【摘要】：脂類是魚類飼料中重要的營養(yǎng)素,高脂飼料導致黃顙魚腸道的脂肪沉積,但是潛在的機制仍不清楚。我們以黃顙魚腸道和腸上皮細胞為研究對象,探討內質網應激、自噬和凋亡介導飼料脂肪誘導的脂肪沉積的機制。研究結果如下:1高脂投喂導致黃顙魚腸道內質網應激、自噬、凋亡和脂質沉積配制三組不同脂肪含量的飼料,脂肪水平分別為6.98%(低脂飼料),11.3%(適量脂飼料)和15.4%(高脂飼料),飼養(yǎng)黃顙魚8周。測定腸道甘油三脂含量、脂代謝酶活和脂代謝、內質網應激、細胞自噬和細胞凋亡的mRNA水平。與低脂組和適量組兩組,高脂組增加甘油三脂含量和脂代謝酶活(6PGD、ME、ICDH和FAS),上調許多關鍵基因的表達水平,包括脂肪合成相關基因(6pgd、acca、fas和srebp 1c)、脂肪分解基因(cpt1、accb、hsla和hslb)、脂肪酸轉運蛋白ifabp、內質網應激基因(grp78、ire1、xbp1、traf2和atf 6)、自噬相關基因(atg1b、lc3a、lc3b和atg3)和凋亡相關基因(baxa、caspase 3a和caspase 3b)。這表明高脂飼料升高脂肪合成、脂肪分解和脂肪酸轉運,誘導內質網應激,激活自噬和凋亡。2內質網應激介導自噬與凋亡緩解脂肪酸誘導黃顙魚腸上皮細胞的脂質沉積為了深入探討飼料脂肪影響黃顙魚腸道脂肪沉積的機制,將分離出的腸粘膜上皮細胞用抑制劑(3-甲基腺嘌呤(3-MA)、4-苯基丁酸(4-PBA)或Ac-DVED-CHO(AC))進行1小時預處理后,在對照溶液或不同濃度的脂肪酸中培養(yǎng)24小時。通過4-PBA預孵育,應用免疫印跡、實時熒光定量、脂合成酶活測定、甘油三脂與脂肪酸含量測定等技術,檢測內質網應激對脂肪酸誘導腸上皮細胞的脂肪沉積的影響;4-PBA預孵育腸上皮細胞,應用實時熒光定量、流式細胞術、激光共聚焦、吖啶橙AO染色、caspase 3酶活測定和Annexin V-FITC/PI染色等技術,檢測內質網應激與自噬、凋亡的相互作用關系;3-MA預孵育腸上皮細胞,應用流式細胞術、激光共聚焦顯微術與透射電鏡、吖啶橙AO染色、MDC與Lyso Tracker雙染、免疫印跡、實時熒光定量PCR、TG含量測定、BODIPY493/503染色、CPT1酶活測定及HSL與ATGL ELISA試劑盒等技術,檢測自噬水平及自噬介導脂肪酸誘導的脂噬水平;Ac-DVED-CHO(AC)預孵育腸上皮細胞,應用免疫印跡、流式細胞術、激光共聚焦顯微術、Annexin V-FITC/PI染色、caspase 3酶活、實時熒光定量和TG含量及CPT1酶活測定的技術,檢測凋亡水平及凋亡介導脂肪酸誘導的β氧化水平。結果顯示,脂肪酸激活內質網應激;內質網應激介導脂肪酸誘導的脂肪沉積,以及自噬和凋亡的激活;自噬介導脂肪酸誘導的脂噬發(fā)生。綜上所述,內質網應激介導脂肪酸誘導的脂肪沉積,自噬和凋亡;自噬與凋亡介導脂肪酸誘導的脂噬與β氧化降低了脂肪沉積。脂肪酸上調脂肪生成、脂肪分解和脂肪酸轉運,誘導內質網應激,激活自噬和凋亡;內質網應激、自噬和凋亡在脂肪誘導的黃顙魚腸粘膜上皮細胞脂肪代謝變化中起著重要的調節(jié)作用。
【圖文】：

第一章 文獻綜述內質網應激的研究進展1 內質網應激及其介導的信號通路研究進展內質網（ER）是一種在真核細胞中具有重要生物合成和信號功能的細胞器網不僅是主要的細胞內 Ca2+儲存場所，與 Ca2+內穩(wěn)態(tài)和 Ca2+介導的信號通路密關，而且它還為分泌或嵌入細胞質膜蛋白質的合成、折疊和修飾提供了環(huán)境，能夠調控脂質代謝（Verkhratsky and Toescu 2003, Marciniak and Ron 2006）。各理和病理條件，包括內質網 Ca2+耗盡（Fu et al 2011）、氧化應激（He et al 200高脂膳食（Kammoun et al 2009b）等，可能導致內質網蛋白折疊負荷和承載力的不平衡，這種情況稱為“內質網應激”（Schr der and Kaufman 2005；Ronalter 2007）。

