【摘要】：波紋唇魚(Cheilinus undulatus)屬于大型的珊瑚礁暖水性魚類之一。波紋唇魚的肉質(zhì)富含蛋白質(zhì)、不飽和脂肪酸和多種微量元素,同時(shí)味道鮮美,這使得人們過度捕撈波紋唇魚,一些國(guó)際組織已將波紋唇魚列為瀕危物種。為了保護(hù)和開發(fā)這一種瀕危魚類,我國(guó)將波紋唇魚列為人工繁育對(duì)象,而人工繁育的難點(diǎn)在于雌雄比例失調(diào),針對(duì)這個(gè)問題,本研究探討波紋唇魚性別調(diào)控機(jī)制,為規(guī)模化人工繁育波紋唇魚奠定理論基礎(chǔ)。P450芳香化酶由Cyp19al基因編碼,是將睪酮轉(zhuǎn)化為雌二醇的關(guān)鍵酶。魚類的生殖腺原基具有雌性和雄性發(fā)展的雙向潛力,芳香化酶通過調(diào)節(jié)雌、雄激素的比例進(jìn)而參與調(diào)節(jié)魚類的性別分化及性腺功能的維持。然而對(duì)于社會(huì)性反轉(zhuǎn)魚類的最初“開關(guān)”基因及后續(xù)調(diào)控通路卻知之甚少。找到芳香化酶基因Cyp19al的上游調(diào)控因子,是順藤摸瓜揭示這一過程的可行策略,因此本研究社會(huì)性礁棲魚類波紋唇魚的Cyp19al基因啟動(dòng)子入手開展相關(guān)研究。在硬骨魚當(dāng)中,存在性腺型Cypl9ala和腦型Cypl9alb兩個(gè)芳香化酶基因。Cypl9ala與性別調(diào)控及性腺發(fā)育直接相關(guān);Cypl9alb可能間接影響性別分化。本研究在實(shí)驗(yàn)室前期所獲得的波紋唇魚Cypl9ala與Cypl9alb基因cDNA的基礎(chǔ)上采用Genome walking技術(shù)克隆基因的啟動(dòng)子;使用軟件預(yù)測(cè)其可能的轉(zhuǎn)錄結(jié)合位點(diǎn);然后將啟動(dòng)子插入到雙熒光素酶表達(dá)載體中構(gòu)建重組質(zhì)粒;最后,采用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)啟動(dòng)子活性。本研究獲得了波紋唇魚性腺型Cypl9ala和腦型Cyp19alb基因的啟動(dòng)子序列,長(zhǎng)度分別為1119bp與1632bp。預(yù)測(cè)分析發(fā)現(xiàn)其序列上存在許多轉(zhuǎn)錄元件:CREB,SRY,Sox5,SRF,TFIID,等轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)以及糖皮質(zhì)激素受體(GR),雄激素受體(AR),視黃酸受體(PAR),芳香受體(AhR)和視黃醇受體(PXR)等核受體的結(jié)合位點(diǎn)。在Cyp19alb啟動(dòng)子上預(yù)測(cè)到CpG甲基化結(jié)合位點(diǎn)及雌激素受體(ER),而Cyp19ala啟動(dòng)子都不具備。這些轉(zhuǎn)錄元件可能是波紋唇魚芳香化酶基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控位點(diǎn)。啟動(dòng)子活性初步分析表明,不同濃度的雄激素能夠使Cyp19ala啟動(dòng)子表達(dá)活性提高,而Cyp19alb則無明顯變化。不同濃度的雌激素條件下,Cyp19alb啟動(dòng)子活性存在顯著差異,這與其含有ER有關(guān),而cyp19ala則無明顯變化。本研究為進(jìn)一步揭示波紋唇魚芳香化酶基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
【圖文】：

