【摘要】：嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)是自然界中廣泛存在的一種革蘭氏陰性菌,是一種典型的人-獸-魚共患病病原菌,該菌中存在著以AHL為信號(hào)分子的群體感應(yīng)系統(tǒng)(Quorum sensing,QS)1和以AI-2為信號(hào)分子的群體感性系統(tǒng)2(QS2)兩種群體感應(yīng)系統(tǒng),其中,ahy I是信號(hào)分子AHL合成酶的編碼基因,luxS是信號(hào)分子AI-2合成酶的編碼基因,本文研究了嗜水氣單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)對(duì)該菌生物學(xué)特性的調(diào)控作用。利用同源重組原理,構(gòu)建中間為卡那霉素抗性基因,兩側(cè)為luxS基因上下游序列片段的基因敲除質(zhì)粒,將其轉(zhuǎn)入大腸埃希菌SM10(λpir)感受態(tài)細(xì)胞,利用接合將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入嗜水氣單胞菌ATCC7966,通過抗性篩選、PCR和DNA測(cè)序確認(rèn)嗜水氣單胞菌luxS基因缺失突變株。比較野生株和luxS基因缺失突變株生長(zhǎng)速度、AI-2合成、胞外蛋白酶合成及生物膜形成的差異。結(jié)果顯示,與野生株相比,lux S缺失突變株生長(zhǎng)周期延長(zhǎng),基本喪失合成AI-2和胞外蛋白酶的能力;突變株生物膜形成能力降低,生長(zhǎng)24 h時(shí)生物膜形成能力為野生株的14.5%,36 h時(shí)生物膜形成能力為野生株的60.0%,突變株生物膜形成速度明顯比野生株緩慢,結(jié)構(gòu)更為疏松。利用同源重組原理,構(gòu)建中間為氯霉素抗性基因,兩側(cè)為ahyI基因上下游序列片段的基因敲除質(zhì)粒,將構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸埃希菌SM10(λpir)感受態(tài)細(xì)胞,利用接合將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入嗜水氣單胞菌ATCC7966,通過抗性篩選、PCR和DNA測(cè)序確認(rèn)嗜水氣單胞菌ahyI基因缺失突變株。比較野生株和ahyI基因缺失突變株生長(zhǎng)速度、胞外蛋白酶合成及生物膜形成的差異。結(jié)果顯示,與野生株相比,ahyI基因缺失突變株生長(zhǎng)周期延長(zhǎng),ahy I基因突變株胞外蛋白酶的分泌高于野生株,ahyI基因缺失突變株生物膜的形成能力降低,生長(zhǎng)12 h時(shí)生物膜形成能力為野生株的12.7%,24 h時(shí)生物膜形成能力為野生株的31.6%。QS1和QS2對(duì)嗜水氣單胞菌生長(zhǎng)、胞外蛋白酶和生物膜等多種生物學(xué)特性有重要的調(diào)控作用,本研究為進(jìn)一步研究群體感應(yīng)系統(tǒng)在嗜水氣單胞菌致病性中發(fā)揮的作用奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：大連工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S941.4

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