【摘要】：為了探明海水酸化對菲律賓蛤仔(Ruditapes philippinarum)(簡稱蛤仔)性腺發(fā)育的影響及機制,在水溫9~23℃的室內(nèi)循環(huán)水系統(tǒng)中,以pH 8.0的天然海水為對照,用向系統(tǒng)充二氧化碳的方法,定期取樣,研究了不同酸化強度(pH 7.4和7.7)對兩種養(yǎng)殖方式(埋棲M和吊養(yǎng)D)的菲律賓蛤仔親本促熟期間(為期94天)的性腺發(fā)育、性腺中雌二醇(E2)、睪酮(T)和卵黃蛋白原含量(VTG)的影響,以及對基因17β-羥類固醇脫氫酶8(17β-hydroxysteroid dehydrogenase 8,簡稱17β-HSD8)和基因17β-羥類固醇脫氫酶12(17β-hydroxysteroid dehydrogenase 12,簡稱17β-HSD12)表達的影響。結(jié)果如下:1、海水酸化對親貝促熟效果的影響親貝促熟和酸化從2017年5月11日(t=9℃)開始,以每2~3天0.5℃的速度逐漸升溫至20℃,其后穩(wěn)定維持在20℃,后期約1周升至23℃。實驗持續(xù)94天,至8月12號結(jié)束。期間鹽度為32、DO豐富,前期投喂小球藻、等邊金藻和角毛藻混合(1:1:2)的濃縮餌料,后期投喂螺旋藻。結(jié)果表明,在pH 7.93±0.04(對照)、7.68±0.05和7.43±0.06條件下,以吊養(yǎng)(記為7.4D、7.7D和8.0D)和埋棲(記為7.4M、7.7M和8.0M)兩種生活方式促熟親貝94天,均有蛤仔性腺發(fā)育至成熟期,并且雄性的性腺發(fā)育速度較雌性快。2、海水酸化對蛤仔性腺發(fā)育的影響促熟期間分別于6月10號(酸化31天)、7月10號(酸化61天)和8月12號(酸化94天)取樣,進行組織切片,觀察性腺發(fā)育情況。結(jié)果表明,至實驗結(jié)束時,全部雄性實驗組和對照組均100%發(fā)育至成熟期,但7.4組的精子數(shù)量較少,染色較淺;綜合7月10日和8月12日的結(jié)果,雌性吊養(yǎng)7.4D、7.7D和8.0D組性腺發(fā)育至成熟期的比例分別是9.52%、50%和29.2%,雌性埋棲7.4M、7.7M和8.0M組發(fā)育至成熟期的比例分別是24%、31.8%和42.1%;酸化組(pH7.7和pH7.4)雌性蛤仔總體發(fā)育至成熟期的速度較對照組(pH8.0)慢;在相同pH條件下,埋棲養(yǎng)殖的蛤仔性腺發(fā)育要比吊養(yǎng)養(yǎng)殖的速度快。3、海水酸化對蛤仔性腺E2、T和VTG的影響于酸化61天(7月10日)時取樣測定了蛤仔精卵巢中的E2、T和VTG。1)對E2含量的影響隨著促熟時間的增長,精卵巢中E2的含量逐漸增加并且差異顯著(P0.05),說明E2在蛤仔性腺發(fā)育過程中具有重要作用。酸化至61天,吊養(yǎng)7.4D、7.7D和8.0D組卵巢中的E2水平分別為2079.79±149.2、2127.29±391.6和1946.78±344.8pg/g,吊養(yǎng)組精巢中E2水平依次為2207.68±91.1、2156.56±123.3和1901.62±115.4 pg/g;埋棲7.4M、7.7M和8.0M組卵巢中的E2水平依次為2117.92±385.7、1952.86±241.4和2059.43±198.9 pg/g,埋棲精巢中E2水平依次為2528.95±589.2、2289.06±495.5和2154.80±165.8 pg/g。各種條件下E2含量均為雄性雌性,但差異不顯著(P0.05);經(jīng)酸化脅迫的雌性和雄性實驗組的E2含量大于對照組,說明酸化脅迫使E2含量增加,但差異不顯著(P0.05);埋棲組雌二醇含量高于吊養(yǎng)組,但差異不顯著(P0.05)。2)對T含量的影響隨著促熟時間的延長,蛤仔精卵巢中T的含量顯著增加(P0.05),說明T在蛤仔性腺發(fā)育過程中具有重要作用。酸化61天,吊養(yǎng)7.4D、7.7D和8.0D組卵巢中的T的平均值依次為5036.12±389.1、4800.89±350.9和5248.18±142.0 pg/g,精巢中的T平均值依次為4765.55±501.9、5273.78±579.0和5073.90±605.8 pg/g;埋棲7.4M、7.7M和8.0M組卵巢中T水平依次為5791.76±682.4、5613.81±910.2、5557.75±520.1 pg/g,埋棲組精巢中T的平均值依次為4661.95±136.2、4419.41±217.0、4363.35±128.1 pg/g。各酸化組的T含量均小于對照組,且吊養(yǎng)7.4D和7.7D組卵巢中T含量顯著低于8.0D(P0.05),埋棲酸化組則與對照組差異不顯著(P0.05),說明酸化脅迫使T含量降低。各種條件下的T含量均為雌性大于雄性,其中吊養(yǎng)組雌雄間差異不顯著(P0.05),埋棲組雌雄間差異顯著(P0.05)。T值在埋棲和吊養(yǎng)之間差異不顯著(P0.05)。3)對蛤仔卵巢中VTG含量的影響吊養(yǎng)7.4D、7.7D和8.0D組的VTG平均值分別為5106.98±441.2、4879.15±481.1和4265.69±340.2 pg/g;埋棲7.4M、7.7M和8.0M組的VTG平均值依次為5391.18±187.2、4276.99±435.7和3873.18±300.4 pg/g。除了埋棲7.7D與8.0D差異不顯著(P0.05)以外,酸化使卵黃蛋白原含量明顯升高(P0.05),并且吊養(yǎng)組高于埋棲組(P0.05),說明酸化對吊養(yǎng)組的負面影響更大。4、海水酸化對蛤仔17β-HSD8和17β-HSD12的影響1)對17β-HSD8的影響:不同養(yǎng)殖方式和性別對酸化脅迫的響應(yīng)不同。在埋棲組中,酸化使雌性蛤仔性腺中17β-HSD8表達量顯著降低,這說明酸化抑制了卵巢中17β-HSD8的表達,使雌二醇轉(zhuǎn)化為雌酮的能力減弱;使精巢中17β-HSD8表達量顯著升高,這說明酸化使精巢17β-HSD8的表達量升高,使雌二醇轉(zhuǎn)化為雌酮的能力加強,降低了雌二醇在精巢中的表達。在吊養(yǎng)組中,酸化總體使17β-HSD8表達量顯著升高,這說明直接酸化,增加了17β-HSD8的表達,增加了雌二醇轉(zhuǎn)化為雌酮的能力;在雄性中,酸化前期實驗組高于對照組,酸化后期實驗組低于對照組,說明短期脅迫增加17β-HSD8的表達。2)對17β-HSD12的影響:在埋棲組,pH下降0.6的酸化強度,總體上使雌性蛤仔的17β-HSD12表達量升高,這說明酸化增加了17β-HSD12表達,有利于雌酮轉(zhuǎn)化為雌二醇;使雄性蛤仔的17β-HSD12表達量降低,不利于雌酮轉(zhuǎn)化為雌二醇;在吊養(yǎng)組,短期內(nèi)誘導(dǎo)17β-HSD12表達量上升,總體使其表達量下降�？傊�,pH下降0.3-0.6個單位的海水酸化強度對親貝促熟、性腺發(fā)育、蛤仔E2、T和VTG及17β-HSD8和17β-HSD12均有負面影響。埋棲生活方式對蛤仔應(yīng)對海水酸化的危害具有積極作用。本實驗結(jié)果為預(yù)測海洋酸化對海洋貝類性腺發(fā)育的影響提供了重要參考。
【圖文】：