圖 1.2 內質網應激信號通路與細胞自噬關系示意圖（Verfaillie et al 2010）FIGURE 1.2 Crosstalk between UPR signalling pathways and autophagy (Verfaillie et al 2010)有研究表明，內質網應激可以通過多種途徑誘導細胞自噬，活化的 PERK，IRE1和 Ca2+濃度的升高都可以誘導細胞發(fā)生自噬（Kouroku et al 2007；Maria et al 2007）。Kouroku 等（2007）通過分子干擾試驗發(fā)現，，干擾 PERK-eIF2 通路的表達可以降低PolyQ72 誘導的自噬，這說明 PERK-eIF2 在內質網應激介導的自噬中起著重要作用。Ogata 等（2006）發(fā)現，UPR 反應中的 IRE1 途徑在內質網應激誘導的自噬過程中起著重要作用。通過用衣霉素與胡蘿卜素處理，同時缺失了 PERK，IRE1 和 ATF6基因的 MEFs 片段，發(fā)現只有抑制 IRE1 途徑，自噬才會被降低。并同時發(fā)現了 IRE1通過細胞漿銜接蛋白 TRAF2 相互作用，激活 JNK 調節(jié)細胞自噬（Ogata et al 2006；Kouroku et al 2007；王叢叢 2014）。
【學位授予單位】：華中農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S917.4

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 牟婕;馮文靜;王珊;馮美蘋;毛擁軍;;自噬調控衰老的研究進展[J];中華老年多器官疾病雜志;2019年01期

2 李黎;季漪;李文婷;馬艷霞;李沐涵;吳勉華;;基于細胞自噬的中醫(yī)藥抗腫瘤作用研究進展[J];中華中醫(yī)藥雜志;2019年01期

3 汪艷;;調控自噬在臨床肝病治療性應用的轉化研究[J];肝臟;2019年07期

4 韓蘇夏;蔡夢嬌;;自噬在腫瘤治療策略中的角色[J];西部醫(yī)學;2018年09期

5 周岐鳴;劉洋;季光;宋海燕;;調節(jié)自噬改善非酒精性脂肪性肝病的藥物研究進展[J];中華中醫(yī)藥學刊;2018年10期

6 李曉瓊;何玲玲;李新毅;;自噬與中樞神經系統(tǒng)退行性疾病研究進展[J];中風與神經疾病雜志;2018年10期

7 馬文科;戴舒惠;羅鵬;楊悅凡;費舟;;線粒體自噬的研究進展[J];現代生物醫(yī)學進展;2017年06期

8 付婉;董笛;趙穎;;自噬的相關分子機制[J];中國生物化學與分子生物學報;2017年05期

9 方聰聰;毛善平;董慧敏;劉寶輝;王舜;;線粒體自噬與中樞神經系統(tǒng)疾病關系的研究進展[J];卒中與神經疾病;2017年02期

10 李旭卉;吳習習;張凱;羅海霞;李敏;;線粒體自噬與癌癥關系的研究進展[J];動物醫(yī)學進展;2017年09期

相關會議論文 前10條

1 張興;鄭紅剛;花寶金;;自噬與肺癌[A];第十七屆全國中西醫(yī)結合腫瘤學術大會摘要集[C];2019年

2 肖伊寧;呂佩源;;選擇性自噬的研究進展[A];7th中華醫(yī)學會神經病學分會全國中青年神經病學學術大會暨第十屆全國神經系統(tǒng)感染性疾病與腦脊液細胞學學術大會論文匯編[C];2014年

3 郭云良;;“營養(yǎng)與自噬”淺析[A];第十屆全國中西醫(yī)結合營養(yǎng)學術會議論文資料匯編[C];2019年

4 胡成楓;胡春蘭;陳良標;;自噬在斑馬魚細胞冷應激過程中的作用機制探究[A];2017年中國水產學會學術年會論文摘要集[C];2017年

5 肖伊寧;呂佩源;;選擇性自噬的研究進展[A];中華醫(yī)學會第十七次全國神經病學學術會議論文匯編（下）[C];2014年

6 秦正紅;粱中琴;陶陸陽;黃強;劉春風;蔣星紅;倪宏;邢春根;;自噬在細胞生存與死亡中的作用[A];中國藥理學會第九次全國會員代表大會暨全國藥理學術會議論文集[C];2007年

7 秦正紅;;自噬與腫瘤和神經細胞生存——藥物作用的新靶位[A];全國生化與分子藥理學藥物靶點研討會論文摘要集[C];2008年

8 余慧芬;唐李;李妍;;自噬現象對腫瘤發(fā)生影響的研究進展[A];2017第七屆泛環(huán)渤海生物化學與分子生物學會學術交流會論文集[C];2017年

