【摘要】：1.MLF通過促進血細胞凋亡來減少WSSV復制MLF在發(fā)育、細胞周期、分化和調(diào)節(jié)RUNX轉(zhuǎn)錄因子方面有著重要的功能。然而,MLF在免疫方面的功能還不是很清楚。在本研究中,我們從日本囊對蝦中鑒定出一種MLF,并命名為日本囊對蝦MLF(MjMLF)。MjMLF全長序列包含1111個核苷酸:包括由816個核苷酸組成的開放閱讀框,其中編碼含有272個氨基酸的MLFIP結(jié)構域。在轉(zhuǎn)錄水平上,MjMLF普遍分布在日本囊對蝦的多種組織中。表達模式分析說明當白斑綜合征病毒刺激日本囊對蝦時,MLF在對蝦肝胰腺和血細胞中上調(diào)表達。RNA干擾實驗和過表達(重組蛋白注射)實驗說明MjMLF能夠抑制白斑綜合征病毒在對蝦體內(nèi)復制。流式細胞技術結(jié)果表明MjMLF能夠促進對蝦血細胞的凋亡。所有實驗結(jié)果揭示MjMLF在日本囊對蝦抵制病毒入侵方面起到非常關鍵的功能。MjMLF作為一種新的調(diào)節(jié)分子參與降低對蝦WSSV復制。2.MLF通過調(diào)節(jié)抗菌肽表達來抵制鰻弧菌的入侵MLF在發(fā)育、細胞周期中有重要作用。在人類中關于MLF的研究發(fā)現(xiàn)是MLF在細胞周期中主要依賴P53發(fā)揮作用。在小鼠中,研究發(fā)現(xiàn)MLF可通過從細胞質(zhì)移位到細胞核發(fā)揮功能。我們發(fā)現(xiàn)MLF能夠抑制日本囊對蝦體內(nèi)的白斑綜合征病毒復制。然而,MLF在細菌免疫方面的功能還不清楚。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)當對蝦受到鰻弧菌刺激時,MjMLF在血細胞、鰓絲和腸組織中上調(diào)表達。MjMLF參與對蝦血淋巴中的細菌清除,有益于對蝦的存活。MjMLF還可參與調(diào)控多種抗菌肽的表達。體外pull-down實驗發(fā)現(xiàn)MjMLF能夠結(jié)合Mj 14-3-3。這些結(jié)果說明MLF在對蝦抵制細菌入侵中扮演著重要角色。
【圖文】：

kx：ＭＬＦ核苷酸全長序列含１１１１邋ｂｐ的核酸，包含有８１６邋ｂｐ的開放閱讀逡逑框。開放閱讀框序列編碼２７２個氨基酸，，預測其相對分子質(zhì)量是３０．６７，等電點逡逑是１０．０４邋（圖２．１Ａ）。kxＭＬＦ蛋白質(zhì)中有一個ＭＬＦＩＰ結(jié)構域（Ｆｉｇ．２．１Ｂ）。氨基酸逡逑序列比對表明對蝦嶺ＭＬＦ與油菜子葉蜂（４６．０４％相似性）、金小蜂（４２．０３％的逡逑相似性）、佛羅里達木蟻（４２．２１％的相似性）和果蠅（３２．６７％的相似性）有很高逡逑的序列相似性（Ｆｉｇ．邋２．２）。序列比對結(jié)果表明人、家鼠、果蠅、油菜子葉蜂、金逡逑小蜂、佛羅里達木蟻和日本囊對蝦的ＭＬＦ在ＭＬＦＩＰ結(jié)構域處是非常保守的（圖逡逑２．２）。逡逑我們收集了不同動物的ＭＬＦ序列做進化樹分析。從圖２．３中可以看出，進逡逑化樹可分為兩亞枝：一枝是節(jié)肢動物，另一枝則是哺乳動物。邱＿ＭＬＦ與黑腹果逡逑蠅、橄欖石蠅和}P小石蠅定位在一個亞枝。結(jié)果表明對蝦kxＭＬＦ是ＭＬＦＩＰ家族逡逑１２逡逑

在ｍＲＮＡ水平上，我們用半定量ＲＴ－ＰＣＲ實驗研究對蝦的組織分布逡逑情況。在正常對蝦的血細胞、心、肝胰腺、鰓絲、胃和腸中都能檢測到逡逑（圖２．４Ａ）。結(jié)果表明Ｖ／ＭＬＦ普遍分布在對蝦的多種組織中。逡逑我們用ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測分析了邋ＷＳＳＶ刺激的對蝦血細胞和肝胰腺中逡逑的表達模式。圖２．４Ｂ結(jié)果顯示在血細胞中，當病毒刺激１２邋ｈ時，ZfＭＬＦ表達顯逡逑著性上升。而在肝胰腺中，表達水平也呈現(xiàn)上調(diào)趨勢，在６邋ｈ到７２邋ｈ表逡逑達水平均呈現(xiàn)上調(diào)趨勢（圖２．４Ｃ）。這些結(jié)果表明，在ＷＳＳＶ刺激的對蝦兩種免逡逑疫組織（血細胞和肝胰腺）中，Ｍ／ＭＬＦ表達能被誘導表達。這些結(jié)果暗示ＭＬＦ逡逑可能參與對蝦的抗病毒免疫。逡逑Ａ邐Ｂ邐Ｃ逡逑ｉｊ邋２５邋ｈｅｍｏｃｙｔｅｓ邐＾邐ｈｅｐａｔｏｐａｎｃｒｅａｓ邐Ｅ３邐Ｎｏｒｍａｌ逡逑５邐ｒ－ｒ－１邐，邐ｓ邋４￣｜邐ＣＤ邋ＰＢＳ逡逑求？２0－邐氣邐Ｅ邋ｐｂｓ＂邐ｒ邐＆邐ａｗｓｓｖ逡逑藝邐ｐＨ邐Ｏ邋ＷＳＳＶ邐０邐３－＾邐－Ｊ－逡逑贏／／１：逡逑卜邐ｒ－ｉｎ邋Ｉｎ邋ｎ邋ｎｌ逡逑ＥＢＢＨＨＢｒａｄＣ（，ｎ邋＾邐ｒ－，邋＼邋ｉｉ邋Ａ邋ｒｉ—邋ｒｉ邋一邋§邋0邋１邋Ｉｆｌ邋１邋１１１邋ｆｌ邋Ｍ邋１邋１Ｗ邋Ｉ邋１ＩＩ邋Ｍｉｌ逡逑ｊ＊．邋ｕ邋Ｉ邋￣邋ｉ邐￣￣邋ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐＾邐ｕ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ逡逑＾邐０邐６邐１２邐２４邐４８邐７２邐￡邐０邐６邐１２邐２４邐４８邐７２逡逑Ｔｉｍｅ邋ｐａｓｔ邋ＷＳＳＶ邋ｃｈａｌｌｅｎｇｅ邋（ｈ）邐Ｔｉｍｅ邋ｐａｓｔ邋ＷＳＳＶ邋ｃｈａｌｌｅｎｇｅ邋（ｈ）逡逑圖２．４．邋Ａｆ／ＭＬ尸在轉(zhuǎn)錄水平上的表達模式分析。（Ａ）
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S945.4

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本文編號：2675583