【摘要】：大黃魚(Larimichthys crocea),隸屬鱸形目,石首魚科,黃魚屬,是我國重要的養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)魚類之一,但近年來細(xì)菌性病害日益頻繁,不僅導(dǎo)致產(chǎn)量縮減,而且影響大黃魚養(yǎng)殖業(yè)的健康及可持續(xù)發(fā)展。干擾素調(diào)節(jié)因子(Interferon regulatory factor)是調(diào)節(jié)干擾素和干擾素刺激基因(ISGs)轉(zhuǎn)錄的蛋白質(zhì),是一類重要的轉(zhuǎn)錄因子家族,在多種生物學(xué)中起重要作用,如宿主的抗細(xì)菌、抗病毒防御、細(xì)胞生長等方面。干擾素調(diào)節(jié)因子IRF4,8和9屬于IRF4-G亞家族,對宿主防御病原體有著重要的作用。鰻弧菌(Vibrio anguillarum)是大黃魚養(yǎng)殖過程中常見的病原菌,能引起致命的出血性敗血癥。本文主要探究了大黃魚干擾素調(diào)節(jié)因子IRF4亞家族中的IRF4、IRF8和IRF9基因的分子特征、蛋白結(jié)構(gòu)、系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系,并利用鰻弧菌懸液刺激和Poly I:C(聚肌胞苷酸)溶液處理,誘導(dǎo)IRF4、IRF8和IRF9在大黃魚脾臟、腎臟和肝臟中的表達(dá),探究lcIRF4、lcIRF8和lcIRF9在大黃魚抗細(xì)菌和抗病毒免疫中的作用。得到的主要結(jié)果如下:1、本文首次研究了大黃魚的IRF4,IRF8和IRF9,得到了lcIRF4、lcIRF8和lcIRF9的CDS序列全長,完整的開放閱讀框分別為1392 bp、1269 bp和1221 bp,對應(yīng)編碼463,422和406個氨基酸。上傳至genebank的登錄號分別為MF446409、MF446410和MF446411。2、經(jīng)過多序列比較分析得到,大黃魚的IRF4、IRF8、IRF9和其它硬骨魚的對應(yīng)氨基酸序列具有高度同一性。lcIRF4、lcIRF8和lcIRF9在N末端都存在一個高度保守的的DBD結(jié)構(gòu)域,含有色氨酸簇。在C端都含有IAD結(jié)構(gòu)域。不同的是,lcIRF4,lcIRF8的N端存在5個間斷的色氨酸殘基,而lcIRF9只存在3個色氨酸殘基。3、系統(tǒng)發(fā)育分析表明,lcIRF4、lcIRF8和lcIRF9屬于對應(yīng)的干擾素調(diào)節(jié)因子,并且其它脊椎動物IRF具有高度序列相似性,lcIRF4與半滑舌鰨、斑紋隱小溕的IRF4序列相似性更高,lcIRF8與大菱鲆的IRF8序列相似性更高,lcIRF9與日本比目魚的IRF9具有更高的序列相似性。4、QT-PCR的結(jié)果表明,lcIRF4、lcIRF8和lcIRF9在9種不同的組織中均有不同水平的組成型表達(dá),lcIRF4在心臟和腎臟中高度表達(dá),而其在肌肉,鰓,肝臟和腸中的表達(dá)非常低。lcIRF8在心臟,鰓,肝臟和腦中高表達(dá),遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其在肌肉、腸道和腎臟中的表達(dá)量。lcIRF9的表達(dá)量在大腦和皮膚中較高,但在脾、腎、肌肉和肝臟中比較低。5、鰻弧菌懸液和Poly I:C溶液感染實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,鰻弧菌和Poly I:C都能在不同程度上誘導(dǎo)lcIRF4、lcIRF8和lcIRF9的表達(dá)。在鰻弧菌刺激下,IRF4在大黃魚脾臟中的誘導(dǎo)表達(dá)較為顯著。lcIRF8在肝臟中的誘導(dǎo)表達(dá)量沒有其在脾臟和腎臟中的誘導(dǎo)表達(dá)量高。lcIRF9在抗細(xì)菌免疫中的誘導(dǎo)表達(dá)沒有l(wèi)cIRF4,lcIRF8那么明顯。在Poly I:C刺激下,IRF9在肝臟中的誘導(dǎo)表達(dá)最為迅速和激烈。肝臟是lcIRF4、lcIRF8和lcIRF9誘導(dǎo)表達(dá)的重要場所。這些結(jié)果表明IRF4、8、9對于大黃魚抗細(xì)菌感染和抗病毒感染至關(guān)重要,并進(jìn)一步增加了我們對硬骨魚中先天免疫中IRF功能的理解,但是它們在免疫應(yīng)答中的具體機(jī)制還需進(jìn)一步的研究。
【學(xué)位授予單位】：浙江海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S917.4

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本文編號：2655069