表 2-4 蛤仔親貝促熟期間的水化學(xué)狀況Tab. 2-4 The water chemistry in artificial conditioning parent clam stagepH8.0 pH7.7 pH7 7.93±0.04 7.68±0.05 7.43±0g/L） 7.44±0.61 7.49±0.54 7.33±0） 32.07±0.47 32.07±0.50 32.08±mg/L） 0.060±0.053 0.064±0067 0.091±0mg/L） 0.012±0.004 0.016±0.009 0.016±0ol/L） 1.99±0.60 2.11±0.12 2.95±0換水期間堿度的變化見圖 2-1：在促熟過程中，我們可以看出，隨著 AT 逐漸下降，但 7.7 組的 AT 要稍微高于 8.0 組，而 7.4 組的 AT 呈高于 7.7 組和 8.0 組（P＜0.05）。

圖 2-2 蛤仔親貝促熟期間溫度的變化Fig.2-2 The change of temperature in artificial conditioning parent clam stage程中蛤仔死亡率中死亡率情況見圖 2-3。pH 分別為 7.93±0.04、7.69±0.05 和 7.43±0、44.1%和 32.7%，吊養(yǎng)組依次為 48.5%、55.4%和 46.8%。從不同于埋棲組，且在兩種養(yǎng)殖方式中 7.4 組的死亡率都最低。從不同海水8.0 組的死亡率要高于 7.7 組和 7.4 組；在掛養(yǎng)養(yǎng)殖方式中，，7.7 組
【學(xué)位授予單位】：大連海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S917.4

【參考文獻】

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本文編號：2687908