【摘要】：胰島素樣生長因子(Insulin-like growth factor,IGF)是由肝臟分泌的一種肽類激素,可促進細胞的分化和有絲分裂,對動物生長具有非常重要的作用。影響IGF合成和分泌的因素有很多,在哺乳動物,雌二醇(E2)也可以通過雌激素受體(Estrogen Receptors,ERs)調(diào)節(jié)IGF的合成與分泌。本研究克隆了兩種包含ORF的金錢魚IGF基因c DNA序列((IGF-1和IGF-2);采用RT-PCR方法檢測了IGFs在11種組織(垂體、胃、下丘腦、性腺、腎臟、肝臟、腸、脾、鰓、心和肌肉)中的表達;應用熒光定量PCR檢測了金錢魚胚胎9個不同發(fā)育階段(4細胞期、囊胚期、原腸胚期、神經(jīng)胚期、眼囊形成期、尾牙期、晶體形成期和肌肉效應期),以及性腺不同發(fā)育時期(II期、II期和IV期)IGFs的表達水平,檢測了注射雌二醇(E2,4ug/g體重)對垂體GH、肝臟IGFs、ERs和GHRs mRNA表達的影響,以及E2、廣譜型雌激素受體拮抗劑(Fulvestrent)、α型雌激素受體拮抗劑(MPP)、β型雌激素受體拮抗劑(PHTPP)離體(0.1、1和10μM)孵育對肝臟IGFs、ERs和GHRs mRNA表達的影響。主要結(jié)果如下:1、金錢魚IGF基因克隆及序列分析克隆獲得金錢魚兩種IGF亞型,其中IGF-1的開放閱讀框(Open reading frame,ORF)為561bp,編碼個186氨基酸,包含15個結(jié)合蛋白結(jié)合位點、四個poly核酸結(jié)合位點、一個信號肽區(qū)域和一個家族活性肽區(qū)域;IGF-2的ORF為648bp,編碼215個氨基酸,包含14個結(jié)合蛋白結(jié)合位點、五個poly核酸結(jié)合位點、一個信號肽區(qū)域和一個家族活性肽區(qū)域。兩種IGF氨基酸序列同源性比對表明,金錢魚IGF具有較高的保守性。進化樹分析發(fā)現(xiàn),金錢魚IGF-1和IGF-2與鱸形目中花鱸(Lateolabrax maculatus)的親緣關(guān)系最近,分別達95%和91%。2、金錢魚類IGF基因的時空表達在所檢測的11種組織中,IGF-1 mRNA在雌、雄金錢魚肝臟中高表達,而IGF-2mRNA在雌、雄金錢魚所有組織中均有表達;在胚胎發(fā)育各個發(fā)育階段均能檢測到IGF-1 mRNA表達,且隨胚胎發(fā)育表達水平持續(xù)上升,而IGF-2mRNA在受精后至囊胚期表達極低,原腸胚和神經(jīng)胚期表達上調(diào),眼囊形成期表達開始下調(diào)。雌、雄魚肝臟中IGF-1表達隨性腺成熟逐漸升高,而IGF-2mRNA的表達呈相反趨勢。3、腹腔注射E2對金錢魚GH/IGF mRNA表達的影響腹腔注射4ug/g體重E2 6h后,雌性金錢魚垂體GH mRNA的表達顯著上調(diào),但對雄魚GH mRNA的表達無顯著影響;雌魚IGF-1mRNA顯著上調(diào),而IGF-2mRNA顯著下調(diào),雄魚肝臟中IGFs mRNA均顯著上調(diào)。4、E2離體孵育對肝臟IGFs、ERs和GHRs mRNA表達的影響不同劑量的(0.1、1和10μM)E2離體孵育金錢魚肝臟碎片6 h,發(fā)現(xiàn)E2以明顯劑量依存效應顯著促進雌魚IGF-1和ERα,抑制IGF-2和ERβ1 mRNA的表達,而對ERβ2和GHRs mRNA的表達無顯著影響;在雄魚,E2以明顯劑量依存效應顯著促進IGFs,ERα,抑制ERβ1 mRNA的表達,但對ERβ2和GHRs mRNA無顯著影響。5、雌激素受體拮抗劑離體孵育對肝臟IGFs、ERs和GHRs mRNA表達的影響廣譜型雌激素受體拮抗劑Fulvestrent能明顯抑制雌、雄魚肝臟中IGFs和ERs mRNA的表達(P0.05),對GHRs無顯著作用。α型雌激素受體拮抗劑MPP顯著抑制雌魚肝臟中IGF-1和ERα、促進IGF-2和ERβ1 mRNA的表達(P0.05),抑制雄魚IGFs和ERα、促進ERβ1 mRNA的表達。β型雌激素受體拮抗劑PHTPP抑制雌魚肝臟中IGFs和ERβ,促進ERαmRNA的表達,但促進雄魚IGF-2和ERαmRNA的表達,抑制IGF-1和ERβmRNA的表達。結(jié)果表明,IGF-1、IGF-2在金錢魚生長、胚胎發(fā)育及性腺發(fā)育中發(fā)揮重要作用。E2可通過GH/IGF軸調(diào)控IGF的表達,也可通過ER調(diào)控IGF的表達。此外,E2對雌、雄魚IGF-1的調(diào)控作用通過ERα和ERβ共同介導,而E2對雌、雄魚IGF-2的調(diào)控通過不同通路,雌魚通過ERβ1介導,而雄魚通過ERα介導。
【圖文】：

廣東海洋大學碩士學位論文圖 1-1 GH/IGF 信號通路[48]Fig. 1-1 Intracellular signaling pathways of GH/IGF.

Fig. 1-1 Intracellular signaling pathways of GH/IGF.圖 1-2 雌激素受體胞內(nèi)作用信號通路[49]. 1-2 Intracellular signaling pathways of estrogen receptors a
【學位授予單位】：廣東海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S917.4

【參考文獻】

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本文編號：2700617