【摘要】：斜帶石斑魚(Epinephelus coioides)是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)具高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的海洋魚類,其雌雄同體雌性先熟,具有天然性逆轉(zhuǎn)的現(xiàn)象,是研究性腺分化、性別決定及魚類生殖調(diào)控的優(yōu)秀模型。Dmrt(Double sex/Male-abnormal-3 Related Transcription factor)基因是性別決定和性別分化過程中的主要轉(zhuǎn)錄因子,研究發(fā)現(xiàn),Dmrt家族成員主要與動(dòng)物的生殖發(fā)育和器官發(fā)育密切相關(guān),而dmrt1基因是Dmrt家族的主要關(guān)注對(duì)象,在不同物種中都有研究。本實(shí)驗(yàn)利用原位雜交和免疫組化技術(shù),對(duì)斜帶石斑魚性腺dmrt1分子水平和蛋白水平的表達(dá)進(jìn)行初步研究,并利用RT-qPCR技術(shù),分析斜帶石斑魚4個(gè)dmrt基因(Ecdmrt1、Ecdmrt2、Ecdmrt2b和Ecdmrt3)在胚胎發(fā)育過程中及性腺發(fā)育各階段的表達(dá)情況,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:斜帶石斑魚dmrt基因在胚胎發(fā)育初期開始表達(dá),Ecdmrt1基因在胚胎發(fā)育囊胚期表達(dá)量最高,分裂期及初孵仔魚表達(dá)量最低,囊胚期Ecdmrt1的表達(dá)是分裂期的5.4倍;Ecdmrt2基因在胚胎發(fā)育前期低表達(dá)且平穩(wěn),神經(jīng)胚期呈上升趨勢(shì)(p0.05),且表達(dá)量顯著增加(p0.05),為分裂期的9.2倍,初孵仔魚表達(dá)量最高,為分裂期是17.6倍;Ecdmrt2b基因表達(dá)量在整個(gè)胚胎發(fā)育過程中呈先上升后下降趨勢(shì),器官形成期達(dá)到峰值(p0.05);Ecdmrt3基因表達(dá)趨勢(shì)同Ecdmrt2基因,呈上升趨勢(shì),在器官形成期時(shí)上升(p0.05),初孵仔魚表達(dá)量最大(p0.05)。斜帶石斑魚自然發(fā)育性腺各階段中,4種dmrt基因在各階段都有表達(dá),Ecdmrt1基因在兼性性腺中表達(dá)量最高,卵巢Ⅰ期表達(dá)量最低;Ecdmrt2基因在卵巢Ⅱ時(shí)表達(dá)量最高;Ecdmrt2b基因在兼性性腺中表達(dá)量最高,其次為卵巢Ⅱ期;Ecdmrt3基因表達(dá)模式與Ecdmrt2b相似,在兼性性腺中表達(dá)量最高,其次為卵巢Ⅱ期。原位雜交結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ecdmrt1在精巢中高表達(dá),且主要表達(dá)于精母細(xì)胞周圍,精子及卵巢中未發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性信號(hào);免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn),Ecdmrt1蛋白主要表達(dá)于斜帶石斑魚精巢中,分布于精母細(xì)胞周圍,卵巢及對(duì)照組未發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性信號(hào)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),Ecdmrt1不僅僅與雄性性腺的發(fā)育密切相關(guān),也可能參與卵巢的發(fā)育過程;dmrt基因?qū)π睅唪~性腺發(fā)育有重要作用,并參與胚胎的組織器官發(fā)育及仔魚發(fā)育生長(zhǎng)。
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S917.4
【圖文】：

分別為Ⅰ期卵巢、Ⅱ期卵巢、Ⅲ期卵巢、兼性性腺及精巢。性腺發(fā)育分期參照趙會(huì)宏等（2003）和Chen等（2011）劃分。Ⅰ期斜帶石斑魚性腺呈透明絲狀，細(xì)胞幾乎大部分為卵原細(xì)胞（圖3-1）；Ⅱ期卵巢呈淡黃色，圓柱狀，卵巢中細(xì)胞大部分為第II時(shí)相卵母細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)含量較多，細(xì)胞核呈卵圓形（圖3-2）；Ⅲ期卵巢的卵粒肉眼可見，卵巢中細(xì)胞大部分為Ⅲ時(shí)相卵母細(xì)胞，細(xì)胞變大，胞質(zhì)中出現(xiàn)脂肪粒及卵黃顆粒，卵膜外出現(xiàn)濾泡細(xì)胞膜（圖3-3）；斜帶石斑魚兼性性腺切片可以觀察到初級(jí)卵母細(xì)胞、性原細(xì)胞和初級(jí)精母細(xì)胞（圖3-4）；斜帶石斑魚精巢切片中，大部分細(xì)胞為性原細(xì)胞、精母細(xì)胞及精細(xì)胞，雄性特征明顯（圖3-5）。圖3 斜帶石斑魚性腺切片注：1：卵巢Ⅰ期；2：卵巢Ⅱ期；3：卵巢Ⅲ期；4：兼性性腺；5：精巢G：性原細(xì)胞；PSc：初級(jí)精母細(xì)胞；SSc：次級(jí)精母細(xì)胞；Sg：精原細(xì)胞；St：精細(xì)胞；O1：第Ⅰ時(shí)相卵母細(xì)胞；O2：第Ⅱ時(shí)相卵母細(xì)胞；O3：第Ⅲ時(shí)相卵母細(xì)胞。

35圖6-1 斜帶石斑魚dmrt1原位雜交結(jié)果注：T1為斜帶石斑魚精巢反義探針，T2為斜帶石斑魚精巢正義探針；O1為卵巢反義探針，O2為斜帶石斑魚精巢正義探針；PSc：初級(jí)精母細(xì)胞；SSc：次級(jí)精母細(xì)胞；Sg：精原細(xì)胞；St：精細(xì)胞。圖6-2 斜帶石斑魚dmrt1免疫組化結(jié)果圖注：T3為實(shí)驗(yàn)組精巢，T4為對(duì)照組精巢；O3為實(shí)驗(yàn)組卵巢，O4為對(duì)照組卵巢；SSc：次級(jí)精母細(xì)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2717287