【摘要】：本研究以菲牛蛭(Poecilobdella manillensis)為研究對象,旨綜合飼料學(xué)、酶學(xué)和分子生物學(xué)的研究方法,研究了廣西菲牛蛭和廣東菲牛蛭的遺傳背景,并研究了血液、配合飼料和賴氨酸添加對菲牛蛭生長、抗氧化指標(biāo)、非特異性免疫指標(biāo)、水蛭素活性及水蛭素基因(HM)表達(dá)的影響。主要研究結(jié)果如下:1、基于COⅠ和18S rDNA部分序列分析粵、桂2個(gè)菲牛蛭種群的遺傳多樣性采用PCR擴(kuò)增技術(shù)測定了廣東廣西共35尾菲牛蛭COⅠ和18S rDNA部分序列,并對COⅠ和18S rDNA部分序列進(jìn)行對比分析。結(jié)果顯示:COⅠ基因共檢出9個(gè)變異位點(diǎn),定義單倍型9個(gè);廣西菲牛蛭單倍型多樣性(0.737)和核苷酸多樣性(0.00166)高于廣東菲牛蛭(0.638,0.00119)。18S rDNA基因共檢出1個(gè)變異位點(diǎn),定義單倍型3個(gè);廣東菲牛蛭單倍型多樣性(0.154)和核苷酸多樣性(0.00014)高于廣東菲牛蛭(0.1100,0.0001)。COⅠ基因單倍型之間的遺傳距離在0.0015~0.0077之間,18S rDNA單倍型之間的遺傳距離在0.0009~0.0018之間。COⅠ和18S rDNA優(yōu)勢單倍型廣西所占比例分別為60%和58.6%。結(jié)果表明:廣西菲牛蛭遺傳多樣性水平高于廣東菲牛蛭。2、配合飼料和血液對菲牛蛭水蛭素活性、抗氧化指標(biāo)及非特異性免疫指標(biāo)的影響研究采用生化方法測定了配合飼料組和血液組菲牛蛭水蛭素活性、抗氧化指標(biāo)(SOD、CAT、MDA)和非特異性免疫(AKP、ACP、LSZ)。結(jié)果顯示:配合飼料組水蛭素活性略低于血液組,差異性不顯著(P0.05);配合飼料組腸道超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)活性顯著高于血液組腸道SOD和CAT活性(P0.05),配合飼料組腸道丙二醛(MDA)含量稍低于血液組,配合飼料組嗉囊SOD活性顯著低于血液組(P0.05),CAT活性稍低于血液組,而配合飼料組的嗉囊MDA含量顯著低于血液組(P0.05)。腸道組織中,配合飼料組溶菌酶(LSZ)活性顯著低于血液組(P0.05),而堿性磷酸酶(AKP)和堿性磷酸酶(ACP)活性顯著高于血液組(P0.05);嗉囊組織中,配合飼料組LSZ活性稍低于血液組,而AKP和ACPA稍高于血液組,差異不顯著(P0.05)。研究表明:菲牛蛭能攝食配合飼料,水蛭素活性未受影響;對腸道抗氧化能力有一定的增強(qiáng)作用,在MDA、AKP和ACP含量能達(dá)到或超過血液飼養(yǎng)水平。3、幾種氨基酸的篩選及水蛭素活性的測定以賴氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、�；撬帷⒐劝彼岷徒M氨酸為目標(biāo)氨基酸,分別配制成1g/kg、2g/kg和3g/kg的濃度梯度對菲牛蛭養(yǎng)殖試驗(yàn)。結(jié)果顯示:賴氨酸添加攝食效果最好,其他添加組經(jīng)過第一次攝食后不攝食或少量攝食。水蛭素活性賴氨酸添加組從低濃度組到高濃度組呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,且在添加濃度為2g/kg時(shí),水蛭素活性最高(165.6U/g),且稍高于血液對照組(162.5U/g),其他添加組水蛭素活性無規(guī)律。綜合分析菲牛蛭的攝食情況及水蛭素活性,篩選出賴氨酸進(jìn)行后續(xù)的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)。4、配合飼料中賴氨酸添加對菲牛蛭生長及相關(guān)因子的影響以賴氨酸為目標(biāo)氨基酸,分別配制成0g/kg、0.7g/kg、1.4g/kg、2.1g/kg的濃度梯度,以血液為對照組,對菲牛蛭進(jìn)行為期37d的飼養(yǎng)。采用生物統(tǒng)計(jì)、生化、RT-PCR與熒光定量PCR技術(shù)等方法研究了賴氨酸添加對菲牛蛭生長、抗氧化指標(biāo)、非特異性免疫指標(biāo)、水蛭素活性及水蛭素基因(HM)表達(dá)的影響。結(jié)果顯示:(1)配合飼料中添加賴氨酸后的特定生長率(0.77~0.82)顯著高于不添加組(0.60)(P0.05),添加組增重率(29.76%~32.12%)顯著高于不添加組(22.67%)(P0.05),特定生長率和增重率均顯著低于血液組;添加賴氨酸濃度為1.4g/kg時(shí),特定生長率(0.82)和增重率(32.12%)最高。(2)在腸道和肌肉組織中,未添加組SOD活性顯著高于血液組(P0.05);添加組中隨著賴氨酸濃度的升高,SOD呈“上升-下降”趨勢,添加濃度為1.4g/kg時(shí),SOD酶活性最高,且顯著高于血液組(P0.05);在腸道組織中,當(dāng)賴氨酸添加為1.4g/kg時(shí),CAT含量最高,在肌肉和嗉囊組織中,在濃度為1.4g/kg時(shí),CAT活性與血液組無顯著差異(P0.05)。MDA含量添加組、未添加組和血液組之間不存在顯著差異(P0.05),肌肉組織和嗉囊組織呈現(xiàn)出“高低交錯(cuò)”現(xiàn)象,菲牛蛭MDA含量基本處于平衡狀態(tài)。添加組LSZ、ACP、AKP活性高于血液組,在賴氨酸添加為1.4g/kg時(shí),總AKP酶活性最高和肌肉組織中的AKP酶活性最高,且顯著高于血液對照組(P0.05)。(3)未添加組水蛭素活性和水蛭素基因(HM)相對表達(dá)量顯著低于添加組(P0.05),在賴氨酸添加實(shí)驗(yàn)中,隨著賴氨酸濃度的升高,水蛭素活性和水蛭素基因相對表達(dá)量呈現(xiàn)相同的變化趨勢,先升高后降低;添加濃度為1.4g/kg時(shí),水蛭素活性(285.52±5.68U/g)和水蛭素基因(HM)表達(dá)量最高(0.76±0.03);且和血液組差異不顯著。研究表明:適宜濃度的賴氨酸添加可以有效的提高菲牛蛭的生長、抗氧化能力和免疫功能,并能促進(jìn)水蛭素活性升高和水蛭素基因的表達(dá)。綜合分析,得到菲牛蛭賴氨酸適宜的添加濃度為1.4g/kg。
【圖文】：

