導(dǎo)而成的，小鼠、雞屬于后成論模式。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 許莉佳;張薪;伍莎;靳濤;Oscar Ortegón;葉勤;李云;;魚類生殖細胞移植的研究進展[J];生命科學(xué);2012年03期

本文編號：2721614