后形成酮類。逡逑血液中血紅蛋白具有類固醇激素的結(jié)合位點(diǎn)，在雌激素合成過程中起催化作逡逑用。如圖１－３，邋ＣＹＰｓ由氨基酸序列的相似性分為多個(gè)基因／亞基因家族（Ｓｉｉｔｅｒｉｅｔａｌ．，逡逑１９８２）。ＣＹＰ１１、ＣＹＰ１７調(diào)控甾類激素合成從而影響雌激素的形成，而ＣＹＰ１９更逡逑是睪酮轉(zhuǎn)雌二醇的關(guān)鍵工具，這一系列反應(yīng)將對(duì)性別分化產(chǎn)生影響（Ｄａｖｉｄ邋ｅｕｌ．．逡逑１９９８）。逡逑岕？逡逑ｃｖｐｉｉａ｜逡逑ＣＹＰ１７邋ｊ逡逑１７＾５孕試紹＊逡逑ＣＹＰＩ７邋Ｉ逡逑１７＆ＨＳＤｌｔ邐ｊ｜ｌ邋？ＰＨＳＤ邐￡Ｓ；＿Ｓ逡逑雄邋１Ａ：：醉邐Ｚｍ邋ＣＹＰＩ９逡逑圖１－３ＣＹＰ１１、ＣＹＰ１７、ＣＶＰ１９家族調(diào)控甾類激素合成途徑逡逑Ｆｉｇ．１－３邋ＣＶＰｌ邋１．邋ＣＶＰ１７．邋ＣＹＰ１９邋ｆａｍｉｌｙ邋ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｓｔｅｒｏｉｄ邋ｈｏｒｍｏｎｅ邋ｓ＞邋ｎｔｈｅｓｉｓ邋ｐａｔｈｗａｙ逡逑１．２．２芳香化酶的分布逡逑脊椎動(dòng)物（從魚類到鳥類）的芳香化酶廣泛存在腦和性腺等器官組ｔ只中，對(duì)魚逡逑類模式生物進(jìn)行比較總結(jié)，Ｃｙｐｌ９ａｌａ主要在性腺中表達(dá)，腦中含量非常細(xì)微。逡逑３逡逑

邐海南大學(xué)碩士學(xué)位論文邐逡逑１．３芳香化酶的啟動(dòng)子研究概況逡逑１．３．１啟動(dòng)子特點(diǎn)及意義逡逑啟動(dòng)子是位于基因Ｙ端上游區(qū)域的一段ＤＮＡ序列，如圖１－４。它能夠活化逡逑ＲＮＡ聚合酶并且為全酶與模板鏈合成提供導(dǎo)向，啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄。啟動(dòng)子通過其逡逑序列上的轉(zhuǎn)錄結(jié)合元件發(fā)揮基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。它在基因表達(dá)調(diào)控順式元件中的逡逑重要角色，與反式作用因子一類蛋白的相互結(jié)合作用，是其調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄的體逡逑現(xiàn)。通常我們把真核生物的啟動(dòng)子分為三類：ｒＲＮＡ基因啟動(dòng)子（Ｉ），ｍＲＮＡ基逡逑因啟動(dòng)子（ＩＩ），ｔＲＮＡ基因啟動(dòng)子（ＩＩＩ）。ＩＩ型啟動(dòng)子能夠編碼蛋白基因，其功能逡逑相對(duì)復(fù)雜。核心啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)存在一個(gè)ＴＡＴＡ－ｂｏｘ和起始子（Ｉｎｒ）。ＴＡＴＡ－ｂｏｘ是啟逡逑動(dòng)子最具有代表性的組件，該結(jié)構(gòu)內(nèi)富含ＡＴ堿基的序列，長(zhǎng)度為２５－３０ｂｐ，基因逡逑轉(zhuǎn)錄起始的關(guān)鍵所在，是與ＲＮＡ聚合釀ＩＩ識(shí)別結(jié)合核心區(qū)（Ｗａｓｙｌｙｋ邋ｅｔ邋ａｌ．，１９８１：逡逑Ｂａｓｅｈｏａｒｅｔａｌ．，２００４）。但不是每個(gè)基因都具有典型的核心啟動(dòng)子的，研究表明，含逡逑有ＴＡＴＡ框的基因啟動(dòng)子序列不超過半數(shù)。逡逑！邐邋（ＴＡＴＡｆｉ）邐？止盎邐逡逑
【學(xué)位授予單位】：海南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S917.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2687214