9 王菲菲;邱學敏;王凌;;自噬對骨代謝的調節(jié)作用[A];第9屆中國中西醫(yī)結合學會婦產科專業(yè)委員會第二次學術會議論文集[C];2017年

10 申森森;李林楠;徐林楠;白玉;劉虎威;;基于氣相色譜-高分辨質譜的饑餓誘導小鼠胚胎成纖維細胞自噬過程的代謝組學研究[A];第21屆全國色譜學術報告會及儀器展覽會會議論文集[C];2017年

相關重要報紙文章 前10條

1 記者 李潔尉　通訊員 周飛;花櫚木通過“自噬”殺死癌細胞[N];科學時報;2011年

2 王建新 主持;“自噬”的快車剛剛啟動[N];醫(yī)藥經濟報;2016年

3 記者 周潔;解密“自噬”，抗癌治病更近一步[N];河北日報;2016年

4 記者 陸琦 見習記者 谷雙雙;細菌通過誘導線粒體自噬求存活[N];中國科學報;2019年

5 本報記者 房琳琳;“自噬機制”帶來對抗衰老新希望[N];科技日報;2016年

6 生命學院;俞立課題組在《科學》發(fā)文揭示自噬調控的重要機制[N];新清華;2012年

7 本報實習生 劉如楠 記者 李晨陽;最新研究揭秘植物是怎樣衰老的[N];中國科學報;2019年

8 本報首席記者 唐聞佳;上海與新科諾獎得主頗有學術緣[N];文匯報;2016年

9 記者 陶婷婷;成功揭示代謝降解調控新機制[N];上�？萍紙�;2013年

10 記者 白毅;浙大二院發(fā)現大氣顆粒污染誘導呼吸道自噬性損傷新機制[N];中國醫(yī)藥報;2015年

相關博士學位論文 前10條

1 張海;鎘通過抑制自噬流和激活Akt-Beclin1通路誘導神經細胞自噬關聯凋亡的機理研究[D];南京師范大學;2019年

2 隋天琪;高爾基體膜蛋白1通過影響自噬調控抗腫瘤免疫應答的機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2019年

3 趙陽;水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）感染與細胞自噬的相關研究[D];南方醫(yī)科大學;2019年

4 張華璐;鋅轉運體Zip7對線粒體自噬的調控作用及分子機制研究[D];天津醫(yī)科大學;2019年

5 張斌;自噬在高碘誘導SH-SY5Y細胞及大鼠海馬組織凋亡中的作用研究[D];天津醫(yī)科大學;2019年

6 李琦;MST1激活JNK/p53通路抑制線粒體自噬調控直腸癌細胞生長的研究[D];天津醫(yī)科大學;2019年

7 許悅;沙門氏菌新型效應蛋白揭示細菌自噬通路機制的研究[D];中國農業(yè)大學;2019年

8 李芮冰;Sirtuin 3通過調節(jié)Bnip3介導的線粒體自噬改善非酒精性脂肪性肝病的機制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2019年

9 徐將;SIRT1/FOXO1介導的自噬對糖尿病腎病的影響及二甲雙胍作用機制研究[D];山東大學;2019年

10 閆冬瑩;錳誘導的α-synuclein蛋白寡聚體與自噬的相互作用對神經細胞損傷的分子機制研究[D];中國醫(yī)科大學;2019年

相關碩士學位論文 前10條

1 張婧婷;JNK促進甲型流感病毒復制的分子機制[D];揚州大學;2019年

2 周鈺奇;硒對金黃色葡萄球菌感染的奶牛乳腺上皮細胞自噬影響的研究[D];揚州大學;2019年

3 余鑫;自噬在機械通氣致大鼠腦組織神經元凋亡中的作用[D];揚州大學;2019年

4 王婷;自噬或鐵死亡協(xié)同的光敏抗腫瘤活性研究[D];南京師范大學;2019年

5 陳興興;草魚細胞中活化的STAT3能通過對Bcl-2進行調控進而緩解自噬[D];南昌大學;2019年

6 凌仕誠;內質網應激介導自噬與凋亡緩解高脂誘導黃顙魚腸道脂肪沉積的研究[D];華中農業(yè)大學;2019年

7 馮婭琳;褐飛虱線粒體自噬相關基因的克隆與功能研究[D];中國計量大學;2018年

8 劉詩語;氯化鑭誘導的神經元氧化應激對JNK相關信號通路活化狀態(tài)和自噬相關基因表達水平的影響[D];中國醫(yī)科大學;2019年

9 周冰倩;自噬在蛋白尿誘導的腎間質纖維化中作用的研究[D];中國醫(yī)科大學;2019年

10 牛佳媛;七氟醚后處理通過IRE1/JNK/beclin1信號通路調節(jié)內質網應激-自噬減輕新生大鼠缺血缺氧性腦損傷[D];中國醫(yī)科大學;2019年

本文編號：2680180