與馬尼拉菲牛蛭水蛭素基因 Hm1、Hm2 的同源性分別為 90%、88.6%。黎淵弘等（2011）從廣西菲牛蛭中得到水蛭素基因 cDNA 序列長度為 251 bp，編碼框由 83 個(gè)氨基酸組成，包括 20 個(gè)氨基酸組成的信號肽，63 個(gè)氨基酸組成的成熟肽。廣西菲牛蛭水蛭素基因的氨基酸序列和廣東菲牛蛭、馬尼拉菲牛蛭水蛭素基因的氨基酸序列相比較，同源性分別為 94%、91.8%、84.7%。

與馬尼拉菲牛蛭水蛭素基因 Hm1、Hm2 的同源性分別為 90%、88.6%。黎淵弘等（2011）從廣西菲牛蛭中得到水蛭素基因 cDNA 序列長度為 251 bp，編碼框由 83 個(gè)氨基酸組成，，包括 20 個(gè)氨基酸組成的信號肽，63 個(gè)氨基酸組成的成熟肽。廣西菲牛蛭水蛭素基因的氨基酸序列和廣東菲牛蛭、馬尼拉菲牛蛭水蛭素基因的氨基酸序列相比較，同源性分別為 94%、91.8%、84.7%。
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S917.4

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 曹艷;章群;宮亞運(yùn);呂金磊;楊喜書;;基于線粒體COI序列的中國沿海藍(lán)點(diǎn)馬鮫遺傳多樣性[J];海洋漁業(yè);2015年06期

2 孫學(xué)亮;郭永軍;季延濱;尤宏?duì)?陳成勛;;3種復(fù)方中草藥對中華絨鰲蟹生長和部分抗氧化指標(biāo)的影響[J];經(jīng)濟(jì)動物學(xué)報(bào);2015年02期

3 邱紅;黃文文;侯迎梅;李弋;周歧存;;黃顙魚幼魚的賴氨酸需要量[J];動物營養(yǎng)學(xué)報(bào);2015年10期

4 張艷亮;彭士明;高權(quán)新;張晨捷;施兆鴻;;飼料維生素E水平對云紋石斑魚幼魚生長、營養(yǎng)及免疫指標(biāo)的影響[J];海洋漁業(yè);2015年02期

5 程搏幸;劉飛;郭巧生;史紅專;李蒙蒙;盧昱希;;溫度、密度、喂食周期對菲牛蛭育苗影響的研究[J];中國中藥雜志;2015年06期

6 李玉虎;宋芹芹;張志懷;黃皓;周海龍;相建海;;凡納濱對蝦生長發(fā)育規(guī)律及生長曲線擬合研究[J];南方水產(chǎn)科學(xué);2015年01期

7 李軍;于翔;張健;張濤;龔元;金廣海;;4種水蛭粗提物抗凝活性及凍存時(shí)間對菲牛蛭抗凝活性影響[J];水產(chǎn)科學(xué);2014年09期

8 張士璀;許娜;;動物型溶菌酶研究新進(jìn)展[J];中國海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2014年06期

9 李軍;于翔;龔元;張濤;張健;宋文華;;正交試驗(yàn)法優(yōu)選菲牛蛭飼料配方研究[J];中草藥;2014年06期

10 李源;溫安祥;駱美琳;;谷氨酰胺促泥鰍生長機(jī)理的初步研究[J];飼料工業(yè);2014年02期

本文編號：2671562