【摘要】：無(wú)乳鏈球菌是羅非魚(yú)鏈球菌病的主要病原菌之一,是近年來(lái)導(dǎo)致廣東和海南等羅非魚(yú)主要養(yǎng)殖區(qū)的羅非魚(yú)鏈球菌病爆發(fā)的主因,實(shí)際生產(chǎn)中羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌病常采用抗生素治療,但抗生素治療往往存在藥物殘留和耐藥性等問(wèn)題,所以探索生物防治羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌病是迫在眉睫的,本文意在篩選到一株具有良好無(wú)乳鏈球菌拮抗效果,具有一定的胃腸道耐受性,能夠安全使用的芽孢桿菌,并研究該菌株對(duì)羅非魚(yú)生長(zhǎng)、血清指標(biāo)的影響和對(duì)羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌病保護(hù)率的影響。主要研究結(jié)果如下：1.拮抗芽孢桿菌的篩選本研究通過(guò)牛津杯法篩選對(duì)羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌具有拮抗作用的芽孢桿菌,然后利用16S rDNA測(cè)序鑒定篩選到的候選菌株,再通過(guò)人工模擬胃腸道耐受性試驗(yàn),評(píng)價(jià)比較各候選菌株的抗逆性,并通過(guò)血平板試驗(yàn)和腹腔注射法測(cè)定其對(duì)羅安全性非魚(yú)的。試驗(yàn)結(jié)果表明：篩選到4株具有良好無(wú)乳鏈球菌拮抗作用的芽孢桿菌,再經(jīng)過(guò)耐受性和安全性試驗(yàn),綜合考慮確定解淀粉芽孢桿菌J4進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn),J4在pH為4.0,3.0,2.0的人工胃液中培養(yǎng)4h后相對(duì)存活率分別為94.53%,84.53%,43.24%,在人工腸液培養(yǎng)4h后相對(duì)存活率為97.48%,在0.4%的膽鹽濃度中培養(yǎng)4h后相對(duì)存活率為91.88%,具有良好的胃腸道抗逆性,同時(shí)其安全性試驗(yàn)證實(shí),其不產(chǎn)生溶血素,且試驗(yàn)濃度(最高為1×109cfu/mL)的J4對(duì)羅非魚(yú)安全。2.解淀粉芽孢桿菌J4對(duì)羅非魚(yú)生長(zhǎng)性能和血清指標(biāo)的影響本研究選取體重20g左右健康無(wú)病羅非魚(yú)360尾,隨機(jī)分成4組,分別為BO組,B1組,B2組和B3組,每組設(shè)置3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)30尾魚(yú),BO組飼喂基礎(chǔ)日糧,B1組,B2組和B3組分別飼喂往基礎(chǔ)日糧中添加了1×106、1×107和1×108cfu/g飼料的解淀粉芽孢桿菌J4,試驗(yàn)期為56天,測(cè)定羅非魚(yú)生長(zhǎng)性能相關(guān)指標(biāo),同時(shí)每14天取一次羅非魚(yú)血清樣品,測(cè)定血液指標(biāo)。試驗(yàn)結(jié)果表明：B2組和B3組與對(duì)照組BO比可以顯著提高羅非魚(yú)的增重率和特定生長(zhǎng)率(P0.05),顯著降低羅非魚(yú)的餌料系數(shù)(P0.05),對(duì)肝體比和肥滿度影響不顯著(P0.05),同時(shí)B1組,B2組和B3組之間的增重率、特定生長(zhǎng)率、餌料系數(shù)差異不顯著(P0.05)。B2組和B3組的羅非魚(yú)溶菌酶(LSZ)活性都是從14d開(kāi)始顯著高于對(duì)照組BO(P0.05),并分別在42d和28d時(shí)達(dá)到最大值；對(duì)于血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,從14d開(kāi)始到試驗(yàn)結(jié)束,B2組和B3組均顯著高于對(duì)照組BO(P0.05),分別在42d和28d時(shí)達(dá)到最大值；而B(niǎo)2組和B3組的血清堿性磷酸酶(AKP)活性從28d開(kāi)始顯著高于對(duì)照組B0(P0.05),并在56d內(nèi)隨著時(shí)間的增加而增加；B2組和B3組的血清丙二醛(MDA)含量從14d開(kāi)始顯著低于對(duì)照組BO(P0.05),并都在42d時(shí)降到最低值；B2組和B3組的血清過(guò)氧化氫酶(CAT)活性與對(duì)照組BO差異都不顯著(P0.05)；B2組和B3組之間的各血清指標(biāo)在各時(shí)間點(diǎn)都沒(méi)有顯著差異(P0.05)。所以B2組和B3組提高了羅非魚(yú)的非特異免疫和抗氧化能力,提高了抗病能力,而B(niǎo)1組的血清LSZ活性、AKP活性、SOD活性、MDA含量和CAT活性與對(duì)照組BO相比在各時(shí)間點(diǎn)都沒(méi)有顯著性差異(P0.05)。3.解淀粉芽孢桿菌J4對(duì)羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌病保護(hù)率的影響本研究把飼喂56天后的BO組,B1組,B2組和B3組羅非魚(yú)移動(dòng)到水族箱中,每組3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)10尾羅非魚(yú),再以最適無(wú)乳鏈球菌攻毒濃度對(duì)羅非魚(yú)進(jìn)行腹腔注射,連續(xù)觀察14d,計(jì)算相對(duì)保護(hù)率。試驗(yàn)結(jié)果表明：B2組和B3相對(duì)于對(duì)照組B0顯著降低了平均死亡率(P0.05),羅非魚(yú)的相對(duì)保護(hù)率分別為66.67%和75%,B2和B3組的平均死亡率沒(méi)有顯著性差(P0.05),但B3組相對(duì)于B2組推遲了羅非魚(yú)死亡時(shí)間,B1組平均死亡率和對(duì)照組B0沒(méi)有顯著差異(P0.05),相對(duì)保護(hù)率僅為8.33%。
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S943

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本文編號(hào)：2657154